一种异色瓢虫多巴脱羧酶DDC及其在催化产5-羟色胺上的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种异色瓢虫多巴脱羧酶DDC及其在催化5‑羟色胺上的应用。本发明专利技术通过克隆具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的异色瓢虫多巴脱羧酶基因片段，获得了高活性多巴脱羧酶。利用该酶首次实现了对5‑羟基色氨酸的催化脱羧作用，获得5‑羟色胺。另外，该酶专一性催化5‑羟基色氨酸而对色氨酸无催化作用对于生物法催化色氨酸生成5‑羟色胺具有重要指导意义。本发明专利技术转化率高，生产成本低，工艺简单，反应条件温和，环境友好，在工业化生产5‑羟色胺的应用中具有重要的借鉴价值。

【技术实现步骤摘要】
一种异色瓢虫多巴脱羧酶DDC及其在催化产5-羟色胺上的应用
本专利技术涉及分子生物学和生物工程
，具体涉及一种异色瓢虫多巴脱羧酶DDC及其在催化5-羟色胺上的应用。
技术介绍
5-羟色胺来自于色氨酸的一种吲哚衍生物，简称5-HT。最早是从血清中发现的，因此又名血清素，它广泛存在于哺乳动物组织中，特别在大脑皮层质及神经突触内含量很高，是一种抑制性神经递质。与之类似的生物胺多巴胺和去甲肾上腺素的酶促合成都来自相应的氨基酸5-羟基色氨酸和3.4-二羟基苯丙氨酸(多巴)的脱羧。脑内5-羟色胺含量降低将导致抑郁等常见心境障碍；黑质和纹状体病变致使多巴胺合成减少还可导致帕金森症发生。在微生物法两步催化色氨酸生产5-羟色胺的研究中，大多数研究人员仍利用催化作用不具有专一性的色氨酸脱羧酶对5-羟基色氨酸进行脱羧，由于该脱羧酶同时会作用于色氨酸，且对色氨酸的催化能力要强于5-羟基色氨酸，因此在生产5-羟色胺时会产生不必要的副产物，同时造成5-羟色胺产量偏低。因此，找到一种可以只催化5-羟基色氨酸，而对色氨酸没有催化能力的脱羧酶具有重要意义。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种异色瓢虫来源多巴脱羧酶，其特征在于：所述异色瓢虫来源多巴脱羧酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1中所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种异色瓢虫来源多巴脱羧酶，其特征在于：所述异色瓢虫来源多巴脱羧酶的核苷酸序列如SEQIDNO.1中所示。


2.根据权利要求1所述的一种权利要求1所述的异色瓢虫来源多巴脱羧酶，其特征在于：所述多巴脱羧酶的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.一种重组质粒，其特征在于，含有权利要求1所述的异色瓢虫来源多巴脱羧酶的核苷酸序列。


4.一种重组载体，其特征在于，表达权利要求3的重组质粒。


5.一种重组菌株，其特征在于，转化权利要求4所述的重组载体。


6.基于权利要求1所述的异色瓢虫来源多巴脱羧酶、权利要求3所述的重组质粒、权利要求4所述的重组载体或权利要求5所述的重组菌株在催化5-羟色胺上的应用。


7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述异色瓢虫来源多巴脱羧酶在催化5-羟色胺上的应用，具体包括以下步骤：
步骤1，设计引物，并利用PCR扩增SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；
步骤2，构建质粒载体如pET24a-DDC
将PCR扩增的DNA序列和pET24a载体用同样的限制性内切酶NdeI和HindⅢ进行双酶切，用T4DNA连接酶来连接纯化的酶切产物，得到质粒载体pET24a-DDC；
步骤3，构建克隆菌株pET24a-DDC-E.coliTrans1T1
将质粒载体pET24a-DDC转化至E.coliTrans1T1，得到阳性转化子，经菌落PCR筛选并测序确定为目标菌株；
步骤4，构建表达菌株pET24a-DDC-BL21(DE3)
将目标菌株pET24a-DDC-E.coliTrans1T1提取出来的质粒转化至E.coliBL21(DE3)，挑选阳性转化子直接克隆培...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈可泉，王莹莹，张阿磊，贾蕙宁，衡佳欣，罗雅献，刘雨洁，欧阳平凯，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32