一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌及应用，将嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶基因导入宿主大肠杆菌中进行串联表达获得嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌，并将该嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌应用于核苷类似物的中试及规模化的绿色转化，采用本发明专利技术的嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶制备阿糖核苷类药物，底物广谱，底物转化率高，产物易于纯化，反应条件温和，产物成分较为单一，副产物较少。少。少。

【技术实现步骤摘要】
一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌及应用


[0001]本专利技术属于生物医药工程
，具体涉及一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌及应用。

技术介绍

[0002]嘌呤核苷磷酸化酶（Purine nucleoside phosphorylase，简称PNPase）广泛存在于真核生物和原核生物中，是嘌呤补救合成途径的关键酶之一，能够可逆地催化嘌呤核苷（或脱氧核苷）发生磷酸化反应生成核糖（或脱氧核糖）
‑1‑
磷酸和对应的嘌呤碱基。细菌的PNPase作用底物广泛，己被用于合成阿糖腺苷，利巴韦林，5
‑
甲基尿苷等一系列核苷类物质。
[0003]尿苷磷酸化酶（UPase）属于嘧啶磷酸化酶，能够可逆性地催化尿苷形成尿嘧啶。已被用于合成2
´‑
氟尿苷，脱氧氟尿苷等，脱氧氟尿苷是一种良好的抗代谢类抗肿瘤药物，在肿瘤细胞内受肿瘤组织中嘧啶核苷磷酸化酶的作用而转化为真正起作用的5
‑
氟尿嘧啶。
[0004]嘌呤核苷磷酸化酶单独作用时可合成腺苷、三氮唑核苷及其类似物；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌，其特征在于：将嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶基因导入宿主大肠杆菌中进行串联表达获得嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌，该嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌为U
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P
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P(BL21(DE3)
‑
pETDuet
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deoD
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udp) Escherichia coli U
‑
P
‑
P(pETDuet
‑1‑
deoD
‑
udp)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年9月10日，保藏编号为CCTCC NO：M 2019706。2.根据权利要求1所述的嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌，其特征在于：所述嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶编码基因源于大肠杆菌，其表达载体包括但不局限于pACYCDuet
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1、pETDuet
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1、pCDFDuet
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1或pRSFDuet
‑
1，所述大肠杆菌为以下任意一种：DH5α、BL21(DE3)或MG1655。3.一种权利要求1或2所述的嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌的构建方法，其特征在于：利用扩增或限制酶克隆或化学合成技术克隆PNPase和UPase基因，并将它们先后克隆到目标质粒中相应位点得到PNPase和UPase可共同高表达的表达载体，再将此表达载体转入大肠杆菌即构建嘌呤/嘧啶核苷磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振宇，张震，刘玉雪，王海磊，刘国生，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：