一种小花清风藤叶中的化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种小花清风藤叶中的化合物及其制备方法和应用，通过乙醇回流提取，石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，综合采用正向硅胶柱色谱、反相硅胶(ODS)柱色谱、羟丙基葡聚糖凝胶等色谱和HPLC‑UVELSD(高效液相‑紫外‑蒸发光检测联用技术)等手段对小花清风藤有效成分进行分离和纯化，该化合物可在制备治疗抗类风湿关节炎药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种小花清风藤叶中的化合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及药学化合物领域，具体涉及一种小花清风藤叶中的化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一种以损害关节滑膜、软骨和骨骼为特征的慢性炎症性疾病。随着关节腔内滑膜组织增生、炎症细胞浸润，血管醫形成，逐渐引发软骨和骨的不可逆损伤，导致RA患者不同程度关节功能丧失[1]。其病情复杂，缠绵难愈，致残率极高，若未进行及时有效的治疗，二年致残率为50％，三年致残率达70％[2]。因此，积极开展对此类疾病的病因病理机制研究及治疗药物的研发工作势在必行。目前市场上用于治疗RA的化学药物主要为非甾体抗炎药、改善病情的抗风湿药物、肾上腺糖皮质激素及生物制剂等。虽然以上药物可缓解疼痛和减轻炎症反应。但众所周知，这些药物容易产生致畸副作用、骨质疏松和骨坏死等严重副反应，且易产生耐药性，不适合治疗RA这种需要长期用药的慢性疾病[3,4]。与之相比，中药以其疗效独特、毒副作用小、开发潜能巨大引起人们广泛的关注，在RA的治疗中扮演着非常重要的角色，具有较明显的特本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小花清风藤叶中的化合物，其特征在于，所述化合物的结构式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种小花清风藤叶中的化合物，其特征在于，所述化合物的结构式如下：





2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物的制备方法为：
取小花清风藤叶10～21kg，用8～12倍量的60～80％乙醇回流提取2～4次，每次提取1～3h，合并提取液，减压回收得乙醇提取物，加8～12L蒸馏水溶散后，分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，萃取至有机层接近透明为止，减压回收有机溶剂至浸膏，减压干燥后的干燥品分别为石油醚层、乙酸乙酯层、水饱和正丁醇层；
取正丁醇层萃取物260～300g，用甲醇溶解，加入400～500g硅胶利用研钵均匀搅拌研磨，使样品搅拌均匀至完全被吸附，放置低温烘箱中烘干，备用，取硅胶2～6kg用CH2Cl2搅拌后湿法装柱，采用干法上样的方式将样品装入硅胶柱中，后继续用二氯甲烷和甲醇按不同比例的CH2Cl2：CH3OH进行梯度洗脱，洗脱顺序为：10：1、8：1、6：1、4：1、2：1、1：1、CH3OH进行洗脱，见表1，利用旋转蒸发器将所有馏分分别进行减压浓缩，将其按照不同的洗脱梯度依次命名为A、B、C、D、E、F、G等7段；
表1正丁醇层样品硅胶柱洗脱梯度



合瓶时，采用GF-254薄层层析硅胶板，毛细管0.3点板，依次用展开剂比例为1：1、3：1、10:1、20:1的二氯甲烷：甲醇洗脱，显色剂为10％浓硫酸的乙醇溶液，在紫外灯254nm和365nm下观察，然后将显色相近的编号浓缩合瓶；
合瓶数据：1-14、15-16、17-20、21-26、27-39、40-45、46-56、57-74、75-80、81-91、92-110、111-123、124-136、137-172、173-178、179-180、181-183、184-190、191-194、195-202、203-221颗粒)、222-225、226-264颗粒、265-269、270-278、279-324、325-369、370-404、405-427、428-459、460-490,其中463、466、471、475、477、482单独一瓶、491-501、502-509、510-542、543-565、566-681、682-708、709-742、743-801、802-863、864-899、900-923、924-939、940-979、980-996、997-1018、1019-1093；
纯化1：取合瓶92-110，8～14g,用甲醇超声溶解，称取20～30gC-18反向柱填料ODS倒入研钵中，反复搅拌研磨，使其混合均匀直至完全吸收后备用,称取25～35g反相柱填料ODS，用甲醇浸泡，搅拌均匀后采用湿法装柱法上柱，使其尽量平整,然后平衡柱子：依次采用甲醇：水80：20、60：40、40：60、20：80平衡柱子，每次使用3倍柱体积，平衡结束后采用干法上样法将样品加入柱子中，将样品以甲醇和水进行梯度洗脱，洗脱顺序为：依次用比例为40：60、60：40、80：20的甲醇：水、纯甲醇洗脱，洗脱数据为下表2：
表2反相柱ODS洗脱数据






