抗体文库及方法技术

本发明专利技术涉及生成抗体文库的方法、使用这种方法产生的抗体文库以及变体抗体。目前，改善抗体结合的方法(亲和力成熟测定)要求筛选大量的抗体变体文库(通常>10

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体文库及方法
本专利技术涉及生成抗体文库的方法、使用这种方法产生的抗体文库以及变体抗体。专利技术背景抗体亲和力是抗体与它特异性结合的蛋白质之间相互作用强度的度量，以缔合速率与解离速率之比表示。有许多原因需要优化此比率。亲和力的提高可能意味着在给定的剂量下抗体治疗剂更有效，或者可能意味着每剂量需要更少的药物，且诊断测试可以提高敏感性。降低亲和力对于某些需要组织渗透并因此需要更快解离的药物也可能是有益的。还已显示双特异性抗体需要复杂地调节每个结合位点的亲和力以最大化功效。现有的亲和力成熟平台通常涉及通过集中在抗体互补决定区(CDR)内的随机诱变来创建大的变体文库。该方法具有的缺点是筛选大量变体(通常>1010)，以鉴定出具有改善的特征的一小部分变体。
技术实现思路
本专利技术解决了现有技术的许多问题。如实施例中所述，专利技术人令人惊讶地显示了，通过将编码给定抗体序列的核苷酸序列的突变限制在对应于由体细胞超突变中涉及的酶靶向的DNA基序的位点，可以构建给定抗体序列的变体文库，与通过许多现有技术制备的文库相比，该本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种参考抗体的变体，其中所述变体：(i)与所述参考抗体的轻链氨基酸序列相比，轻链序列中有至少两个氨基酸变化；(ii)与所述参考抗体的重链氨基酸序列相比，重链序列中有至少两个氨基酸变化；或(iii)与所述参考抗体的轻链氨基酸序列相比，轻链序列中有至少一个氨基酸变化，且与所述参考抗体的重链氨基酸序列相比，重链序列中有至少一个氨基酸变化；其中各个所述氨基酸变化是在独立地由所述变体的DNA序列的DNA片段编码的氨基酸残基处，其中所述变体的所述DNA片段与编码所述参考抗体的相应DNA序列的DNA片段的区别在于易于通过体细胞超突变诱导酶脱氨的DNA基序中的点突变。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181022 GB 1817188.4;20190404 GB 1904754.7;2019041.一种参考抗体的变体，其中所述变体：(i)与所述参考抗体的轻链氨基酸序列相比，轻链序列中有至少两个氨基酸变化；(ii)与所述参考抗体的重链氨基酸序列相比，重链序列中有至少两个氨基酸变化；或(iii)与所述参考抗体的轻链氨基酸序列相比，轻链序列中有至少一个氨基酸变化，且与所述参考抗体的重链氨基酸序列相比，重链序列中有至少一个氨基酸变化；其中各个所述氨基酸变化是在独立地由所述变体的DNA序列的DNA片段编码的氨基酸残基处，其中所述变体的所述DNA片段与编码所述参考抗体的相应DNA序列的DNA片段的区别在于易于通过体细胞超突变诱导酶脱氨的DNA基序中的点突变。


2.根据权利要求1的变体抗体，其中所述体细胞超突变诱导酶是激活诱导脱氨酶(AID)，且所述DNA基序是DGYW或WRCH，例如RGYW或WRCY，其中D是腺嘌呤、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，R是腺嘌呤或鸟嘌呤，G是鸟嘌呤，C是胞嘧啶，H是腺嘌呤或胞嘧啶或胸腺嘧啶，W是腺嘌呤或胸腺嘧啶，以及Y是任何胞嘧啶或胸腺嘧啶。


