一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白及其在化妆品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白及其在化妆品中的应用。该长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示。该长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列是由金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后得到的。本发明专利技术提供的长效重组金属硫蛋白相较于金属硫蛋白含有6×组氨酸标签，能实现金属离子亲和层析纯化蛋白，本发明专利技术提供的长效重组金属硫蛋白还具有降解重金属毒害作用、清除自由基、激活(失活)Zn调节蛋白、防止机体衰老等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白及其在化妆品中的应用
本专利技术涉及新兴生物医学领域，尤其涉及一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，一种长效重组金属硫蛋白的活性检测方法，以及一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白在化妆品中的应用。
技术介绍
金属硫蛋白(metallothionein，MT)是一种低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白，MT的共同特征有：分子量低(6-7kDa)；金属含量高(7-12个金属离子)；半胱氨酸含量高(20-30％Cys-X-Cys序列)，缺乏芳香族氨基酸，组氨酸含量极少；由α结构域和β结构域组成。动物MT根据等电点和氨基酸组成的不同，可分为MT-1、MT-2、MT-3和MT-4四种亚型。MT-4在口腔上皮、食道、新生的皮肤等组织的复层鳞状上皮细胞中表达，主要结合Zn、Cu两种离子，它们能够帮助调节胃酸的pH值，提高舌头对味道和质地的识别，对皮肤创伤具有一定的保护和修护作用。研究发现，MT与生物体内的多种功能相关，主要有清除自由基、激活(失活)Zn调节蛋白等，其中最基本、最主要的功能是与金属离子相结合，从而解除或降低生物生活环境中的重金属毒害作用，然而到目前为止，MT的诸多功能的作用机理仍不清楚。初步认为重组人长效重组金属硫蛋白应用于化妆品的意义有以下几点：清除体内自由基、防止机体衰老。由于MT中还原状态的巯基具有亲核性，其中的金属具有动力学不稳定性，这使得MT对自由基如羟自由基(·OH)、氧自由基(·O)或一氧化氮(NO)等有较强的清除作用。参与体内微量元素代谢和解除重金属的毒性。MT含量丰富的细胞或组织，可以抵抗电离辐射或紫外线引起细胞组织损伤，修复细胞损伤功能。MT对Zn和Cu的代谢起着细胞间和细胞内的控制作用，可能是因为Zn-MT和Cu-MT对许多辅酶有激活作用。MT可以与Pb、As(砷)、Hg等有毒金属紧密结合，起到解除重金属对人体的毒性，对保护大脑、肝、肾等重要器官具有极其重要意义。调控机体生长发育和细胞代谢。MT表达量的升高能诱导细胞抗凋亡，而缺乏MT表达的细胞(如MT基因敲除)对细胞凋亡敏感，其作用机制是通过阻止氧化性细胞损伤达到抑制细胞凋亡的作用。MT在皮肤伤口愈合治疗中发挥作用。研究者对MT在创面愈合过程的作用进行了研究，在正常皮肤增生的表皮组织及增生的病损皮肤区域染色，通过增殖性因素刺激皮肤，证实MT基因mRNA表达增加，提示MT涉及表皮角质细胞的增生。另外，MT和一些细胞因子可以相互作用共同调节伤口愈合过程，如转化生长因子-β(TGF-β)可阻止MT基因表达和DNA合成；色谱学分析IL-1诱导MT合成可调整Zn的再分布，显著增加皮肤、肝脏、骨髓细胞的MT-1和MT-2的表达。
技术实现思路
为了克服机体衰老、重金属的毒性较高的技术问题，本专利技术提供一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，一种长效重组金属硫蛋白的活性检测方法，以及一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白在化妆品中的应用，该长效重组金属硫蛋白具有清除体内自由基、防止机体衰老及解除重金属的毒性等优点。本专利技术采用以下技术方案实现：一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，该长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列如SeqIDNO.1所示。作为上一步技术方案的改进，长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列是由金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后得到的；金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后得到的核苷酸序列包括NotI酶切位点、XbaI酶切位点、起始密码子、终止密码子及6×His标签序列。His为生物化学领域中公知的组氨酸英文名称的英文缩写，用于指代组氨酸。进一步地，NotI酶切位点的核苷酸序列为GCGGCCGC。进一步地，XbaI酶切位点的核苷酸序列为TCTAGA。进一步地，起始密码子的核苷酸序列为ATG。进一步地，终止密码子的核苷酸序列为TAA。进一步地，6×His标签序列为CATCACCATCACCATCAC。作为上一步技术方案的改进，长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列所对应的氨基酸序列如SeqIDNO.2所示。