一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，包括步骤：将母乳定量滴于干血斑卡片固定的斑点范围内，干燥制成干乳斑，干乳斑经干血斑提取系统提取，用液相色谱‑质谱联用仪分析，采用外标法测定。本发明专利技术方法将母乳采用专用卡片收集干乳斑样本，便于运输保存，使用自动萃取仪‑串联液相色谱‑串联质谱法（DBS‑LC‑MS法），省去繁琐的检测前处理，且不需使用昂贵的同位素内标，即能达到准确测定母乳中游离Omega‑3脂肪酸和游离Omega‑6脂肪酸，该检测方法简单、快速、准确、检测成本低，以期为开展泌乳期母婴个性化膳食摄入研究提供科学依据。

【技术实现步骤摘要】
一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法
本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法。
技术介绍
母乳是婴儿最理想的天然食品，母乳中含有3％-5％的脂肪，是婴儿营养的重要组成，可为婴幼儿生长发育提供45％～60％的能量，并且母乳脂肪酸作为生物活性物质影响婴儿中枢神经系统发育，尤其是Omega-3脂肪酸和Omega-6脂肪酸等多不饱和脂肪酸。目前行业内对母乳中游离Omega-3脂肪酸和游离Omega-6脂肪酸的检测一般使用气相色谱-串联质谱法(GC-MS)，该方法具有高选择性，高特异性和高灵敏度等优点。但由于GC-MS法存在母乳样本在运输途中十分不便，样本用量大，检测方法前处理步骤比较繁琐，前处理步骤包括游离脂肪酸的提取，游离脂肪酸的固相萃取柱净化，游离脂肪酸的甲酯化，GC-MS测定等，而且为了消除基质效应需要添加昂贵的同位素内标，检测时间长，检测成本高，难以适用于大样本的乳母和婴儿人群的健康监测需要。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，该方法简单、快速、准确、检测成本低。本专利技术是通过以下技术方案实现：一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，包括如下步骤：将母乳定量滴于干血斑卡片固定的斑点范围内，干燥制成干乳斑，干乳斑经干血斑提取系统提取，用液相色谱-质谱联用仪分析，采用外标法测定。本专利技术所述的游离脂肪酸为游离Omega-3脂肪酸和游离Omega-6脂肪酸，具体可以为α-亚麻酸(ALA)、二十二碳六烯酸(DHA)、(7,10,13,16,19)二十二碳五烯酸(DPAn-3)、二十碳五烯酸(EPA)、亚油酸(LA)、γ-亚麻酸(GLA)、11,14-二十碳二烯酸(EDA)、二十碳三烯酸(DGLA)、花生四烯酸(二十碳四烯酸)(AA)、7,10,13,16-二十二碳四烯酸(AdA)、(4,7,10,13,16)二十二碳五烯酸(DPAn-6)等。优选的，所述干燥的时间为2-4小时。优选的，所述干血斑提取系统中采用的萃取液为乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇中的一种或几种，更优选为乙腈。为保证充分萃取，优选的，所述萃取液与母乳的体积比为(3-5)：2。优选的，所述液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以2.5-10mmol/L乙酸铵溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为0.2-0.5ml/min；柱温为25-45℃；梯度洗脱程序如下：时间min流动相A％流动相B％04060140604.529872987.14060104060。优选的，所述质谱条件为：电离方式：电喷雾正离子模式；检测方式：多反应检测MRM；气帘气压力：35psi；离子喷雾电压：-4500V；温度：650℃；雾化气：50psi；辅助加热气：50psi。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术提供了一种通过干乳斑测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，将母乳采用专用卡片收集干乳斑样本，便于运输保存，使用干血斑提取系统-串联液相色谱-串联质谱法(DBS-LC-MS法)，省去繁琐的检测前处理，且不需使用昂贵的同位素内标，即能达到准确测定母乳中游离Omega-3脂肪酸和游离Omega-6脂肪酸，该检测方法简单、快速、准确、检测成本低，以期为开展泌乳期母婴个性化膳食摄入研究提供科学依据。本专利技术通过对干乳斑中游离Omega-3脂肪酸和游离Omega-6脂肪酸的含量测定方法进行线性、精密度、耐用性试验(稳定性)、专属性试验(空白)、检出限、定量限、准确度(回收率)试验、方法对比试验，证明该含量测定方法科学有效，能对干乳斑的游离Omega-3脂肪酸和游离Omega-6脂肪酸含量起到质量控制的目的。附图说明图1为空白色谱图；图2为对照色谱图；图3为流动相为乙酸铵溶液-甲醇的色谱图；图4为流动相为甲酸铵溶液-乙腈的色谱图；图5为流动相乙酸铵溶液-乙腈的色谱图。具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术，以下实施例为本专利技术具体的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受下述实施例的限制。实施例1：一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法1仪器干血斑提取系统：DBS-MS500(CAMAG，瑞士)；液相色谱-质谱联用仪：LC-30A型液相色谱仪(SHIMADZU，日本)串联QTRAP4500型质谱仪(ABSCIEX，美国)；XP205型电子天平(MettlerToledo，瑞士)。2试剂试剂：一级用水；乙腈(色谱纯)；乙酸铵(LC-MS)；异丙醇(色谱纯)；甲酸(LC-MS)。对照品如表1：表1名称厂家批号规格α-亚麻酸(ALA)ANPEL91620050100mg二十二碳六烯酸(DHA)SupelcoFN030320060.5mL(500μg/mL)(7,10,13,16,19)二十二碳五烯酸(DPAn-3)ANPELF4430010100mg二十碳五烯酸(EPA)ANPELH0660050100mg亚油酸(LA)SIGMABCCC25975mL(＞98％)γ-亚麻酸(GLA)ANPELY1320020100mg11,14-二十碳二烯酸(EDA)ANPELX2810010100mg二十碳三烯酸(DGLA)ANPELU5260010100mg花生四烯酸(二十碳四烯酸)(AA)ANPEL96080010100mg7,10,13,16-二十二碳四烯酸(AdA)NU-CHEKU-83A-JY9-D100mg(4,7,10,13,16)二十二碳五烯酸(DPAn-6)NU-CHEKU-102A-A2-E10mg3分析方法3.1仪器条件与参数：3.1.1干血斑提取系统条件干血斑卡片：AHLSTROMMUNKSJOAutoCollectColor；萃取液：乙腈；萃取体积：40μL；定量环：约3.8μL(0.18mm*150mm)。3.1.2液相色谱条件本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将母乳定量滴于干血斑卡片固定的斑点范围内，干燥制成干乳斑，干乳斑经干血斑提取系统提取，用液相色谱-质谱联用仪分析，采用外标法测定。/n

【技术特征摘要】
1.一种测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将母乳定量滴于干血斑卡片固定的斑点范围内，干燥制成干乳斑，干乳斑经干血斑提取系统提取，用液相色谱-质谱联用仪分析，采用外标法测定。


2.根据权利要求1所述的测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，其特征在于，所述游离脂肪酸为游离Omega-3脂肪酸和游离Omega-6脂肪酸。


3.根据权利要求1所述的测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，其特征在于，所述干燥的时间为2-4小时。


4.根据权利要求1所述的测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，其特征在于，所述干血斑提取系统中采用的萃取液为乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇中的一种或几种，优选乙腈。


5.根据权利要求4所述的测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，其特征在于，所述萃取液与母乳的体积比为（3-5）：2。


6.根据权利要求1所述的测定母乳中游离脂肪酸含量的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏昭仑，叶少文，汤冰璇，贺瑞坤，张旭光，殷光玲，
申请(专利权)人：汤臣倍健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44