一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用，所述的脂肪性肝病为酒精性脂肪性肝病。经实验发现，间充质干细胞外泌体在治疗脂肪性肝病中具有明显的效果，尤其是酒精性脂肪性肝病；间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的结合可显著的提高乙醛脱氢酶的酶活，延缓了酒精性脂肪性肝病与酒精相关性癌症的发生。

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用
本专利技术属于医药领域，尤其是涉及一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用。
技术介绍
外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小均一，直径为40-100nm，密度1.10-1.18g/ml的囊泡样小体。1996年有学者发现B细胞可以通过释放能表达主要组织相容性复合体分子的外泌体促进T细胞增殖和抑制肿瘤生长。外泌体包含多种蛋白质和遗传物质，表明蛋白质等大分子物质可以装载到外泌体上。外泌体可广泛分布于不同体液，在体内有较长的半衰期。此外，外泌体可以穿透细胞膜释放mRNA到靶细胞，使受体细胞翻译转染的mRNA。目前，外泌体已经开始应用于临床治疗。个体饮酒后，经消化道吸收的酒精，90-98％自门静脉进入肝脏，通过酶的代谢处理后进入体循环，其余2-10％的酒精以原形经尿、汗、呼气排出，或转移至唾液或乳汁中。酒精代谢酶的活性因地区、民族、个体差异而有所差别，由此造成了人们对乙醇的处理能力不同及饮酒量的差异，并与酒精相关疾病的发病密切相关。目前，国内嗜酒或酒精依赖性人群高达2亿左右，酒精相关疾病的发病率居高不下。首当其冲的为酒精性肝病，包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化、纤维化乃至肝功能衰竭等，严重危害人们健康。饮酒也成为了继乙型肝炎病毒(HBV)感染之外的一个主要的危险因素。而乙醛脱氢酶2(ALDH2)作为直接参与酒精代谢的重要限速酶之一，直接决定体内乙醇和乙醛的蓄积量，其活性水平与酒精性肝病的发生有着密切的关系，进一步也会影响肝癌的发生。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用，所述的脂肪性肝病为酒精性脂肪性肝病。进一步，所述的间充质干细胞外泌体的制备方法如下：将脐带剪成小段，充分洗涤、剪碎，然后置于培养皿中，进行培养与传代，将传代培养后的间充质干细胞置于培养皿中，当细胞融合达60-90％，清洗细胞，更换无外泌体血清的培养基，继续培养，收集细胞上清，离心去除细胞与细胞碎片，提取得到外泌体。一种间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物在制备脂肪性肝病药物中的应用。一种间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物，所述的间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物的质量比为1:10-500。优选的，所述的间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物的质量比为1:100-500。更优选的，所述的间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物的质量比为1:100-350。所述的间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物的制备方法，包括如下步骤：将白皮杉醇溶于丙三醇中，得到白皮杉醇溶液，将白皮杉醇进行超声，然后加入间充质干细胞外泌体，混合均匀后即得。进一步，所述的白皮杉醇溶液的浓度为0.1-0.3ug/ml。一种脂肪性肝病药物，该药物中包含间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物。进一步，所述的药物中的组合物的浓度为1-50ug/g。所述的药物还包括药用载体、辅料或稀释剂。相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：经实验发现，间充质干细胞外泌体在治疗脂肪性肝病中具有明显的效果，尤其是酒精性脂肪性肝病；间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的在一定配比下的联合使用可显著的提高乙醛脱氢酶的酶活，延缓了酒精性脂肪性肝病与酒精相关性癌症的发生。具体实施方式除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下面结合实施例来详细说明本专利技术。实施例1间充质干细胞外泌体的制备将脐带剪成长度约1-2cm的小块，洗涤后去除脐带的动静脉，将脐带块剪碎，置于培养皿中贴壁，加入含10wt％FBS和5wt％青链双抗的低糖DMEM培养液，置于培养箱内培养，4h后添加培养液。3d后更换培养液，每隔3d换液一次。待细胞融合达60-80％后，用胰酶消化，传代培养，取P3代细胞进行实验。将P3代的间充质干细胞置于培养皿的中，当细胞融合达60-80％，清洗细胞，更换无外泌体血清的培养基，继续培养培养48-72h后，收集细胞上清，离心后去除细胞或者细胞碎片。使用NorgenBiotek品牌的Plasma/SerumExosomePurification迷你试剂盒，分离提取间充质干细胞外泌体。实施例2间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物的制备将10mg白皮杉醇溶于10ml丙三醇中，得到白皮杉醇溶液，将白皮杉醇进行超声30分钟，停止超声后加入0.05mg间充质干细胞外泌体，混合均匀后得到组合物A。将10mg白皮杉醇溶于10ml丙三醇中，得到白皮杉醇溶液，将白皮杉醇进行超声30分钟，停止超声后加入0.5mg间充质干细胞外泌体，混合均匀后得到组合物B。将10mg白皮杉醇溶于10ml丙三醇中，得到白皮杉醇溶液，将白皮杉醇进行超声30分钟，停止超声后加入0.005mg间充质干细胞外泌体，混合均匀后得到组合物C。将0.05mg间充质干细胞外泌体溶于10ml丙三醇中混合均匀后得到组合物D。将10mg白皮杉醇溶于10ml丙三醇中，混合均匀后得到组合物E。间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物的具体配比如表1所示。表1各组合物的成分配比各组合物间充质干细胞外泌体(mg)白皮杉醇(mg)组合物A0.0510组合物B0.510组合物C0.00510组合物D0.05—组合物E—10实施例3动物实验1、解酒性实验采用清洁级小鼠120只，雄性，体重20-30g。小鼠随机分为模型对照组，组合物A、组合物B、组合物C、组合物D、组合物E的剂量组，每组20只，根据体重计算出每只小鼠给药量，组合物A、组合物B、组合物C、组合物D、组合物E的剂量组每日下午2时到4时对应喂给相应剂量的组合物，模型组给同体积生理盐水。每日称重，根据体重调整组合物的喂药量。末次给药后，禁食16h，各组一次性予60％乙醇灌胃，进行翻正实验和攀附实验。实验期间，各组小鼠予普通饲料喂养，自由饮水，组间各因素无差异。翻正实验方法：以醉酒小鼠取仰卧位能持续30s作为翻正反射消失的指标。记录小鼠的翻正反射消失和恢复的时间。攀附实验方法：喂乙醇后立即放置在垂直铁丝网上，连续掉落3次后终止，记录其攀附时间。2、治疗酒精性肝病实验140只小鼠最后一次给药后，除正常对照组予同体积生理盐水外，模型对照组，组合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用，其特征在于：所述的脂肪性肝病为酒精性脂肪性肝病。/n

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用，其特征在于：所述的脂肪性肝病为酒精性脂肪性肝病。


2.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞外泌体在制备脂肪性肝病药物中的应用，其特征在于：所述的间充质干细胞外泌体的制备方法如下：将脐带剪成小段，充分洗涤、剪碎，然后置于培养皿中，进行培养与传代，将传代培养后的间充质干细胞置于培养皿中，当细胞融合达60-90％，清洗细胞，更换无外泌体血清的培养基，继续培养，收集细胞上清，离心去除细胞与细胞碎片，提取得到外泌体。


3.一种间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物在制备脂肪性肝病药物中的应用。


4.一种间充质干细胞外泌体与白皮杉醇的组合物，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋芸娟，
申请(专利权)人：奥启深圳创投科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44