一种大规模快速分离纯化rhTNK-tPAI/II型的方法技术

本发明专利技术属于蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种大规模快速分离纯化rhTNK

【技术实现步骤摘要】
一种大规模快速分离纯化rhTNK
‑
tPAI/II型的方法


[0001]本专利技术属于蛋白分离纯化
，具体涉及一种大规模快速分离纯化rhTNK
‑
tPAI/II型的方法。

技术介绍

[0002]TNK
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tPA是迄今为止最安全有效且使用最方便的溶栓药，国内上市的第一代重组天然t
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PA类产品，即阿替普酶，完全依赖进口，商品名“爱通立”，50mg/支。而采用大肠杆菌表达的第二代t
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PA类产品，即瑞替普酶，由山东阿华生产的“瑞通立”和北京爱德药业开发的“派通欣”分别于2007年和2010年获准上市。而广州铭康生物工程有限公司生产的第三代t
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PA类产品—重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂(rhTNK
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tPA，商品名：铭复乐)，是国际最新一代溶血栓药物，填补国内空白，具有开通率高、出血率低、使用便捷、不需要冷链运输等诸多优势，也是目前唯一可以单次静脉推注的溶栓药品种，更加适合急救，使得溶栓治疗在院外进行成为可能。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大规模快速分离纯化rhTNK
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tPA I/II型的方法，其特征在于，包含以下步骤：S1、将rhTNK
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tPA原液经注射用水稀释4～8倍，获得稀释后的rhTNK
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tPA原液；S2、用平衡缓冲液A液平衡Lysine HyperD层析柱后，将步骤S1所得稀释后的rhTNK
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tPA原液上样，上样后再用平衡缓冲液A进行后平衡，平衡后用洗脱液a进行2CV线性洗脱，洗脱过程出现两个峰时，分段收集I型目标峰和II型目标峰；S3、采用SDS
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PAGE法检测S2目标峰收集液中rhTNK
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tPA I型或II型的比例，选择比例＞95％的收集液再分别进行下一步层析；S4、用平衡缓冲液B平衡Sephadex G
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25层析柱后，将步骤S3得到的rhTNK
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tPA I型或rhTNK
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tPA II型收集液直接上样，上样体积为20～30％CV，以洗脱液b进行洗脱，收集目标峰，即得到rhTNK
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tPA I型原液或rhTNK
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tPA II型原液；S5、将步骤S4收集到的rhTNK
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tPA I型原液或rhTNK
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tPA II型原液进行稀配，用洗脱液b稀释至蛋白浓度0.3mg/ml后，采用10ml西林瓶进行除菌灌装、冻干、轧盖，装量均为0.3mg/支，即得到rhTNK
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tPA I型或rhTNK
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tPA II型冻干成品；S6、采用紫外检测法检测冻干成品的蛋白含量，SDS
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PAGE...

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂花，卢俊裕，王森，
申请(专利权)人：广州铭康生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：