玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建与应用。本发明专利技术通过碳二亚胺法将绿色量子点与抗ZEN单克隆抗体偶联、橙红色量子点与抗OTA单克隆抗体结合，制备出两种免疫荧光探针；通过碳二亚胺法合成的玉米赤霉烯酮完全抗原ZEN

【技术实现步骤摘要】
玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建与应用


[0001]本专利技术涉及有害物质检测
，具体涉及一种玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建与应用。

技术介绍

[0002]真菌毒素是一大类由丝状真菌产生的具有毒性的次生真菌代谢产物。当摄入超过一定浓度的真菌毒素时，会引起一种称为真菌毒素中毒的毒性反应，具有致畸性、致癌性和致突变性。
[0003]玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）是一种由镰刀菌属禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌产生的次生代谢产物，严重污染玉米、小麦、高粱等重要农作物。ZEN具有高雌激素作用，有较强生殖毒性和致畸作用，在人体和动物体生殖发育、细胞增殖和器官功能等方面有极大的危害。
[0004]赭曲霉毒素（Ochratoxin, OT）主要是由曲霉属和青霉属产生的有毒次生代谢产物，OTA 是赭曲霉毒素中毒性最强、分布最广、对农产品污染最严重的霉菌毒素。OTA 广泛存在于农产品中，还可以污染各种商品（如葡萄酒，面包和肉制品），OTA可以在死亡的宿主真菌内存活，并在人体内有长达35天的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）免疫原的合成分别采用肟化法和碳二亚胺法合成免疫原玉米赤霉烯酮完全抗原ZEN
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BSA和赭曲霉毒素A完全抗原OTA
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BSA作为免疫原；（2）单克隆抗体的制备分别以所述ZEN
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BSA和OTA
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BSA作为免疫原，采取皮下多点注射的方式免疫6～8周龄的雌性Balb/c小鼠，免疫剂量为30μg/只；免疫间隔14天，四免后剪尾采血，间接ELISA测定免疫小鼠血清效价，竞争ELISA测定免疫鼠多抗血清的敏感性；从中选取敏感性最好的免疫小鼠脾脏进行细胞融合，经3～5轮亚克隆制备阳性杂交瘤细胞株，体内诱生腹水制备抗ZEN 单克隆抗体和抗OTA单克隆抗体；（3）免疫荧光探针的合成以EDC 法分别合成以绿色ZnCdSe/ZnS量子点标记的抗ZEN单克隆抗体以及以橙红色ZnCdSe/ZnS量子点标记的抗OTA单克隆抗体；（4）完全抗原的合成通过碳二亚胺法合成的玉米赤霉烯酮完全抗原ZEN
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OVA和赭曲霉毒素A完全抗原OTA
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OVA作为包被原；（5）将玉米赤霉烯酮完全抗原ZEN
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OVA和赭曲霉毒素A完全抗原OTA
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OVA同时包被在具有高结合力的黑色微量滴定板单个孔中，建立同时定量检测两种真菌毒素的多重荧光免疫分析体系。2.根据权利要求1所述的玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，筛选制得抗ZEN 单克隆抗体mAb A1和抗OTA单克隆抗体mAb A2。3.根据权利要求2所述的玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，以绿色量子点与mAb A1偶联制备出anti
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ZEN
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mAb
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QDs，以橙红色量子点与mAb A2结合制备出anti
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OTA
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mAb
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QDs。4.根据权利要求1所述的玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测体系的构建方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，首免时免疫原与弗氏完全佐剂混合乳化；加强免疫与弗氏不完全佐剂混合乳化。5.一种用于同时检测玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的双重荧光免疫检测试剂盒，含有包被微量滴定板：以权利要求1中所述玉米赤霉烯酮完全抗原ZEN
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OVA和赭曲霉毒素A完全抗原OTA
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OVA作为包被原包被的黑色96...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉梅，周景明，王爱萍，刘占祥，刘燕凯，祁艳华，丁培阳，朱习芳，丁梦浩，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：