一种提高毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法技术

本发明专利技术公开了一种提高毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术是以产猪肌红蛋白毕赤酵母工程Pichia pastoris X33‑GAP‑Mb为出发菌株，在摇瓶水平进行培养基和培养条件的初步优化。以Pichia pastoris X33‑GAP‑Mb、Pichia pastorisX33‑G1‑Mb为出发菌株，在发酵罐水平进行发酵条件优化，发现DO为30％，血红素流加浓度为150mg/L时，可显著提升猪肌红蛋白的产量，达到285.42mg/L。本发明专利技术中猪肌红蛋白的生物制造具有污染少、产品质量高等优点，具有发展前景，这对于猪肌红蛋白的工业化生产具有重要的应用意义。

【技术实现步骤摘要】
一种提高毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法
本专利技术涉及一种提高毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法，属于生物工程

技术介绍
肌红蛋白是一种存在于动物肌肉细胞中的蛋白质，在生物体中具有补铁、运输氧、呼吸等重要的生理功能，可赋予肌肉组织鲜红的颜色。近年来，随着人造肉技术的发展，肌红蛋白的添加可以使得人造肉制品模拟出真肉的颜色。目前，猪肌红蛋白主要从心肌组织中提取。这种方法存在高成本、长周期、得率低、工艺复杂以及副产物多不利于分离等问题。而利用微生物细胞工厂异源合成猪肌红蛋白这种方法目前还未有报道，且尚无关于毕赤酵母工程菌生产猪肌红蛋白的发酵方法的报道，因此很有必要开展相应研究。微生物合成法相较于传统的化学法，有着很多的优势，比如减少环境污染、产品质量稳定、下游提取相对简单，实现低成本成产的可能性更大。ImpossibleFoods采用甲醇诱导型的毕赤酵母生产了大豆血红蛋白。猪肌红蛋白和大豆血红蛋白均为单亚基蛋白，因此可将毕赤酵母作为生产猪肌红蛋白的宿主菌株。虽然，甲醇诱导型表达系统具有较高的表达水平，但是甲醇是一种有毒物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高重组毕赤酵母产猪肌红蛋白的发酵方法，其特征在于，将重组毕赤酵母在含有血红素的体系中发酵，所述重组毕赤酵母表达了NCBI Reference Sequence为NP_999401.1的猪肌红蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高重组毕赤酵母产猪肌红蛋白的发酵方法，其特征在于，将重组毕赤酵母在含有血红素的体系中发酵，所述重组毕赤酵母表达了NCBIReferenceSequence为NP_999401.1的猪肌红蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毕赤酵母以PichiapastorisX33为宿主，以GAP启动子或G1启动子对所述猪肌红蛋白进行表达。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述G1启动子的序列如SEQIDNO:2所示。


4.一种生产猪肌红蛋白的方法，其特征在于，将表达猪肌红蛋白的重组毕赤酵母在含有血红素的体系中发酵，所述体系以甘油或葡萄糖为碳源；所述猪肌红蛋白的NCBIReferenceSequence为NP_999401.1。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将OD600＝8～10的所述重组毕赤酵母加入摇瓶或发酵罐中发酵生产猪肌红...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵鑫锐，张博涵，王紫微，周景文，堵国成，李江华，陈坚，钱源，
申请(专利权)人：江南大学，江苏东汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32