一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法技术

本发明专利技术公开了一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，属于药物残留检测技术领域，包括以下步骤：S1提供待检测牛奶样品、待检测奶粉样品、牛奶空白样品、奶粉空白样品、酸化乙腈；S2均质提取所述待检测牛奶样品和待检测奶粉样品中的目标化合物；S3分别对所述提取液一、提取液二进行净化处理；S4梯度洗脱处理；S5超高效液相色谱‑串联质谱仪检测处理；S6对所述5种抗病毒药物的标准曲线、相关系数、检测限和定量限进行检测计算；S7对所述5种抗病毒药物的加标回收率及相对标准偏差RSD进行计算。本发明专利技术提出的抗病毒药物残留检测方法，操作简单、灵敏度高、选择性好，适用于牛奶和奶粉中抗病毒类药物残留的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法
本专利技术属于药物残留检测
，具体涉及一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法。
技术介绍
为确保奶制品的食用安全，需对牛奶和奶粉中的抗病毒药物残留进行检测分析，通过检测以评估牛奶和奶粉各指标是否复合食品健康标准。当下的药物残留检测方法在对牛奶和奶粉中的抗病毒药物进行检测时，操作不便、灵敏度低、选择性和适用性不佳，不能很好的对牛奶和奶粉中抗病毒类药物残留的进行分离、识别以及快速检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，包括以下步骤：S1提供待检测牛奶样品、待检测奶粉样品、牛奶空白样品、奶粉空白样品、酸化乙腈、无水硫酸镁、氯化钠；S2均质提取所述待检测牛奶样品和待检测奶粉样品中的目标化合物；S21对待检测牛奶样品中的目标化合物进行提取，得到混合液一；S22对待检测奶粉样品中的目标化合物进行提取，得到混合液二；S23提取混合液一、混合液二中的上清液，分别标记为提取液一、提取液二，备用；S3分别对所述提取液一、提取液二进行净化处理，得到标准溶液一、标准溶液二；S31移取2ml提取液一加至塑料离心管中，涡旋混匀1min，使用离心机离心处理3min后，吸取上清液过微孔滤膜，获得标准溶液一；S32移取2ml提取液二加至塑料离心管中，涡旋混匀1min，使用离心机离心处理3min后，吸取上清液过微孔滤膜，获得标准溶液二；S4对所述标准溶液一、标准溶液二进行梯度洗脱处理；S5分别对洗脱处理后的标准溶液一和标准溶液二，进行超高效液相色谱-串联质谱仪检测处理，检测到5种抗病毒药物；所述串联质谱仪的运行条件包括：(1)所述串联质谱仪选用电喷雾离子源ESI，离子源温度为550℃；电喷雾电压为5500V；(2)所述串联质谱仪采用多反应监测MRM的检测方式；气帘气压力为35psi、碰撞气压力为9psi、雾化器压力为55psi、辅助气压力为60psi；(3)所述串联质谱仪采用正离子模式进行扫描；入口电压为10.0V、碰撞室出口电压为6V；5种抗病毒药物分别为金刚烷胺、咪喹莫特、奥司他韦、美金刚和金刚乙胺；S6对所述5种抗病毒药物的标准曲线、相关系数、检测限和定量限进行检测计算；S61在牛奶空白样品中添加一系列质量浓度的提取液一，以提取液一的质量浓度为横坐标，以质谱定量峰面积为纵坐标绘制标准曲线；S62在奶粉空白样品中添加一系列质量浓度的提取液二，以提取液二的质量浓度为横坐标，以质谱定量峰面积为纵坐标绘制标准曲线；S63以信噪比S/N＝3确定检测限，以信噪比S/N＝10确定定量限，根据标准曲线分别计算5种抗病毒药物的相关系数、检测限和定量限；S7对所述5种抗病毒药物的加标回收率及相对标准偏差RSD进行计算：S71按低、中高、高三种添加水平将标准溶液一加入牛奶样品中，每种添加水平平行测定6次，计算5种抗病毒药物的平均加标回收率和相对标准偏差；S72按低、中高、高三种添加水平将标准溶液二加入奶粉样品中，每种添加水平平行测定6次，计算5种抗病毒药物的平均加标回收率和相对标准偏差。作为一种优选的实施方式，取10ml醋酸加至乙腈中，并定容至1L得到所述酸化乙腈。作为一种优选的实施方式，称取10g牛奶样品置于50mL的离心管中，依次加入20mL酸化乙腈、5g无水硫酸镁和2g氯化钠，震荡处理1min后，使用离心机离心处理3min，得到混合液一；和/或，称取2g奶粉样品置于50mL离心管中，加10mL水进行涡旋混匀，静置30min，依次加入20mL酸化乙腈、5g无水硫酸镁和2g氯化钠，震荡处理1min后，使用离心机离心处理3min，得到混合液二。