【技术实现步骤摘要】
一种pH敏感的核酸定量检测方法和装置
[0001]本专利技术涉及核酸检测领域，特别是涉及一种pH敏感的核酸定量检测方法和装置。
技术介绍
[0002]核酸定量检测是一种扩增核酸并通过不同手段监测扩增过程从而得到扩增前核酸初始浓度的技术。普通聚合酶链式反应(PCR)仅能在反应结束后粗略地检测扩增产物的量，即所谓的终点法，不能用于定量检测样品中的核酸。这主要是因为，随着反应的进行，引物和核苷酸原料不断被消耗，最终不能指数扩增。因此，在传统PCR中，扩增产物最终得率与模板起始拷贝数之间不具有线性关系。
[0003]要实现核酸的定量，就要在核酸指数扩增期进行检测。定量PCR的基本原理是：在反应体系中加入已知浓度的核酸模板作为参照，扩增这个参照模板所使用的引物与扩增样本中的靶序列所使用的引物是一致的。通过比较参照模板和靶基因模板所产生的扩增产物量，确定反应开始前反应体系中参照模板和靶基因之间的比例，从而实现定量检测。通常，这个方法中需要对PCR指数增长期间的参照基因及靶基因进行定量。有许多不同的方法可用于检测和定量扩增产物，包...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种pH敏感的核酸定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、使用具有不同的已知初始浓度的多个核酸样本作为多个参照模板，进行核酸扩增反应并检测扩增反应液的实时pH值；S2、根据步骤S1的检测结果获得各参照模板扩增过程中pH值随时间变化的S型曲线，并确定各参照模板的S型曲线在快速扩增期的pH阈值；S3、根据各参照模板的初始浓度和扩增过程到达pH阈值所用的时间，建立初始浓度
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时间标准曲线；S4、将待测样本在与步骤S1相同的条件下进行核酸扩增反应并检测扩增反应液的实时pH值，确定待测样本到达所述pH阈值所用的时间；其中，所述待测样本与所述参照模板的核酸种类和序列相同；S5、根据所述初始浓度
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时间标准曲线和步骤S4确定的时间，确定所述待测样本的初始浓度。2.如权利要求1所述的pH敏感的核酸定量检测方法，其特征在于，所述多个核酸样本为至少5个已知初始浓度的核酸样本。3.如权利要求2所述的pH敏感的核酸定量检测方法，其特征在于，所述多个核酸样本为初始浓度按梯度稀释的核酸样本，优选地，采用对数级变化的梯度；优选地，初始浓度分别为1、10、100、1000、10000、100000copies/ml。4.如权利要求1至3任一项所述的pH敏感的核酸定量检测方法，其特征在于，步骤S1
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【专利技术属性】
技术研发人员：弥胜利，徐菲，陈百良，黄嘉骏，
申请(专利权)人：清华大学深圳国际研究生院，
类型：发明
国别省市：
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