柳杉非生物胁迫下miRNA荧光定量内参基因及其专用引物和应用制造技术

本发明专利技术公开了柳杉非生物胁迫下miRNA荧光定量内参基因及其专用引物和应用，属于植物分子生物学技术领域。本发明专利技术选取10个成熟且表达量较为丰富且稳定的miRNAs及3个常用miRNA的内参基因(5SrRNA，18SrRNA和U6)作为候选基因，并设计了内参基因的实时荧光定量PCR引物。通过5种算法评估候选基因的稳定性，获得了适用于柳杉各非生物胁迫下miRNA荧光定量内参基因，填补了柳杉非生物胁迫条件下没有miRNA荧光定量内参基因的现状，为柳杉非生物胁迫条件下miRNA的相关功能基因的表达定量提供了有力的支持，为柳杉miRNA基因功能研究提供了理论基础。基础。基础。

【技术实现步骤摘要】
Green)提供。
[0016]所述的柳杉干旱胁迫下miRNA荧光定量内参基因在柳杉荧光定量中的应用。
[0017]所述的柳杉干旱胁迫下miRNA荧光定量内参基因的专用引物在柳杉荧光定量中的应用。
[0018]柳杉热害胁迫下miRNA荧光定量内参基因，为novel1和novel16基因，novel1基因的核酸序列如SEQ ID NO.3所示；novel16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0019]所述的柳杉热害胁迫下miRNA荧光定量内参基因的专用引物，
[0020]novel1基因的引物序列如下：
[0021]novel1正向引物：5
’‑
CTTTCCGGATCCTCCCATGC
‑3’
；
[0022]novel1反向引物：由试剂盒miRcute miRNA qPCR Detection Kit(SYBR Green)提供；
[0023]novel16基因的引物序列如下：
[0024]novel16正向引物：5
’‑
GCGTTTTTCCAAT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.柳杉非生物胁迫下miRNA荧光定量内参基因，其特征在于，所述非生物胁迫包括干旱胁迫、热害胁迫、盐胁迫和低温胁迫；柳杉干旱胁迫下miRNA荧光定量内参基因为novel16、U6和pab
‑
miR159a基因；柳杉热害胁迫下miRNA荧光定量内参基因为novel1和novel16基因；柳杉低温胁迫下miRNA荧光定量内参基因为cln
‑
miR6725和novel16基因；柳杉盐胁迫下miRNA荧光定量内参基因为novel16、cln
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miR6725、pab
‑
miR395b和5SrRNA基因。所述novel16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述pab
‑
miR159a基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述novel1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述cln
‑
miR6725基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述pab
‑
miR395b基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述5SrRNA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。2.检测权利要求1所述的柳杉非生物胁迫下miRNA荧光定量内参基因的专用引物，其特征在于，novel16基因的引物序列如下：novel16正向引物：5
’‑
GCGTTTTTCCAATACCTCCTATACC
‑3’
；novel16反向引物：由miRNA荧光定量PCR试剂盒提供；U6基因的引物序列如下：U6正向引物：5
’‑
ACAGAGAAGATTAGCATGGCC
‑3’
；U6反向引物：5
’‑
GACCAATTCTCGATTTGTGCG
‑3’
；pab
‑
miR159a基因的引物序列如下：pab
‑
miR159a正向引物：5
’‑
CGTTGGTTTGAAGGGAGCTCTAC
‑3’
；pab
‑
miR159a反向引物：由miRNA荧光定量PCR试剂盒提供；novel1基因的引物序列如下：novel1正向引物：5
’‑
CTTTCCGGATCCTCCCATGC
‑3’
；novel1反向引物：由miRNA荧光定量PCR试剂盒提供；cln
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：徐进，朱李娟，杨俊杰，张莹婷，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：