合瓶数据：采用GF-254薄层层析硅胶板，毛细管0.3点板,展开剂为20：1的乙酸乙酯：甲醇，显色剂为10％浓硫酸的乙醇溶液1、2、3-5、6-7、8-9、10-13、14-15、16-18、17单独分开、19-20、21-22、23-27、28-29、30-31、32-33、34-37、38、39-42、43-46、47-49；展开剂为5：1的乙酸乙酯：甲醇50-56、57-65；
纯化2取正丁醇层合瓶数据为370-404，8～14g，用甲醇超声溶解，称取15～30gC-18反向柱填料ODS倒入研钵中，反复搅拌研磨，使其混合均匀直至完全吸收后备用，称取24～35g反相柱填料ODS，用甲醇浸泡，采用湿法装柱法上柱，然后使用甲醇与水按20％的梯度，从80％等梯度平衡至20％，每次加入3倍柱体积的量，之后采用干法上样的方式将样品加入柱子中，然后在用甲醇与水梯度洗脱，20％甲醇水、40％甲醇水、60％甲醇水、80％甲醇水、100％甲醇，洗脱数据为下表3；
表3反相柱ODS洗脱数据



合瓶数据：采用GF-254薄层层析硅胶板，毛细管0.3点板,展开剂为二氯甲烷与甲醇不同比列展开，显色剂为10％浓硫酸的乙醇溶液1-4、5、6-8、9-16、17、18-24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37-38、39-41、42-44、45-52、53、54、55-63、64-65、66-68、69-72；
将两根ODS柱子洗脱所得样品分别放入低温烘箱中烘干，烘干后使用纯甲醇超声溶解后过超滤膜备用，设置半制备高效液相流速为3ml/min,最大压力为20～30Mpa，时间700～900min时间，然后将所纯化后的样品点硅胶薄层板，10％硫酸-乙醇显色后在紫外灯下观察是否为单一斑点，若为单一斑点则可将样品过超滤膜后注射入髙液小瓶中，然后进行高效液相检测是否为单一化合物，进一步经核磁共振鉴定化合物结构，在样品6:1C-2编号17中和样品8:1B-2编号57-65中得到，样品6:1半制备高效液相流动相浓度为85％甲醇水洗脱获得化合物1，样品8:1的流动相浓度为94％甲醇水洗脱获得化合物2和化合物3，样品10:1A-8经半制备高效液相流动相浓度为90％甲醇水洗脱获得化合物4(14mg)和化合物5(17mg)，样品4:1D1经半制备高效液相流动相浓度为83％甲醇水洗脱获得化合物6,化合物7和化合物8，样品2:1E-2经半制备高效液相流动相浓度为68％甲醇水洗脱获得化合物9和化合物10。


3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述化合物的制备方法为：
取小花清风藤叶13～18kg，用9～11倍量的65～75％乙醇回流提取2～3次，每次提取1～2h，合并提取液，减压回收得乙醇提取物，加9～11L蒸馏水溶散后，分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，萃取至有机层接近透明为止，减压回收有机溶剂至浸膏，减压干燥后的干燥品分别为石油醚层、乙酸乙酯层、水饱和正丁醇层，取正丁醇层萃取物270～290g，用甲醇溶解，加入430～460g硅胶利用研钵均匀搅拌研磨，使样品搅拌均匀至完全被吸附，放置低温烘箱中烘干，备用，取硅胶3～5kg用CH2Cl2搅拌后湿法装柱，采用干法上样的方式将样品装入硅胶柱中，后继续用二氯甲烷和甲醇按不同比例的CH2Cl2：CH3OH进行梯度洗脱，洗脱顺序为：10：1、8：1、6：1、4：1、2：1、1：1、CH3OH进行洗脱，见表1，利用旋转蒸发器将所有馏分分别进行减压浓缩，将其按照不同的洗脱梯度依次命名为A、B、C、D、E、F、G等7段；
表1正丁醇层样品硅胶柱洗脱梯度



合瓶时，采用GF-254薄层层析硅胶板，毛细管0.3点板，依次用展开剂比例为1：1、3：1、10:1、20:1的二氯甲烷：甲醇洗脱，显色剂为10％浓硫酸的乙醇溶液，在紫外灯254nm和365nm下观察，然后将显色相近的编号浓缩合瓶；
合瓶数据：1-14、15-16、17-20、21-26、27-39、40-45、46-56、57-74、75-80、81-91、92-110、111-123、124-136、137-172、173-178、179-180、181-183、184-190、191-194、195-202、203-221颗粒)、222-225、226-264颗粒、265-269、270-278、279-324、325-369、370-404、405-427、428-459、460-490,其中463、466、471、475、477、482单独一瓶、491-501、502-509、510-542、543-565、566-681、682-708、709-742、743-801、802-863、864-899、900-923、924-939、940-979、980-996、997-1018、1019-1093；
纯化1：取合瓶92-110，9～13g,用甲醇超声溶解，称取22～28gC-18反向柱填料ODS倒入研钵中，反复搅拌研磨，使其混合均匀直至完全吸收后备用,称取28～32g反相柱填料ODS，用甲醇浸泡，搅拌均匀后采用湿法装柱法上柱，使其尽量平整,然后平衡柱子：依次采用甲醇：水80：20、60：40、40：60、20：80平衡柱子，每次使用3倍柱体积，平衡结束后采用干法上样法将样品加入柱子中，将样品以甲醇和水进行梯度洗脱，洗脱顺序为：依次用比例为40：60、60：40、80：20的甲醇：水、纯甲醇洗脱，洗脱数据为下表2：
表2反相柱ODS洗脱数据



合瓶数据：采用GF-254薄层...

【专利技术属性】
技术研发人员：周永强，赵春丽，韩伟，殷鑫，薛娟，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52