一种用于联合检测多基因突变的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供了一种用于联合检测多基因突变的试剂盒，所述用于联合检测多基因突变的试剂盒包括具有内腔的盒体(1)、与所述盒体(1)的一侧相连用于内腔开合的盒盖(2)；盒体(1)的内部设有衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有插孔，所述插孔内插设有保存管和联排管；联排管上设有多个半圆形缺口标记(10)，所述多个半圆形缺口标记均匀分布于所述联排管的裙边两侧；联排管的第一孔裙边的两侧分别设置有缺角(11)。本实用新型专利技术提供的用于联合检测多基因突变的试剂盒结构设计简单合理，便于运输与保存，并减少了运输中的光线及震动对试剂造成的影响；操作简便快捷，并在视觉上为用户提供标记，减少多加、错加及漏加样本的可能。

【技术实现步骤摘要】
一种用于联合检测多基因突变的试剂盒
本技术属于生物
，涉及一种用于联合检测多基因突变的试剂盒。
技术介绍
骨髓增殖性肿瘤(Myeloproliferativeneoplasms，MPN)主要包括真性红细胞增多症(Polycythemiavera，PV)、原发性血小板增多症(Essentialthrombocythemia，ET)、原发骨髓纤维化(Primarymyelofibrosis，PMF)及慢性粒细胞性白血病(Chronicmyelogenous，CML)。CALR突变可激活JAK-STAT信号途径，参与MPN的发生。Nangalia等通过对MPN患者进行全外显子测序，发现了CALR基因突变(CALRexon9indel)在ET、PMF中的突变率分别为15％～35％、23％～40％。CALR基因突变类型主要是TYPE1突变(c.1092_1143del52，第9号外显子上52bp的缺失)以及TYPE2突变(c.1154_1155insTTGTC，第9号外显子上5bp的插入)。促血小板生成素受体(MPL)属于造血因子受体家族，与配体结合能激活JAK-STAT等信号转导途径，对调节髓细胞的增生和巨核细胞的成熟具有重要影响。国际上已发现多种MPL基因突变类型，最常见的为W515L(TGG>TTG)和W515K(TGG>AAG)。3％～5％的ET患者和5％～10％的PMF患者存在MPL基因突变(MPLW515L/K)。研究表明，JAK2V617F点突变阴性的PV患者存在JAK2外显子12的突变，这些外显子12的突变改变了539、543及547位密码子附近的多种核苷酸。根据文献统计，约有3％～5％的PV患者(JAK2V617F阴性)带有JAK2外显子12突变，主要突变类型包括K539L、e12del(N542-E543del和E543-D544del)。目前，MPN的检测方法主要包括细胞形态观察、流式细胞术、细胞遗传学分析及分子生物学检测。李玉玲(李玉玲.高通量测序技术在骨髓增殖性肿瘤临床检测中的方法学建立及其初步应用[M].广州:南方医科大学，2016.)对MPN相关的23个目标基因进行了多重PCR引物的设计，同时结合IonTorrentPGM的测序方法，对20例MPN患者的基因突变情况进行了检测，结果显示几乎所有的三阴性MPN患者都存在基因突变，其中以表观遗传修饰基因TET2突变最为常见。此方法特异性好，灵敏度高，但对长片段的缺失检出存在缺陷，此外，由于需要对PCR扩增产物进行建库及测序分析，成本较高，不适合应用于大批量样本的检测中。目前，市面上也存在一些针对MPN相关基因突变的检测试剂盒。CN106636415A公开了一种用于检测MPN相关基因突变的试剂盒，试剂盒内包括MPN相关的17个基因全部外显子进行扩增的多重PCR引物，通过二代测序技术来对扩增结果进行分析，具有检测效率高、突变基因覆盖面广及检出率高的优点。然而，此试剂盒需要用户自行配置反应液，当样本数较多时，操作繁琐，容易出现多加、漏加及错加反应液的情况，导致实验失败，且同样存在成本较高的问题。CN203034017U公开了一种用于KRAS基因突变检测的试剂盒，包括盒体，盒体内设有样本保存管、含有正向引物的试管、含有反向引物的试管、含有PCR扩增试剂的试管、含有PCR产物纯化试剂的试管及含DNA测序试剂的试管。该试剂盒将样本保存及KRAS基因突变位点的检测整合在一个试剂盒内，基于直接测序技术，可直接对PCR产物进行序列分析，使用方便快捷，节省时间。然而，该试剂盒涉及的反应较多，且未将不同反应的试剂预分装在反应管内，用户需自行配置并分装反应液，当样本数较多时，可能会出现错漏加、多加或误加其他反应的试剂等问题，影响实验的效率及结果。世界卫生组织(WHO)明确将JAK2、MPL以及CALR基因突变作为PV、ET和PMF的主要分子诊断指标之一。由此可见，多基因联合检测已成为疾病诊断的新趋势。如何提供一种操作简便、成本较低且可以同时对多个基因突变进行联合检测的试剂盒，使研究人员可以更为轻松地获得大量样本数据，已成为亟待解决的问题。
