基于陆生环境DNA检测斑翅果蝇的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种适用基于陆生环境DNA定量检测斑翅果蝇虫害的试剂盒产品。试剂盒中包括斑翅果蝇上游引物（BCGY4‑F）、斑翅果蝇下游引物（BCGY4‑R）、Taqman荧光探针和qPCR Mix四种试剂。本试剂盒与其他市售产品，如卡默尔蠕动泵、Millipore聚碳酸酯蚀滤膜、qPCR8连管等的配合使用下，能在与斑翅果蝇混合培养一段时间后的果蔬上定量地检测出斑翅果蝇遗留的DNA量。使用步骤：1.取果蔬，漂洗；2.蚀滤膜过滤漂洗液；3.剪碎滤膜，收集eDNA；4.以eDNA作为模板，进行qPCR反应。此产品既能应用在果园虫害的定性检测上，特异性高、时效性好；又能定量检测出环境中害虫的密度，有利于反映出害虫为害的严重状况、预测下一年虫害的发生。同时，此项产品还有着海关检测外来入侵物种、生态学种群分析方面的潜在价值。

【技术实现步骤摘要】
基于陆生环境DNA检测斑翅果蝇的试剂盒及其应用
本专利技术涉及农业生物
，尤其涉及一种基于陆生环境DNA检测斑翅果蝇的试剂盒及其应用。
技术介绍
斑翅果蝇（Drosophilasuzukii），又称铃木式果蝇，是果蝇科中一种重要的农业害虫。其雌虫的产卵器为坚硬的锯齿状，可将卵直接产于成熟或即将成熟的葡萄、草莓、蓝莓、番茄、樱桃等多种蔬果中，幼虫在果实内取食，同时，在取食点周围迅速开始腐烂，并引发真菌、细菌的二次侵染，加速水果的腐烂。一旦发生虫害，将给果园造成严重的损失。定性检测斑翅果蝇的有无及定量检测斑翅果蝇的密度，将对斑翅果蝇的虫害防治有着重要的指示意义。害虫的定量检测是经过大量实验数据确定斑翅果蝇释放到环境中的DNA量与环境中害虫的密度关系，并进行数据统计，建立相关的函数模型，从而可通过检测环境中残留的害虫DNA量推测出某区域害虫的密度，检测出的害虫密度可以反映出害虫为害的严重状况，以便及时采取措施以减小农作物受虫害所造成的经济损失，也可对下一年虫害的预防提供可参考的依据。而目前大多数专利技术都是基于害虫图像识别的自动检测技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于陆生环境DNA检测斑翅果蝇的试剂盒，其特征在于，包括根据目标害虫斑翅果蝇基因设计的引物对和Taqman荧光探针；/n所述斑翅果蝇的DNA序列如SEQ ID NO.1所示；/n所述引物对包括BCGY4-F和BCGY4-R，所述BCGY4-F的DNA序列如SEQ ID NO.2所示，所述BCGY4-R的DNA序列如SEQ ID NO.3所示；/n所述Taqman荧光探针的DNA序列如SEQ ID NO.4所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于陆生环境DNA检测斑翅果蝇的试剂盒，其特征在于，包括根据目标害虫斑翅果蝇基因设计的引物对和Taqman荧光探针；
所述斑翅果蝇的DNA序列如SEQIDNO.1所示；
所述引物对包括BCGY4-F和BCGY4-R，所述BCGY4-F的DNA序列如SEQIDNO.2所示，所述BCGY4-R的DNA序列如SEQIDNO.3所示；
所述Taqman荧光探针的DNA序列如SEQIDNO.4所示。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
所述SEQIDNO.1的具体序列为：
GGAAAGTCGTCGCCAAAGTTGCCGTCACATGTTGCACTTCTCAGCCCGCCATAATTGCTCCTAATTGAAATGCGAAACCCGCAACAAAACTGAACCGAAATGCCAGC；
所述SEQIDNO.2的具体序列为：GGAAAGTCGTCGCCAAAGTT；
所述SEQIDNO.3的具体序列为：GCTGGCATTTCGGTTCAGTT；
所述SEQIDNO.4的具体序列为：CACATGTTGCACTTCTCAGCCCGCCATAA。


3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫晶，张翼飞，刘雨芳，欧雪儿，许铭元，黄汇，
申请(专利权)人：湖南科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43