一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物、试剂盒及其应用，涉及病原体检测技术领域。该核酸组合物可同时满足这两种病原体的准确检出。经验证，发明专利技术人提供的上述核酸组合物灵敏度高，对于两种病原体的最低检测限均达到5×10

【技术实现步骤摘要】
一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物、试剂盒及其应用
本专利技术涉及病原体检测
，具体而言，涉及一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物、试剂盒及其应用。
技术介绍
犬猫动物不仅可以携带危害犬猫健康的病原体，也能携带传播多中能够人畜共患病。弓形虫病和钩端螺旋体病是较为常见的人畜共患病。其中，弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasmagondii，TOXO)所引起的人畜共患病，广泛寄生在人和动物的有核细胞内，是人和动物孕期宫内感染导致胚胎畸形的重要病原体之一。钩端螺旋体病(Leptospirosis)简称钩体病，是由钩端螺旋体(Leptospira)感染引起的人畜共患病，广泛存在于世界各地。患犬临床表现多样，主要有发热、黄疸、血红蛋白尿、流产等。目前临床的诊断方法有病原学检测，但其存在检测周期长、危险性大的问题，免疫学检测的灵敏度较低，检测病原单一。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物、试剂盒及其应用以实现快速准确同时检测引起人畜共患病的两种常见病原。本专利技术是这样实现的：本专利技术提供了一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物，人畜共患病病原体包括弓形虫和钩端螺旋体，核酸组合物包括分别用于检测弓形虫和钩端螺旋体的第一核酸组合物和第二核酸组合物；第一核酸组合物包括与SEQIDNO.1-2所示的序列至少80％一致性的第一引物对以及与SEQIDNO.3所示的序列至少80％一致性的第一探针；第二核酸组合物包括与SEQIDNO.4-5所示的序列至少80％一致性的第二引物对以及与SEQIDNO.6所示的序列至少80％一致性的第二探针。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述第一核酸组合物包括与SEQIDNO.1-2所示的序列至少90％一致性的第一引物对以及与SEQIDNO.3所示的序列至少90％一致性的第一探针；第二核酸组合物包括与SEQIDNO.4-5所示的序列至少90％一致性的第二引物对以及与SEQIDNO.6所示的序列至少90％一致性的第二探针。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述第一核酸组合物包括SEQIDNO.1-2所示的第一引物对以及SEQIDNO.3所示的第一探针；第二核酸组合物包括SEQIDNO.4-5所示的第二引物对以及SEQIDNO.6所示的第二探针。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述第一探针和第二探针的5’端均标记有荧光报告基团，且第一探针和第二探针的3’端均标记有荧光猝灭基团。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光报告基团为HEX、FAM、TET、CF532、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5、TexasRed、NED、AlexaFlour或VIC，淬灭基团为MGB、TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3或QSY。本专利技术提供了一种试剂盒，其包括上述的核酸组合物。本专利技术提供了一种核酸组合物在制备试剂盒中的应用。本专利技术提供了一种试剂，其包括上述的核酸组合物。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述试剂为冻干试剂。核酸组合物或试剂在鉴定或辅助鉴定人畜共患病病原体中的应用；该应用为非疾病诊断或治疗为目的的应用；病原体为弓形虫和钩端螺旋体这两种病原中的至少一种。含有上述的核酸组合物的鉴定或辅助鉴定人畜共患病病原体的芯片。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种检测弓形虫、钩端螺旋体的核酸组合物，该核酸组合物可同时满足这两种病原体的准确检出。经验证，专利技术人提供的上述核酸组合物灵敏度高，对于两种病原体的最低检测限均达到5×102copies/mL，其检测灵敏度远高于现有的鉴定方法的检测灵敏度。另外，上述核酸组合物具有特异性强的优势，极大程度上杜绝了非特异性扩增造成的假阴性结果；采用本专利技术提供的核酸组合物具有检测时间短的优势，且检测过程无需开盖，无污染。