肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒及其处理方法技术

本发明专利技术揭示了一种肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒及其处理方法，包括冻存试剂盒与复苏试剂盒，冻存试剂盒包括玻璃化液，复苏试剂盒包括复苏液，其中，所述玻璃化液与所述复苏液所含成分完全清楚且稳定可控，可直接应用于活性肿瘤组织/或细胞的冻存、复苏，无需稀释或自行配制，简化了操作。使用本发明专利技术进行肿瘤组织/或细胞在玻璃化冻存前后，生物学活性和形态学特征未发生显著的改变，说明该玻璃化冻存、复苏溶液体系较好的维持了肿瘤组织/或细胞的微环境和肿瘤异质性特征，且冻存的肿瘤组织/或细胞复苏后进行原位移植，成瘤率高，可有效的冻存活性肿瘤组织/或细胞。

【技术实现步骤摘要】
肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒及其处理方法
本专利技术涉及肿瘤组织/或细胞的处理
，具体地说，有关于重力组织冻存、复苏试剂盒及其处理方法。
技术介绍
玻璃化冻存是一种新型的低温保存技术，对临床活肿瘤组织/或细胞样本应用于科研基础研究和临床领域具有潜在的应用价值。常用的活性肿瘤组织/或细胞保存方法，例如丙二醇慢速程序化冷冻法、液氮直投法(超速冷冻)及二甲基亚砜玻璃化冷冻法会使活性肿瘤组织/或细胞完全或部分失去活性，导致大量宝贵的临床活性肿瘤组织/或细胞因无法得到长期有效的高活性保存而被浪费。玻璃化液早在1985年由Rau和Fahy研制，主要应用于卵母细胞、精子细胞以及多种干细胞的低温保存。该方法通过高浓度冻存液充分反应后快速保护剂中降温，转变为玻璃样半透明状，并予以低温保存。其过程中细胞内外无冰晶形成，避免了细胞的结构破坏，可高度保存组织活性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供活肿瘤组织/或细胞冻存、复苏试剂盒及其处理方法。为实现上述专利技术目的之一，本专利技术提供一种肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，适用于人体原代乳腺癌肿瘤组织/或细胞的冻存和复苏，所述肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒包括肿瘤组织/或细胞冻存试剂盒和肿瘤组织/或细胞复苏试剂盒，所述肿瘤组织/或细胞冻存试剂盒包括：玻璃化液1，其组分包括：GibcoDMEM培养基65-95V/V％、二甲基亚砜5.5-20V/V％、乙二醇3.5-15V/V％、牛血清白蛋白0.5-4W/V％、蔗糖1-5W/V％、甲基纤维素(4000CP)0.05-0.8W/V％、羟乙基淀粉0.25-0.6W/V％和葡萄糖15-35W/V％；以及玻璃化液2，其组分包括：GibcoDMEM培养基65-95V/V％、二甲基亚砜5.5-20V/V％、乙二醇8-20V/V％、牛血清白蛋白0.5-4W/V％、蔗糖10-20W/V％、甲基纤维素(4000CP)0.05-0.8W/V％、聚乙烯吡咯烷酮0.25-0.6W/V％和葡萄糖15-35W/V％；所述肿瘤组织/或细胞复苏试剂盒包括：复苏液1，其组分包括：Earl’s平衡盐溶液65-85V/V％，1x磷酸盐缓冲液15-35V/V％，牛血清白蛋白1-3w/v％，蔗糖10-40w/v％和葡萄糖15-35w/v％；复苏液2，其组分包括：Earl’s平衡盐溶液65-85V/V％，1x磷酸盐缓冲液15-35V/V％，牛血清白蛋白1-3w/v％，蔗糖10-20w/v％和葡萄糖15-35w/v％；以及复苏液3，其组分包括：Earl’s平衡盐溶液75-95V/V％，1x磷酸盐缓冲液5-25V/V％，牛血清白蛋白1-3w/v％和葡萄糖15-35w/v％。作为可选的技术方案，所述玻璃化液1的组分包括：GibcoDMEM培养基80V/V％，二甲基亚砜10V/V％，乙二醇10V/V％，牛血清白蛋白2W/V％，蔗糖1W/V％、甲基纤维素(4000CP)0.05W/V％、羟乙基淀粉0.25W/V％和葡萄糖25W/V％；以及所述玻璃化液2的组分包括：DMEM培养基70V/V％，二甲基亚砜15V/V％，乙二醇12V/V％，牛血清白蛋白3W/V％，蔗糖20W/V％、甲基纤维素(4000CP)0.1W/V％、聚乙烯吡咯烷酮0.25W/V％和葡萄糖30W/V％。作为可选的技术方案，还包括肿瘤组织/或细胞切片模具，所述肿瘤组织/或细胞切片模具包括：底座，所述底座包括上表面，所述上表面设有凹陷部以及自所述上表面垂直向下，沿横向设有多条等距分布的、深度低于所述凹陷部最低点的切刀导向槽，其中，所述底座的两侧还设有把手。作为可选的技术方案，所述凹陷部呈椭圆体，所述椭圆体的宽度为30mm，长度为35mm；所述凹陷部最低点到所述底座的上表面的垂直距离为25mm。