作为一种优选的实施方式，所述离心机的工作参数为5000r/min；加入无水硫酸镁和氯化钠时，随着溶液中盐浓度增大，蛋白质沉淀析出进行脱水盐析处理。作为一种优选的实施方式，所述净化处理采用QuEChERS技术；所述塑料离心管中含有200mg无水硫酸镁、50mgPSA和50mgC18；通过无水硫酸镁、PSA、C18吸附杂质以进行除杂净化。作为一种优选的实施方式，所述梯度洗脱处理条件包括：(1)梯度洗脱的流动相采用0.1％甲酸水作为A相、乙腈作为B相；(2)梯度洗脱的流速为0.3mL/min。作为一种优选的实施方式，所述超高效液相色谱的运行条件包括：(1)所述超高效液相色谱选用ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱；C18色谱柱的规格为2.1mm×150mm，1.7μm、C18色谱柱的柱温为40℃；(2)所述超高效液相色谱的进样量为2μL。作为一种优选的实施方式，C18色谱柱的填料孔径为1.7μm；C18色谱柱的内径为2.1mm，柱长为150mm。作为一种优选的实施方式，采用正离子模式进行扫描，结合多反应监测MRM模式进行检测，所述洗脱处理后的标准溶液一和标准溶液二经高效液相色谱-串联质谱仪检测处理，溶液中的5种目标化合物在所述C18色谱柱上分离，即得到5种抗病毒药物和金刚烷胺同位素的离子色谱图。作为一种优选的实施方式，牛奶样品中，所述三种添加水平分别为5μg/kg、10μg/kg和50μg/kg；奶粉样品中，所述三种添加水平分别为25μg/kg、50μg/kg和250μg/kg。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、该牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，建立了一个测定牛奶和奶粉中金刚烷胺、咪喹莫特、奥司他韦、美金刚、金刚乙胺这五种抗病毒类药物的残留体系，实现五种抗病毒类药物的分离、识别和检测；2、该牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，通过在满足超高效液相色谱条件、梯度洗脱条件和串联质谱条件这三个条件下进行检测，根据所得到色谱图中峰高的不同，提供目标化合物的定性定量分析依据，从而识别得到5种抗病毒药物；3、该牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，通过计算平均回收率和相对标准偏差，得出加标平均回收率接近100％，相对偏差小，说明本专利技术提出的检测方法选择性和适用性好，可实现于牛奶和奶粉这两种基质中，对金刚烷胺、咪喹莫特、奥司他韦、美金刚和金刚乙胺这五种化合物残留的快速检测；综上，本专利技术提出的抗病毒药物残留检测方法，操作简单、灵敏度高、选择性好，适用于牛奶和奶粉中抗病毒类药物残留的快速检测。附图说明图1为本专利技术牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法的流程图；图2为本专利技术金刚烷胺-d15的离子色谱图；图3为本专利技术金刚烷胺的离子色谱图；图4为本专利技术咪喹莫特的离子色谱图；图5为本专利技术奥司他韦的离子色谱图；图6为本专利技术美金刚的离子色谱图；图7为本专利技术金刚乙胺的离子色谱图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1提供待检测牛奶样品、待检测奶粉样品、牛奶空白样品、奶粉空白样品、酸化乙腈、无水硫酸镁、氯化钠；/nS2均质提取所述待检测牛奶样品和待检测奶粉样品中的目标化合物；/nS21对待检测牛奶样品中的目标化合物进行提取，得到混合液一；/nS22对待检测奶粉样品中的目标化合物进行提取，得到混合液二；/nS23提取混合液一、混合液二中的上清液，分别标记为提取液一、提取液二，备用；/nS3分别对所述提取液一、提取液二进行净化处理，得到标准溶液一、标准溶液二；/nS31移取2ml提取液一加至塑料离心管中，涡旋混匀1min，使用离心机离心处理3min后，吸取上清液过微孔滤膜，获得标准溶液一；/nS32移取2ml提取液二加至塑料离心管中，涡旋混匀1min，使用离心机离心处理3min后，吸取上清液过微孔滤膜，获得标准溶液二；/nS4对所述标准溶液一、标准溶液二进行梯度洗脱处理；/nS5分别对洗脱处理后的标准溶液一和标准溶液二，进行超高