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为弓形虫引物探针筛选结果图；图2是钩端螺旋体引物探针筛选结果图；图3是试剂盒特异性测试中弓形虫检测通道结果图；图4是试剂盒特异性测试中钩端螺旋体检测通道结果图；图5是试剂盒检测限测试中弓形虫在最低检测限时的扩增图；图6是试剂盒检测限测试中钩端螺旋体在最低检测限时的扩增图；图7为弓形虫样本的检测扩增图；图8是钩端螺旋体样本的检测扩增图；图9为弓形虫质粒的PCR的扩增产物的测序结果BLAST对比图；图10为钩端螺旋体质粒的PCR的扩增产物的测序结果BLAST对比图。具体实施方式现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。本专利技术提供了一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物，人畜共患病病原体包括弓形虫和钩端螺旋体，核酸组合物包括分别用于检测弓形虫和钩端螺旋体的第一核酸组合物和第二核酸组合物；第一核酸组合物包括与SEQIDNO.1-2所示的序列至少80％一致性的第一引物对以及与SEQIDNO.3所示的序列至少80％一致性的第一探针；第二核酸组合物包括与SEQIDNO.4-5所示的序列至少80％一致性的第二引物对以及与SEQIDNO.6所示的序列至少80％一致性的第二探针。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述第一核酸组合物包括与SEQIDNO.1-2所示的序列至少90％一致性(例如98％或99％序列一致性)的第一引物对以及与SEQIDNO.3所示的序列至少90％一致性(例如98％或99％序列一致性)的第一探针；第二核酸组合物包括与SEQIDNO.4-5所示的序列至少90％一致性(例如98％或99％序列一致性)的第二引物对以及与SEQIDNO.6所示的序列至少90％一致性(例如98％或99％序列一致性)的第二探针。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述第一核酸组合物包括SEQIDNO.1-2所示的第一引物对以及SEQIDNO.3所示的第一探针；第二核酸组合物包括SEQIDNO.4-5所示的第二引物对以及SEQIDNO.6所示的第二探针。序列如下所示：在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述第一探针和第二探针的5’端均标记有荧光报告基团，且第一探针和第二探针的3’端均标记有荧光猝灭基团。在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光报告基团为HEX、FAM、TET、CF532、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5、TexasRed、NED本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物，其特征在于，所述人畜共患病病原体包括弓形虫和钩端螺旋体，所述核酸组合物包括分别用于检测所述弓形虫和钩端螺旋体的第一核酸组合物和第二核酸组合物；/n所述第一核酸组合物包括与SEQ ID NO.1-2所示的序列至少80％一致性的第一引物对以及与SEQ ID NO.3所示的序列至少80％一致性的第一探针；所述第二核酸组合物包括与SEQ ID NO.4-5所示的序列至少80％一致性的第二引物对以及与SEQ ID NO.6所示的序列至少80％一致性的第二探针。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测人畜共患病病原体的核酸组合物，其特征在于，所述人畜共患病病原体包括弓形虫和钩端螺旋体，所述核酸组合物包括分别用于检测所述弓形虫和钩端螺旋体的第一核酸组合物和第二核酸组合物；
所述第一核酸组合物包括与SEQIDNO.1-2所示的序列至少80％一致性的第一引物对以及与SEQIDNO.3所示的序列至少80％一致性的第一探针；所述第二核酸组合物包括与SEQIDNO.4-5所示的序列至少80％一致性的第二引物对以及与SEQIDNO.6所示的序列至少80％一致性的第二探针。


2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述第一核酸组合物包括与SEQIDNO.1-2所示的序列至少90％一致性的第一引物对以及与SEQIDNO.3所示的序列至少90％一致性的第一探针；所述第二核酸组合物包括与SEQIDNO.4-5所示的序列至少90％一致性的第二引物对以及与SEQIDNO.6所示的序列至少90％一致性的第二探针；
优选地，所述第一核酸组合物包括SEQIDNO.1-2所示的第一引物对以及SEQIDNO.3所示的第一探针；所述第二核酸组合物包括SEQIDNO.4-5所示的第二引物对以及SEQIDNO.6所示的第二探针。


3.根据权利要求2所述的核酸组合物，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙依欣，杨峰，张晓婷，
申请(专利权)人：上海基灵生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31