作为可选的技术方案，所述切刀导向槽的深度低于所述凹陷部最低点5mm；相邻两条切刀导向槽之间的间距1mm；所述切刀导向槽的数量为23条。作为可选的技术方案，所述复苏液1的组分包括：Earl’s平衡盐溶液65V/V％，1x磷酸盐缓冲液35V/V％，牛血清白蛋白1w/v％，蔗糖30w/v％和葡萄糖25w/v％；所述复苏液2的组分包括：Earl’s平衡盐溶液75V/V％，1x磷酸盐缓冲液25V/V％，牛血清白蛋白1w/v％，蔗糖15w/v％和葡萄糖25w/v％；以及所述复苏液3的组分包括：Earl’s平衡盐溶液95V/V％，1x磷酸盐缓冲液5V/V％，牛血清白蛋白1w/v％，蔗糖10w/v％和葡萄糖15w/v％。本专利技术还提供一种对肿瘤组织/或细胞冻存的处理方法，适用于人体原代乳腺癌肿瘤组织/或细胞的冻存处理，利用如上所述的肿瘤组织/或细胞冻存试剂盒对肿瘤组织/或细胞进行冻存，所述肿瘤组织/或细胞冻存的处理方法包括：S1、肿瘤组织/或细胞样本经1x磷酸盐缓冲液清洗2遍，去除包膜、血管及粘液性坏死组织；S2、用所述肿瘤切块模具将肿瘤组织/或细胞进行切片，经1x磷酸盐缓冲液再次清洗；S3、将切片后的肿瘤组织/或细胞先浸入5ml所述玻璃化液1，浸入时间10min；再浸入5ml所述玻璃化液2中，浸入时间10min；S4、取出S3中玻璃化冻存后的肿瘤组织/或细胞并沥干，将肿瘤组织/或细胞迅速移入冻存管内，于无菌液氮罐中保存。作为可选的技术方案，所述S1中将肿瘤组织/或细胞样本进行血管、包膜及坏死组织的处理过程，被处理肿瘤组织/或细胞样本需完全浸入1x磷酸盐缓冲液中，且操作轻柔，避免肿瘤组织/或细胞样本损伤。作为可选的技术方案，所述S2中将肿瘤组织/或细胞进行切片，肿瘤组织/或细胞的切片为1×1×1mm。10、如权利要求8中所述肿瘤组织/或细胞冻存的处理方法，其特征在于：所述S4中将S3玻璃化冻存后的肿瘤组织/或细胞沥干并迅速移入冻存管，于液氮罐中保存。本专利技术还提供一种对肿瘤组织/或细胞复苏的处理方法，适用于人体原代乳腺癌肿瘤组织/或细胞的复苏处理，其特征在于，利用如上所述肿瘤组织/或细胞复苏试剂盒对肿瘤组织/或细胞进行复苏，所述肿瘤组织/或细胞复苏的处理方法包括：S11、将从液氮中取出的肿瘤组织/或细胞迅速浸入36-38℃水浴加热的10-20ml复苏液1中，浸入时间5-10min；S22、将所述复苏液1处理后的肿瘤组织/或细胞取出并浸入5-10ml复苏液2中，浸入时间5-10min；S33、将所述复苏液2处理后的肿瘤组织/或细胞取出并浸入5-10ml复苏液3中，浸入时间5-10min；S44、将所述复苏液3处理后的肿瘤组织/或细胞用1x磷酸盐缓冲液清洗2遍，浸入无菌生理盐水，获得复苏后的肿瘤组织/或细胞。作为可选的技术方案，所述S11中将从液氮中取出的肿瘤组织/或细胞迅速浸入37℃水浴预热的10ml复苏液1中，浸入时间5min。作为可选的技术方案，所述S22中,将所述复苏液1处理后的肿瘤组织/或细胞转入5ml室温复苏液2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，适用于人体原代乳腺癌肿瘤组织/或细胞的冻存和复苏，其特征在于，所述肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒包括肿瘤组织/或细胞冻存试剂盒和肿瘤组织/或细胞复苏试剂盒，/n所述肿瘤组织/或细胞冻存试剂盒包括：/n玻璃化液1，其组分包括：Gibco DMEM培养基65-95 V/V%、二甲基亚砜5.5-20 V/V %、乙二醇3.5-15 V/V %、牛血清白蛋白0.5-4 W/V %、蔗糖1-5 W/V %、甲基纤维素（4000CP）0.05-0.8 W/V%、羟乙基淀粉 0.25-0.6 W/V %和葡萄糖15-35 W/V %；以及/n玻璃化液2，其组分包括：Gibco DMEM培养基65-95 V/V%、二甲基亚砜5.5-20 V/V %、乙二醇8-20 V/V %、牛血清白蛋白0.5-4 W/V %、蔗糖10-20 W/V %、甲基纤维素（4000CP）0.05-0.8 W/V%、聚乙烯吡咯烷酮0.25-0.6 W/V %和葡萄糖 15-35 W/V %；/n所述肿瘤组织/或细胞复苏试剂盒包括：/n复苏液1，其组分包括：Earl’s 平衡盐溶液65-85V/V %，1x磷酸盐缓冲液15-35 V/V %，牛血清白蛋白1-3w/v%，蔗糖10-40w/v%和葡萄糖15-35 w/v%；/n复苏液2，其组分包括：Earl’s平衡盐溶液 65-85V/V %，1x磷酸盐缓冲液15-35 V/V %，牛血清白蛋白1-3w/v%，蔗糖10-20w/v%和葡萄糖15-35 w/v%；以及/n复苏液3，其组分包括：Earl’s 平衡盐溶液75-95V/V %，1x磷酸盐缓冲液5-25V/V %，牛血清白蛋白1 -3w/v%和葡萄糖15-35w/v%。/n...