本实施例还提供一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白的活性检测方法，该活性检测方法用于检测如上任意一项所述的酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白的活性。本实施例还提供一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白在化妆品中的应用，其采用如上任意一项所述的酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术提供的长效重组金属硫蛋白相较于金属硫蛋白含有大量的组氨酸。组氨酸分子中含有咪唑基，而咪唑基能与Fe2+或其他金属离子形成配位化合物，从而促进长效重组金属硫蛋白对铁及其他金属的吸收。2、本专利技术提供的长效重组金属硫蛋白具有清除自由基、激活(失活)Zn调节蛋白、防止机体衰老、解除重金属的毒性等优点。序列表说明(序列表内容单独提供)SeqIDNO.1所示为本专利技术实施例中长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列。SeqIDNO.2所示为本专利技术实施例中长效重组金属硫蛋白的氨基酸序列。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1本实施例提供了一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，该长效重组金属硫蛋白具有清除自由基、激活(失活)Zn调节蛋白、防止机体衰老、降解重金属毒害作用等优点。该长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列如SeqIDNO.1所示。该长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列所对应的氨基酸序列如SeqIDNO.2所示。长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列是由金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后得到的。金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后得到的核苷酸序列包括NotI酶切位点、XbaI酶切位点、起始密码子、终止密码子及6×His标签序列。NotI酶切位点的核苷酸序列为GCGGCCGC；XbaI酶切位点的核苷酸序列为TCTAGA；起始密码子的核苷酸序列为ATG；终止密码子的核苷酸序列为TAA；6×His标签序列为CATCACCATCACCATCAC。在本实施例中，金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后获得的核苷酸序列：GCGGCCGCAATGGATCCTAGGGAGTGTGTGTGTATGTCAGGTGGGATTTGCATGTGTGGGGACAATTGCAAATGTACAACTTGCAATTGCAAAACTTATTGGAAATCTTGTTGTCCCTGCTGTCCACCCGGTTGTGCCAAGTGCGCTAGAGGTTGTATTTGTAAGGGGGGATCTGACAAATGTTCATGTTGTCCACATCACCATCACCATCACTAATCTAGA。注：GCGGCCGC为NotI酶切位点，TCTAGA为XbaI酶切位点；ATG为起始密码子，TAA为终止密码子；CATCACCATCACCATCAC为6×His标签序列。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，其特征在于，所述长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，其特征在于，所述长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列如SeqIDNO.1所示。


2.如权利要求1所述的酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，其特征在于，所述长效重组金属硫蛋白的核苷酸序列是由金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后得到的；所述金属硫蛋白的原始序列经酵母密码子优化后得到的核苷酸序列包括NotI酶切位点、XbaI酶切位点、起始密码子、终止密码子及6×His标签序列。


3.如权利要求2所述的酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，其特征在于，所述NotI酶切位点的核苷酸序列为GCGGCCGC。


4.如权利要求2所述的酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，其特征在于，所述XbaI酶切位点的核苷酸序列为TCTAGA。


5.如权利要求2所述的酿酒酵母表达长效重组金属硫蛋白，其特征在于，所述起始密码子的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵俊，刘洁，许高涛，李媛媛，杨欣怡，夏兵兵，张勇，
申请(专利权)人：芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司，安徽普若汀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34