一种直接竞争ELISA法快速检测AFB1的方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种直接竞争ELISA法快速检测AFB1的方法及其试剂盒，属于黄曲霉素B1检测领域。本发明专利技术成功制备了抗原和单克隆抗体，并建立了直接竞争ELISA法，该方法能检测木薯粉和木薯制品如木薯饼干、木薯蛋糕、木薯粉条、木薯面条等样品中的AFB1，也能检测其他粮食样本中的AFB1。该方法具有灵敏度高、操作简单、快速、准确、可批量检测样本等特点，易于被企业和基层检测人员掌握和应用。该检测方法为食品中AFB1污染筛查提供快速检测技术，为食品的加工利用和产业化推广提供理论依据和技术支撑。利用和产业化推广提供理论依据和技术支撑。

A direct competitive ELISA method for rapid detection of AFB1 and its kit

【技术实现步骤摘要】
一种直接竞争ELISA法快速检测AFB1的方法及其试剂盒


[0001]本专利技术涉及黄曲霉素B1检测领域，具体涉及一种直接竞争ELISA法快速检测AFB1的方法及其试剂盒。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素(Aflatoxins)是黄曲霉菌及曲霉寄生菌族类产生的一类结构类似物的总称，在各种粮食、食品、和饲料中广泛存在，且理化性质稳定，现有的农业技术和食品加工工艺无法避免和消除污染。其中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)毒性和“三致”(致癌、致畸、致突变)均居首位。欧盟规定AFB1含量不得高于2μg/kg，我国国家标准规定粮食中AFB1含量不得超过5μg/kg，特殊膳食用食品不得超过0.5μg/kg(GB 2761
‑
2017)。
[0003]木薯是一种重要的块根粮食作物，世界木薯全部产量的65％左右用于人类食物。中国是世界木薯第一进口大国，我国现行国家标准GB 5009.22
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2016第五法中AFB1在薯干中的检出限是5μg/kg。因此，制备抗原和单克隆抗体，利用ELISA抗原抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种直接竞争ELISA法快速检测AFB1的方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1、样本处理：将样本进行烘干粉碎，过筛后准确称取样本，每克样本用5ml 70％甲醇水溶液，加样本质量10％质量的氯化钠提取，若样本不含油脂，取上清液2倍稀释后检测，若样本含油脂，取上清液加入正己烷，所述上清液和正己烷的体积比为1:0.8，震荡离心后取下层上清液2倍稀释后检测；S2、建立标准曲线：选取0.05ng/ml抑制率50％以上、OD
450
值最接近2.0的AFB1抗体和AFB1
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HRP酶标抗原稀释倍数作为效价，将标准品浓度倍比稀释进行竞争ELISA，以AFB1标准品浓度的对数值为横坐标，以吸光度值的logit值为纵坐标，建立ELISA标准曲线，获得线性回归方程和相关系数；S3、检测：测定稀释后上清液的OD
450
并计算吸光度值的logit值，从建立的标准曲线中得出样本的AFB1含量。2.根据权利要求1所述的一种直接竞争ELISA法快速检测AFB1的方法，其特征在于，步骤S2中所述的AFB1抗体采用以下方法制备：S21、制备抗原：合成黄曲霉素B1肟化物AFB1.O，将AFB1.O与载体蛋白BSA、OVA和HRP分别进行偶联；S22、制备抗体：用AFB1
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BSA作为免疫原皮下多点注射免疫Balb/...

【专利技术属性】
技术研发人员：余厚美，张振文，李其铸，王琴飞，林立铭，徐缓，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：