【技术特征摘要】
20200412 CN 20201028260261.一种肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，适用于人体原代乳腺癌肿瘤组织/或细胞的冻存和复苏，其特征在于，所述肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒包括肿瘤组织/或细胞冻存试剂盒和肿瘤组织/或细胞复苏试剂盒，
所述肿瘤组织/或细胞冻存试剂盒包括：
玻璃化液1，其组分包括：GibcoDMEM培养基65-95V/V%、二甲基亚砜5.5-20V/V%、乙二醇3.5-15V/V%、牛血清白蛋白0.5-4W/V%、蔗糖1-5W/V%、甲基纤维素（4000CP）0.05-0.8W/V%、羟乙基淀粉0.25-0.6W/V%和葡萄糖15-35W/V%；以及
玻璃化液2，其组分包括：GibcoDMEM培养基65-95V/V%、二甲基亚砜5.5-20V/V%、乙二醇8-20V/V%、牛血清白蛋白0.5-4W/V%、蔗糖10-20W/V%、甲基纤维素（4000CP）0.05-0.8W/V%、聚乙烯吡咯烷酮0.25-0.6W/V%和葡萄糖15-35W/V%；
所述肿瘤组织/或细胞复苏试剂盒包括：
复苏液1，其组分包括：Earl’s平衡盐溶液65-85V/V%，1x磷酸盐缓冲液15-35V/V%，牛血清白蛋白1-3w/v%，蔗糖10-40w/v%和葡萄糖15-35w/v%；
复苏液2，其组分包括：Earl’s平衡盐溶液65-85V/V%，1x磷酸盐缓冲液15-35V/V%，牛血清白蛋白1-3w/v%，蔗糖10-20w/v%和葡萄糖15-35w/v%；以及
复苏液3，其组分包括：Earl’s平衡盐溶液75-95V/V%，1x磷酸盐缓冲液5-25V/V%，牛血清白蛋白1-3w/v%和葡萄糖15-35w/v%。


2.如权利要求1所述的肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，其特征在于，
所述玻璃化液1的组分包括：GibcoDMEM培养基80V/V%，二甲基亚砜10V/V%，乙二醇10V/V%，牛血清白蛋白2W/V%，蔗糖1W/V%、甲基纤维素（4000CP）0.05W/V%、羟乙基淀粉0.25W/V%和葡萄糖25W/V%；以及
所述玻璃化液2的组分包括：DMEM培养基70V/V%，二甲基亚砜15V/V%，乙二醇12V/V%，牛血清白蛋白3W/V%，蔗糖20W/V%、甲基纤维素（4000CP）0.1W/V%、聚乙烯吡咯烷酮0.25W/V%和葡萄糖30W/V%。


3.如权利要求1所述的肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，其特征在于，还包括肿瘤组织/或细胞切片模具，所述肿瘤组织/或细胞切片模具包括：底座，所述底座包括上表面，所述上表面设有凹陷部以及自所述上表面垂直向下，沿横向设有多条等距分布的、深度低于所述凹陷部最低点的切刀导向槽，其中，所述底座的两侧还设有把手。


4.如权利要求3所述的肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，其特征在于，所述凹陷部呈椭圆体，所述椭圆体的宽度为30mm，长度为35mm；所述凹陷部最低点到所述底座的上表面的垂直距离为25mm。


5.如权利要求3所述的肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，其特征在于，所述切刀导向槽的深度低于所述凹陷部最低点5mm；相邻两条切刀导向槽之间的间距1mm；所述切刀导向槽的数量为23条。


6.如权利要求1所述的肿瘤组织/或细胞冻存和复苏试剂盒，其特征在于，
所述复苏液1的组分包括：Earl’s平衡盐溶液65V/V%，1x磷酸盐缓冲液35V/V%，牛血清白蛋白1w/v%，蔗糖30w/v%和葡萄糖25w/v%；
所述复苏液2的组分包括：Earl’s平衡盐溶液75V/V%，1x磷酸盐缓冲液25V/V%，牛血清白蛋白1w/v%，蔗糖15w/v%和葡萄糖25w/v%；以及
所述复苏液3的组分包括：Earl’s平衡盐溶液95V/V%，1x磷酸盐缓冲液5V/V%，牛血清白蛋白1w/v%，蔗糖10w/v%和葡萄糖15w/v%。


7.一种对肿瘤组织/或细胞冻存的处理方法，适用于人体原代乳腺癌肿瘤组织/或细胞的冻存处理，其特征在于，利用如权利要求1-5中任一项所述的肿瘤组织/或细胞冻存试...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓娇，刘星，张红霞，陆重益，张文平，
申请(专利权)人：江苏安泰康健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32