3.根据权利要求1或2的变体抗体，其中所述参考抗体是曲妥珠单抗。


4.根据权利要求3的变体抗体，其中所述氨基酸变化选自：lc9N、lc9T、lc9I、lc9R、lc9K、lc25G、lc25V、lc25D、lc31N、lc31S、lc31I、lc32D、lc32G、lc32V、lc32T、lc32N、lc32S、lc32I、lc32P、lc32L、lc32F、lc33L、lc33I、lc34G、lc34V、lc34D、lc38E、lc38K、lc40A、lc40S、lc40T、lc43G、lc43V、lc43T、lc43N、lc43S、lc43I、lc43P、lc43L、lc43F、lc46V、lc46I、lc47V、lc51S、lc51P、lc51T、lc76R、lc76N、lc76T、lc76K、lc76I、lc79K、lc79E、lc80T、lc80S、lc80A、lc85S、lc85N、lc85I、lc89H、lc90E、lc90A、lc91N、lc91D、lc91Y、lc93S、lc93N、lc93I、lc94S、lc94N、lc94I、lc101D、lc102S、lc102N、hc2L、hc2I、hc3H、hc4M、hc4V、hc13K、hc13E、hc14A、hc14T、hc14S、hc16A、hc16V、hc16D、hc23E、hc23G、hc23V、hc23T、hc23K、hc23R、hc23I、hc23P、hc23L、hc23S、hc24D、hc24G、hc24V、hc24T、hc24N、hc24S、hc24I、hc24P、hc24L、hc24F、hc26A、hc26V、hc26D、hc28K、hc35N、hc35D、hc35Y、hc48L、hc48I、hc49G、hc49S、hc56A、hc56V、hc56D、hc58S、hc58N、hc58I、hc61G、hc61V、hc61D、hc79G、hc79V、hc79D、hc82E、hc82K、hc85R、hc88D、hc88T、hc88S、hc88P、hc88G、hc92G、hc92V、hc92D、hc103A、hc103V、hc103D、hc106D、hc106G、hc106V、hc106T、hc106N、hc106S、hc106I、hc106P、hc106L、hc106F、hc114S、hc114N、和hc114I。


5.根据权利要求4的变体抗体，其中所述氨基酸变化选自：lc9T、lc9I、lc9R、lc9K、lc43F、lc47V、lc51P、lc51T、lc101D、hc2L、hc3H、hc14S、hc16V、hc24P、hc26A、hc26V、hc48I、hc58S、hc61V、hc79V、hc85R、hc88G、hc92V、hc92D、hc103A、hc103V、hc106V、hc114S、hc114N、和hc114I。


6.根据权利要求3至5中任一项所述的变体抗体，其中除了在权利要求4中所述的氨基酸变化以外，变体的轻链和重链序列与所述参考抗体的轻链和重链序列在任何残基上没有差异。


7.根据权利要求3至6中任一项所述的变体抗体，其中所述变体抗体分子具有如表8中19号变体或表8中列出的任一其他抗体所示的氨基酸突变的组合。


8.根据权利要求3至6中任一项所述的变体抗体，其中所述变体抗体分子具有如表2至表7中所列的任一抗体所示的氨基酸突变的组合。


9.根据权利要求3至8中任一项所述的变体抗体，其中所述变体抗体是曲妥珠单抗抗体的变体，其相对于曲妥珠单抗包含以下氨基酸变化：lc9K、lc43F、和hc106V。


10.根据权利要求1或2的变体抗体，其中所述变体是组织蛋白酶S抗体的变体，其中所述参考抗体是Fsn503h。


11.根据权利要求10的变体抗体，其中所述氨基酸变化选自：lc12A、lc12S、lc12T、lc19V、lc28R、lc32T、lc32I、lc45A、lc45S、lc45T、lc50H、lc51V、lc51F、lc51I、lc56L、lc56F、lc56I、lc58K、lc66S、lc69A、lc69V、lc81T、lc81I、lc81N、lc85P、lc85S、lc85T、lc90L、lc90F、lc96I、lc96S、lc96I、lc96N、lc...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·别克，C·斯科特，D·麦卡恩，L·麦克吉尔，H·摩根，N·坎贝尔，J·麦克洛里，A·奥凯恩，
申请(专利权)人：融合抗体公开有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB