一种免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法技术

本发明专利技术提供一种免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法，涉及免疫细胞体外扩增技术领域。所述免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法主要包括免疫细胞激活培养基对单个核细胞的激活培养、初步扩增培养基的初步诱导扩增培养、二次扩增培养基的二次扩增培养、冻存液冻存处理、冻存液混合解冻。本发明专利技术克服了现有技术的不足，有效提高了免疫细胞的诱导效率，且体外扩增速度快，安全性高，使细胞在长期保存后仍具有良好的细胞特性。存后仍具有良好的细胞特性。

A method of inducing expansion, cryopreservation and resuscitation of immune cells in vitro

【技术实现步骤摘要】
一种免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法


[0001]本专利技术涉及免疫细胞体外扩增
，具体涉及一种免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法。

技术介绍

[0002]癌症是现代社会中对人类威胁最大的疾病之一，对癌症的治疗一直是现代医学的关注点。肿瘤免疫治疗被国内外医学界公认为第四大肿瘤治疗法，其中自体免疫细胞(T细胞、NK细胞)治疗技术属国家卫生部首批允许临床应用的第三类医疗技术。近年来，自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)免疫治疗技术在世界范围内正在成为一种可靠的抗癌疗法，适用于多种恶性肿瘤的临床治疗且副作用小，不损伤正常组织。NK细胞于20世纪70年代进入人们的视线，至今已有近40年的发展历史。NK细胞被定义为大颗粒淋巴细胞(LGL)，是由淋巴祖细胞分化而来，并与B淋巴细胞和T淋巴细胞构成了三大类免疫细胞。NK细胞无需预先接触抗原即可杀伤靶细胞(如病毒感染的宿主细胞和肿瘤细胞)，由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制，因此称为自然杀伤活性，其在免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用。
[0003]NK细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法，其特征在于，所述一种免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法包括以下步骤：(1)培养容器包被处理：将CD16抗体包被培养容器，获取包被后的培养容器备用；(2)单个核细胞激活培养：采用免疫细胞激活培养基，将单个核细胞置于上述步骤(1)中包被后的培养容器中，进行激活培养24
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36h，得激活细胞备用，其中免疫细胞激活培养基包括无血清淋巴细胞培养基、自体血浆、IL
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2、γ干扰素和沙培林；(3)初步诱导扩增：采用初步扩增培养基对上述激活细胞进行初步扩增培养，且在培养过程中向培养基中加入EPO，其中初步扩增培养基包括无血清淋巴细胞培养基、自体血浆、IL
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10；(4)二次扩增：采用二次扩增培养基将上述初步扩增后的免疫细胞进行二次扩增，且在扩增过程中向培养基中加入IL
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2，其中二次扩增培养基包括无血清淋巴细胞培养基、自体血浆、甲状旁腺激素，二次扩增结束后得大量激活免疫细胞；(5)冷冻处理：将上述激活免疫细胞采用冻存液进行冻存，得冻存免疫细胞；(6)细胞复苏：将上述冻存免疫细胞加入温度为40
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45℃的冻存液混合搅拌溶解，溶解后对溶液进行离心，得复苏的免疫细胞。2.根据权利要求1所述的一种免疫细胞体外诱导扩增、冻存和复苏的方法，其特征在于：所述步骤(2)中免疫细胞激活培养基中自体血浆的含量为7体积％
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13体积％、IL
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2浓度为700
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1300IU/ml、γ干扰素的浓度为300
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400U/mL、沙培林浓度为0.007
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0.013KE/ml。3.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：安雯婷，郭丽娜，
申请(专利权)人：河北医科大学第二医院，
类型：发明
国别省市：