中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法技术

本发明专利技术涉及中药材中黄曲霉毒素B

【技术实现步骤摘要】
中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法
本专利技术涉及黄曲霉毒素B1测定的
，具体涉及中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法。
技术介绍
黄曲霉毒素是一类主要由黄曲霉菌和寄生曲霉菌分泌产生的剧毒代谢产物，是迄今发现的最强致癌物质之一。黄曲霉毒素目前已发现20余种，主要包括黄曲霉毒素B1(AFB1)、B2(AFB2)、G1(AFG1)、G2(AFG2)和M1(AFM1)等，其中AFB1的毒性最强，污染最为广泛，它的毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍。早在1993年，黄曲霉毒素B1被世界卫生组织的癌症研究机构划定为已知最强致癌化学物质之一，即Ⅰ类致癌物质。产毒真菌菌株广泛存在于自然界中，谷物、水果、中药、茶叶、食用油和牛奶等农产品和食品均易受黄曲霉毒素B1的污染。我国属于黄曲霉毒素污染较重的地区，特别是南方高温高湿地区受污染的情况最为严重。因此加强黄曲霉毒素的检测、特别是速测，及时了解和掌握各种食物及农产品的卫生信息，对保障我国食品消费安全具有重要意义。现有黄曲霉毒素的检测方法主要是精密仪器分析法和免疫学分析法。其中精密仪器分析法主要包括高效液相色谱法、色谱-质谱联用，这些方法灵敏度高，准确性好，然而存在仪器昂贵，要求黄曲霉毒素样品纯化程度高，传统的样品前处理技术过程繁琐，耗时长，对实验环境要求高等不足，难以实现快速检测的目的。近年来迅速发展的免疫层析分析方法克服了上述方法的不足，作为一类新型的快速检测分析技术，具有简便快速的操作过程、即刻呈现测试结果、价格低廉等优点，已经被广泛应用于医学诊断、食品检测等各个领域。经过检索可知，专利号为CN201710753370.6，专利名称为一种检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光试纸条及其应用的公开材料，在该公开材料中，公开了一种黄曲霉毒素B1时间分辨荧光试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫三部分。反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端。其中，样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有时间分辨荧光微球；反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被黄曲霉毒素B1抗原，C线包被抗兔抗体，并公开了试纸条的制备和使用方法，通过分析可知，检测方法的操作过于复杂，精密度差，，不能准确定量，且准确性较差。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，而提供一种检测准确、效率高、准确定量和精密度高的药材中黄曲霉毒素B1的测定方法。本专利技术的目的是这样实现的：中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：包括，样品选取：将200g中药材用粉碎研磨机粉碎至粉末状，使其粒径小于2mm试验筛，混合均匀后缩分至50g，储存于样品瓶中，密闭保存，供检测使用；称取1g中药材试样于50mL离心管中，加入20mL的50％甲醇水溶液，涡旋提取3分钟，4000r/min离心5分钟，上清液备用；试纸条选取：从包装中取出黄曲霉毒素B1免疫荧光试纸条，至于孵育器内，25℃恒温孵育5分钟，待用；取液：准确移取样品选取中试样上清液1.00mL至5mL离心管中，再准确加入溶液稀释剂1.00mL，涡旋混匀；滴入试纸条：移取取液操作中的试样稀释液100μL至试纸条微孔内，继续孵育10分钟；获取数据：取出试纸条插入荧光读卡仪卡槽内，读取T/C比值，根据已输入的黄曲霉毒素B1多段线性标准曲线读取样品中含有黄曲霉毒素的含量X(μg/kg)。所述黄曲霉毒素B1免疫荧光试纸条的制备是利用生物信息技术制备黄曲霉毒素B1的抗原抗体，再将黄曲霉毒素B1抗体与荧光微球偶联，采用间接竞争法制备试纸条。将荧光微球偶联抗体喷洒固定在纤维垫上，用适当浓度的抗原和二抗在NC膜上划线，将抗原和二抗包埋固定在NC膜上，37°恒温老化24h，精密度改善，形成质控线C线和检测线T线，以样品中黄曲霉毒素B1浓度为横坐标，对应浓度T/C荧光强度比值为纵坐标，绘制多段线性标准曲线，未知浓度样品可通过荧光检测仪读取T/C值，利用多段线性标准曲线求得样品中黄曲霉毒素B1的含量。所述多段线性标准曲线的设置称取6份质量为1.00g的样品至于6个50mL离心管中，分别从100ng/mL的黄曲霉毒素B1标准溶液中准确移取0μL，10μL，25μL，50μL，100μL，150μL至上述6个离心管中；按照样品选取、试纸条选取、取液和获取数据的方法读出上述6份加标样品的T/C比值，以加标浓度为横坐标，以T/C比值为纵坐标，建立多段线性标准曲线并输入荧光读卡仪。所述黄曲霉毒素B1标准溶液的含量为100ng/mL。所述溶液稀释剂：取0.5g吐温-20，加入100mL水中，混匀。所述50％甲醇水溶液的制备为取50mL水与50mL甲醇混匀。本专利技术的有益效果：本专利技术的优点在于：1、准确定量，将试纸条插入荧光读卡仪卡槽内，读取T/C比值；2、精密度高，未知浓度样品可通过荧光检测仪读取T/C值，利用多段线性标准曲线求得样品中黄曲霉毒素B1的含量；其他有益效果在具体实施例中详细说明。附图说明图1是多段线性标准曲线图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同，本说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是用于限制本专利技术，本说明书所使用的术语如“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合；此外，下面所描述的本专利技术不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。实施例1中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：包括，样品选取：该操作用于选取待检测材料，将大约200g中药材用粉碎研磨机粉碎至粉末状，使其粒径小于2mm试验筛，混合均匀后缩分至50g，储存于样品瓶中，密闭保存，供检测使用；称取1g中药材试样(精确至0.01g)放置50mL离心管中，加入20mL的50％甲醇水溶液，涡旋提取3分钟，4000r/min离心5分钟，上清液备用，需要说明的是遇到色素较重的药材样品，可准确移取上清液10mL提取液至15mL离心管中，加入C18粉300mg，无水硫酸镁900mg，PSA粉300mg，硅胶300mg，GCB90mg，涡旋3分钟，4000r/min离心，上清液备用；试纸条选取：该操作用于选取试纸条，并对试纸条做出处理，具体的，从包装中取出黄曲霉毒素B1免疫荧光试纸条，至于孵育器内，25℃恒温孵育5分钟，待用；取液：准确移取样品选取中试样上清液1.00mL至5mL离心管中，再准确加入溶液稀释剂1.00mL，涡旋混匀；滴入试纸条：移取取液操作中的试样稀释液100μL至试纸条微孔内，继续孵育10分钟；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.中药材中黄曲霉毒素B