技术实现思路
针对现有技术的不足和实际需求，本技术提供一种用于联合检测多基因突变的试剂盒，以实现多基因突变的快速联合检测，所述试剂盒中的联排管上设有缺口标记，在视觉上为用户提供标记，避免加样时漏加、多加及错加的情况发生。为达此目的，本技术采用如下技术方案：本技术提供了一种用于联合检测多基因突变的试剂盒，所述试剂盒包括具有内腔的盒体1、与所述盒体1的一侧相连用于内腔开合的盒盖2；所述盒体1的内部设有衬垫3，所述衬垫3上设有插孔，所述插孔内插设有保存管和联排管；所述联排管上设有多个半圆形缺口标记，所述多个半圆形缺口标记均匀分布于所述联排管的裙边两侧；所述联排管的第一孔裙边的两侧分别设置有缺角。本技术中，将试剂放置在能够开合的盒体内，使试剂能够在避光条件下储存，降低了试剂因光照而不稳定的可能性；将保存管和联排管插设在衬垫上的插孔内，减少了震动对试剂造成的影响，增加了试剂在运输过程中的稳定性；通过在联排管的裙边上设置缺口标记，为用户在加样时提供了标记，降低了错加的概率；在联排管的第一孔处设计了缺角，使用户知道加样的起始位置，避免上机时将样本顺序弄反。优选地，所述联排管为12联排管9。优选地，所述12联排管9上设有6个半圆形缺口标记10，6个所述半圆形缺口标记10均匀分布于所述12联排管9的裙边两侧，每隔3个孔设置2个半圆形缺口标记10；优选地，所述12联排管9的第一孔裙边的两侧分别设置有一个缺角11。本技术中，使用12联排管保证产品可应用于市面上主流的荧光定量PCR仪，将缺口标记及缺角设计在12联排管的裙边上，不会影响12联排管在荧光定量PCR仪上的放置及扩增反应，增加产品的适配性。优选地，所述插孔包括第一圆形插孔4和第二圆形插孔5。优选地，所述第一圆形插孔4的直径为0.5～2cm，例如可以是0.5cm、0.6cm、0.7cm、0.8cm、0.9cm、1cm、1.1cm、1.2cm、1.3cm、1.4cm、1.5cm、1.6cm、1.7cm、1.8cm、1.9cm或2cm；数量为2～5个，例如可以是2个、3个、4个或5个，用于插设保存管。优选地，所述第二圆形插孔5的直径为0.1～0.5cm，例如可以是0.1cm、0.15cm、0.2cm、0.25cm、0.3cm、0.35cm、0.4cm、0.45cm或0.5cm；数量为12～96个，例如可以是12个、24个、36个、48个、60个、72个、84个或96个，用于插设联排管。本技术中，由于衬垫具有减震效果，将保存管与联排管放置在插孔内，避免了运输过程中震动对试剂造成的影响，增加了试剂的稳定性。优选地，所述第一圆形插孔4并列一排设置于衬垫3上部。优选地，所述第二圆形插孔5呈8×12排列本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于联合检测多基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括具有内腔的盒体(1)、与所述盒体(1)的一侧相连用于内腔开合的盒盖(2)；/n所述盒体(1)的内部设有衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有插孔，所述插孔内插设有保存管和联排管；/n所述联排管为12联排管(9)；/n所述12联排管(9)上设有6个半圆形缺口标记(10)，6个所述半圆形缺口标记(10)均匀分布于所述12联排管(9)的裙边两侧，每隔3个孔设置2个半圆形缺口标记(10)；/n所述12联排管(9)的第一孔裙边的两侧分别设置有一个缺角(11)。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于联合检测多基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括具有内腔的盒体(1)、与所述盒体(1)的一侧相连用于内腔开合的盒盖(2)；
所述盒体(1)的内部设有衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有插孔，所述插孔内插设有保存管和联排管；
所述联排管为12联排管(9)；
所述12联排管(9)上设有6个半圆形缺口标记(10)，6个所述半圆形缺口标记(10)均匀分布于所述12联排管(9)的裙边两侧，每隔3个孔设置2个半圆形缺口标记(10)；
所述12联排管(9)的第一孔裙边的两侧分别设置有一个缺角(11)。


2.根据权利要求1所述的用于联合检测多基因突变的试剂盒，其特征在于，所述插孔包括第一圆形插孔(4)和第二圆形插孔(5)。


3.根据权利要求2所述的用于联合检测多基因突变的试剂盒，其特征在于，所述第一圆形插孔(4)的直径为0.5～2cm，数量为2～5个...

【专利技术属性】
技术研发人员：程雪涛，王洁，焦柔，张亚飞，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏;32