逆转紫杉醇耐药性的化合物伊曲茶碱的药物用途制造技术

本发明专利技术公开了一种伊曲茶碱在制备逆转肿瘤细胞耐药性药物中的应用，涉及肿瘤细胞耐药性治疗的技术领域。本发明专利技术所述伊曲茶碱与紫杉醇联合用于制备逆转肿瘤紫杉醇耐药性的药物。研究发现，伊曲茶碱能显著降低MDR1基因和蛋白表达水平，伊曲茶碱与化疗药物紫杉醇联用能够显著提高耐药细胞对化疗药物的敏感性，从而逆转肿瘤耐药，大大提高疗效。动物实验也证明伊曲茶碱能有效抑制耐药动物模型皮下肿瘤生长速度，逆转紫杉醇耐药性。这些结果表明伊曲茶碱联用紫杉醇，能有效增强紫杉醇对耐受性肿瘤的治疗效果。临床发现许多恶性肿瘤细胞对紫杉醇具有耐药性，因此伊曲茶碱有较好的开发价值和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
逆转紫杉醇耐药性的化合物伊曲茶碱的药物用途
本专利技术涉及一种伊曲茶碱的新医药用途，具体涉及伊曲茶碱在逆转肿瘤紫杉醇耐药性中的应用，属于肿瘤细胞耐药性治疗的

