一种恶性疟原虫RIFIN重组蛋白PfRIFIN-55的构建、制备及用途制造技术

本发明专利技术提供了一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术还提供了一种含有基因PF3D7_0833400的重组质粒和含有蛋白PfRIFIN‑55的蛋白芯片。还公开了该种恶性疟原虫RIFIN重组蛋白的制备方法。与对照PfMSP1‑42相比，本发明专利技术的蛋白不仅具有较好的可特异性识别感染恶性疟原虫病人血清的能力，且对被恶性疟原虫感染的重症和非重症患者血清免疫反应表现出明显的差异，对重症患者血清的免疫反应阳性率明显低于对非重症患者血清免疫反应的阳性率。

【技术实现步骤摘要】
一种恶性疟原虫RIFIN重组蛋白PfRIFIN-55的构建、制备及用途
本专利技术属于生物基因工程领域，涉及一种恶性疟原虫RIFIN蛋白，具体来说是一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白的构建、制备和用途。
技术介绍
基因工程(geneticengineering)又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因进行重新组合到一个新的基因表达宿主中，使其能大量生产具有生物活性的蛋白产物。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段，是当今分子生物学领域应用最广泛的技术手段之一。因为高死亡率和广泛的抗疟药物的抗药性，恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)已成为最危险的疟原虫，并且在世界上疟疾最严重的大陆非洲地区占主导地位。恶性疟原虫感染导致重症疟疾发病甚至死亡的主要原因是疟原虫指数型生长使感染的红细胞增多导致严重贫血，成熟恶性疟原虫感染的红细胞与微血管内皮细胞的粘附导致微静脉血管系统堵塞，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白，其特征在于：其基因序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白，其特征在于：其基因序列如SEQIDNO.1所示，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。


2.一种含有恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400的重组质粒，其特征在于：含有恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400。


3.一种蛋白芯片，其特征在于：含有恶性疟原虫RIFIN蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。


4.一种用于恶性疟原虫RIFIN蛋白基因PCR扩增的特异性引物，其特征在于：其上游序列如SEQIDNO：2所示；其下游序列如SEQIDNO：3所示。


5.权利要求1所述一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
1)扩增恶性疟原虫RIFIN基因序列，所述的恶性疟原虫RIFIN基因片段序列如SEQIDNO.1所示；扩增恶性疟原虫RIFIN蛋白基因的上游序列如SEQIDNO：2所示，下游序列如SEQIDNO：3所示；
2)将1)中得到的基因片段与载体pEU-E01-His-N2连接，构建获得重组质粒pEU-E01-His-N2-PfRIFIN-55，将所述重组质粒分别转入感受态大肠杆菌E.coliDH5α中，获得的重组菌株通过PCR和琼脂糖凝胶电泳验证确认；
3)将2)中得到的以pEU-E01-His-N2为载体的重组菌株接种于LB液体培养基培养；
4)将3)中得到菌液采用试剂盒抽提质粒，获得重组质粒pEU-E01-His-N2-PfRIFIN-55；
5)将4)获得重组质粒pEU-E01-His-N2-PfRIFIN-55用小麦胚芽无细胞蛋白表达系统表达获得恶性疟原虫RIFIN蛋白，表达获得的蛋白采用Westernblot检测。


6.如权利要求5所述的一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白的制备方法，其特征在于：在步骤1)中，设计SEQIDNO：2和SEQIDNO：3...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯科维·卡森，陈军虎，陈绅波，崔延冰，沈海默，徐斌，周晓农，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心，
类型：发明
国别省市：上海;31