【技术特征摘要】
1.中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：包括，
样品选取：将200g中药材用粉碎研磨机粉碎至粉末状，使其粒径小于2mm试验筛，混合均匀后缩分至50g，储存于样品瓶中，密闭保存，供检测使用；称取1g中药材试样于50mL离心管中，加入20mL的50％甲醇水溶液，涡旋提取3分钟，4000r/min离心5分钟，上清液备用；
试纸条选取：从包装中取出黄曲霉毒素B1免疫荧光试纸条，置于孵育器内，25℃恒温孵育5分钟，待用；
取液：准确移取样品选取中试样上清液1.00mL至5mL离心管中，再准确加入溶液稀释剂1.00mL，涡旋混匀；
滴入试纸条：移取取液操作中的试样稀释液100μL至试纸条微孔内，继续孵育10分钟；
获取数据：取出试纸条插入荧光读卡仪卡槽内，读取T/C比值，根据已输入的黄曲霉毒素B1多段线性标准曲线读取样品中含有黄曲霉毒素的含量X(μg/kg)。


2.根据权利要求1所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：所述黄曲霉毒素B1免疫荧光试纸条的制备是利用生物信息技术制备黄曲霉毒素B1的抗原抗体，再将黄曲霉毒素B1抗体与荧光微球偶联，采用干式间接竞争法制备试纸条。


3.根据权利要求2所述的中药材中黄曲霉毒素B1的测定方法，其特征在于：将荧光微球偶联抗体喷洒固定在纤维垫上，用适当浓度的抗原和二抗在NC膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：张威，王明辉，张小乐，刘东超，
申请(专利权)人：河南华普盾安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41