技术介绍
肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等是全球癌症相关死亡的主要几种癌症，这些肿瘤的标准治疗方法包括手术切除、化疗和放射治疗，由于大多数癌症患者被发现时已处于癌症晚期，化疗被认为是治疗癌症的中坚力量。紫杉醇是紫杉烷抗有丝分裂剂，由于具有良好的肿瘤杀伤作用，其作为肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等癌症的一线治疗方案，在临床上已经使用多年。然而，经过一段时间的治疗后，肿瘤细胞常会通过多种机制对紫杉醇产生耐药性，这种耐药现象的发生严重限制了紫杉醇的临床化疗效果。多项研究表明，P-糖蛋白((P-glycoprotein,P-gp)的过表达是肿瘤细胞对紫杉醇产生耐药的最常见和最重要的因素之一。P-gp是一种独特的ATP依赖性膜转运蛋白,在人体中存在两种P-gp基因，即MDR1和MDR2，MDR2的功能尚未确定，MDR1的过表达往往导致肿瘤细胞产生耐药性。目前，临床上解决P-gp过表达所采用的第一种方法是将P-gp抑制剂与化疗药联用。虽然已经有三代P-gp抑制剂，但是由于毒副作用较大，体内实验效果不好等原因，能用于临床且有效的少之又少。腺苷是一种免疫抑制代谢物，可通过与免疫细胞上表达的G蛋白偶联腺苷受体A2a(A2aR)结合，抑制免疫细胞的免疫响应能力，在肿瘤微环境中这一抑制过程的结果就表现为肿瘤细胞的免疫逃逸，使肿瘤细胞无法被免疫细胞杀伤。肿瘤微环境中缺氧、低pH、高度细胞更新、高CD39和CD73的表达的环境都是腺苷高水平产生的重要因素。关于伊曲茶碱(CASNo.155270-99-8)的体外活性已经经过临床前研究证明，伊曲茶碱单药或者联合其他免疫治疗药物均可表现出良好的抗肿瘤活性。但目前没有伊曲茶碱逆转肿瘤耐药的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于寻找一种靶向A2AR通路的肿瘤治疗新途径，提出了伊曲茶碱在制备逆转肿瘤细胞耐药性药物中的应用。伊曲茶碱降低耐药肿瘤细胞中耐药基因MDR1表达，与抗癌药物联用可以逆转肿瘤耐药，从而大大提高疗效。本专利技术提供了伊曲茶碱在制备逆转肿瘤细胞耐药性的药物中的应用，所述伊曲茶碱与紫杉醇联合用于制备所述药物。具体的，所述伊曲茶碱用于抑制耐药性肿瘤细胞中的耐药蛋白MDR1表达。其中，所述伊曲茶碱逆转肿瘤细胞对紫杉醇产生的耐药性。优选地，所述肿瘤包括肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等。经本专利技术对化疗耐药非小细胞肺癌细胞和裸鼠模型(非小细胞肺癌细胞为A549细胞，化疗药物为紫杉醇)的实验表明，伊曲茶碱通过降低MDR1蛋白和MDR1mRNA的表达来抑制P-gp的活性，伊曲茶碱与紫杉醇联用通过调整细胞周期(延缓细胞生长)、加速细胞凋亡、抑制细胞增殖等方式改变化疗耐药的非小细胞肺癌细胞生长。经本专利技术的体内动物实验证明伊曲茶碱能有效抑制耐药非小细胞肺癌动物模型皮下肿瘤生长速度，逆转紫杉醇耐药性。附图说明图1为紫杉醇和紫杉醇联合不同浓度伊曲茶碱作用于紫杉醇耐药的非小细胞肺癌细胞以及正常非小细胞肺癌细胞后细胞增殖变化图，其中(A)A549/Taxol细胞的细胞增殖变化；(B)A549细胞的增殖变化。图2为不同浓度伊曲茶碱单独处理和紫杉醇联合作用于紫杉醇耐药的非小细胞肺癌细胞以及正常非小细胞肺癌细胞后细胞形态学变化图，其中(A)A549/Taxol细胞的细胞形态学变化；(B)A549细胞的形态学变化。图3为不同浓度伊曲茶碱单独处理和紫杉醇联合作用于紫杉醇耐药的非小细胞肺癌细胞以及正常非小细胞肺癌细胞后细胞凋亡变化图，其中(A)A549/Taxol细胞的细胞凋亡变化；(B)A549细胞的凋亡变化。图4为不同浓度伊曲茶碱单独处理和紫杉醇联合作用于紫杉醇耐药的非小细胞肺癌细胞以及正常非小细胞肺癌细胞后细胞周期变化图，其中(A)A549/Taxol细胞的细胞周期变化；(B)A549细胞的周期变化。图5为不同浓度伊曲茶碱单独处理和紫杉醇联合作用于紫杉醇耐药的非小细胞肺癌细胞以及正常非小细胞肺癌细胞后细胞迁移变化图，其中(A)A549/Taxol细胞的细胞迁移变化；(B)A549细胞的迁移变化。图6为浓度梯度与时间梯度下伊曲茶碱对A549/Taxol细胞中MDR1mRNA表达的影响。其中(A)伊曲茶碱(浓度分别为1μM，5μM，10μM)作用于A549/Taxol细胞(24h)(B)伊曲茶碱分别作用12h、24h、36h，48h于A549/Taxol细胞(10μM)图7为浓度梯度与时间梯度下伊曲茶碱对A549/Taxol细胞中MDR1蛋白的抑制。其中(A)伊曲茶碱(浓度分别为1μM，5μM，10μM)作用于A549/Taxol细胞(24h)(B)伊曲茶碱分别作用12h、24h、36h，48h于A549/Taxol细胞(10μM)图8为A549细胞和A549/Taxol细胞中细胞凋亡和细胞周期相关蛋白的表达情况。其中(A)A549/Taxol细胞；(B)A549细胞。图9为伊曲茶碱、紫杉醇以及紫杉醇与伊曲茶碱联用在A549/Taxol细胞裸鼠移植瘤中对裸鼠体重、肿瘤重量，肿瘤体积的影响以及cleavedcaspase3免疫组化的结果。其中(A)肿瘤图；(B)肿瘤的重量；(C)实验过程中裸鼠体重变化情况；(D)实验过程中肿瘤体积变化情况；(E)cleavedcaspase3免疫组化实验结果。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1伊曲茶碱抑制紫杉醇耐药的非小细胞肺癌细胞体外增殖(1)检测不同浓度伊曲茶碱对紫杉醇耐药非小细胞肺癌细胞系增殖的作用取对数期的A549/Taxol细胞和A549细胞接种于96孔板，细胞密度均为5*104/ml。将96孔板置于培养箱内培养24h，待细胞贴壁后，根据治疗组的设置，每孔加入不同浓度的紫杉醇(0.16μM,0.31μM,0.63μM,1.3μM,2.5μM,5.0μM,10μM,20μM)和固定浓度的伊曲茶碱(10μM)；同时设置阴性对照组。将96孔板置于培养箱内培养48h后，每孔加入20μlMTT工作液(5mg/ml),继续培养4h后，取出，小心倒去96孔板中的培养液，于每孔中加入10％的二甲亚砜于振荡仪上振荡直到蓝紫色结晶完全溶解，然后于酶联免疫检测仪上以480nm波长处测定吸光度值。根据吸光度(A)值分别计算出不同浓度的紫杉醇联合伊曲茶碱(10μM)对两种细胞的抑制率：细胞抑制率＝(阴性对照组A值-实验组A值)/阴性对照组A值*100％。实验重复3次，结果取平均值±标准差。结果如图1和表1中所示，可以看出，伊曲茶碱与紫杉醇联用后，明显降低了A549/Taxol细胞的存活率，IC50值从(4.926±0.102)μM降低到了(0.2739±0.022)μM(表1)。同样的实验条本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种伊曲茶碱在药物制备中的应用，其特征在于，所述的伊曲茶碱或药物用于逆转肿瘤细胞耐药性。/n

【技术特征摘要】
1.一种伊曲茶碱在药物制备中的应用，其特征在于，所述的伊曲茶碱或药物用于逆转肿瘤细胞耐药性。


2.根据权利要求1所述的伊曲茶碱在药物制备中的应用，其特征在于，所述的伊曲茶碱或药物用于抑制耐药性肿瘤细胞中的耐药蛋白MDR1表达。


3.根据权利要求1或2所述的伊曲茶碱在药物制备中的应用，其特征在于，所述伊曲茶碱或药物用于克服肿瘤细胞对紫杉醇产生的耐药性。


4.根据权利要求3所述的伊曲茶碱在制备逆转肿瘤细胞耐药性药物中的应用，其特征在于，所针对的肿瘤包括肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等使用紫杉醇或紫杉醇前药进行化疗的所有肿瘤。


5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王学宝，叶发青，高国辉，孙豆豆，鲁颖，叶辉，张园，左志贵，刘志国，谢自新，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33