效液相色谱-串联质谱仪检测处理，检测到5种抗病毒药物；/n所述串联质谱仪的运行条件包括：/n(1)所述串联质谱仪选用电喷雾离子源ESI，离子源温度为550℃；电喷雾电压为5500V；/n(2)所述串联质谱仪采用多反应监测MRM的检测方式；气帘气压力为35psi、碰撞气压力为9psi、雾化器压力为55psi、辅助气压力为60psi；/n(3)所述串联质谱仪采用正离子模式进行扫描；入口电压为10.0V、碰撞室出口电压为6V；/n5种抗病毒药物分别为金刚烷胺、咪喹莫特、奥司他韦、美金刚和金刚乙胺；/nS6对所述5种抗病毒药物的标准曲线、相关系数、检测限和定量限进行检测计算；/nS61在牛奶空白样品中添加一系列质量浓度的提取液一，以提取液一的质量浓度为横坐标，以质谱定量峰面积为纵坐标绘制标准曲线；/nS62在奶粉空白样品中添加一系列质量浓度的提取液二，以提取液二的质量浓度为横坐标，以质谱定量峰面积为纵坐标绘制标准曲线；/nS63以信噪比S/N＝3确定检测限，以信噪比S/N＝10确定定量限，根据标准曲线分别计算5种抗病毒药物的相关系数、检测限和定量限；/nS7对所述5种抗病毒药物的加标回收率及相对标准偏差RSD进行计算：/nS71按低、中高、高三种添加水平将标准溶液一加入牛奶样品中，每种添加水平平行测定6次，计算5种抗病毒药物的平均加标回收率和相对标准偏差；/nS72按低、中高、高三种添加水平将标准溶液二加入奶粉样品中，每种添加水平平行测定6次，计算5种抗病毒药物的平均加标回收率和相对标准偏差。/n...

【技术特征摘要】
1.一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1提供待检测牛奶样品、待检测奶粉样品、牛奶空白样品、奶粉空白样品、酸化乙腈、无水硫酸镁、氯化钠；
S2均质提取所述待检测牛奶样品和待检测奶粉样品中的目标化合物；
S21对待检测牛奶样品中的目标化合物进行提取，得到混合液一；
S22对待检测奶粉样品中的目标化合物进行提取，得到混合液二；
S23提取混合液一、混合液二中的上清液，分别标记为提取液一、提取液二，备用；
S3分别对所述提取液一、提取液二进行净化处理，得到标准溶液一、标准溶液二；
S31移取2ml提取液一加至塑料离心管中，涡旋混匀1min，使用离心机离心处理3min后，吸取上清液过微孔滤膜，获得标准溶液一；
S32移取2ml提取液二加至塑料离心管中，涡旋混匀1min，使用离心机离心处理3min后，吸取上清液过微孔滤膜，获得标准溶液二；
S4对所述标准溶液一、标准溶液二进行梯度洗脱处理；
S5分别对洗脱处理后的标准溶液一和标准溶液二，进行超高效液相色谱-串联质谱仪检测处理，检测到5种抗病毒药物；
所述串联质谱仪的运行条件包括：
(1)所述串联质谱仪选用电喷雾离子源ESI，离子源温度为550℃；电喷雾电压为5500V；
(2)所述串联质谱仪采用多反应监测MRM的检测方式；气帘气压力为35psi、碰撞气压力为9psi、雾化器压力为55psi、辅助气压力为60psi；
(3)所述串联质谱仪采用正离子模式进行扫描；入口电压为10.0V、碰撞室出口电压为6V；
5种抗病毒药物分别为金刚烷胺、咪喹莫特、奥司他韦、美金刚和金刚乙胺；
S6对所述5种抗病毒药物的标准曲线、相关系数、检测限和定量限进行检测计算；
S61在牛奶空白样品中添加一系列质量浓度的提取液一，以提取液一的质量浓度为横坐标，以质谱定量峰面积为纵坐标绘制标准曲线；
S62在奶粉空白样品中添加一系列质量浓度的提取液二，以提取液二的质量浓度为横坐标，以质谱定量峰面积为纵坐标绘制标准曲线；
S63以信噪比S/N＝3确定检测限，以信噪比S/N＝10确定定量限，根据标准曲线分别计算5种抗病毒药物的相关系数、检测限和定量限；
S7对所述5种抗病毒药物的加标回收率及相对标准偏差RSD进行计算：
S71按低、中高、高三种添加水平将标准溶液一加入牛奶样品中，每种添加水平平行测定6次，计算5种抗病毒药物的平均加标回收率和相对标准偏差；
S72按低、中高、高三种添加水平将标准溶液二加入奶粉样品中，每种添加水平平行测定6次，计算5种抗病毒药物的平均加标回收率和相对标准偏差。


2.根据权利要求1所述的一种牛奶和奶粉中抗病毒药物残留检测方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈辉，高霞，陈柏娥，谭敏，王刚，
申请(专利权)人：湖南新程检测有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43