一种新型CCK8细胞活力检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种CCK8检测试剂盒及其应用，所述CCK8检测试剂盒包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5

A new CCK8 cell viability assay kit and its application

【技术实现步骤摘要】
一种新型CCK8细胞活力检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种CCK8检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]CCK8法是一种常见的检测方法，其检测原理为活细胞中的琥珀酸脱氢酶与WST
–
8进行反应生成黄色甲臜产物，它是一种高度水溶性黄色甲臜染料，黄色甲臜染料的数量与活细胞成正比，因此可以反映活细胞数量。
[0003]一般的CCK8检测试剂盒只能作用于2D细胞，可以实现快速检测，且稳定准确，但是在3D类器官上却表现出反应不完全，反应时间长等现象，且药敏结果也呈现重复性及稳定性较差的情况，因此，亟待开发一种可以用于类器官的CCK8药敏检测试剂盒，以实现类器官药敏活力的快速、稳定、准确地检测。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术旨在提供一种CCK8检测试剂盒及其应用以解决上述问题。本专利技术的技术方案为：
[0005]第一个方面，本专利技术提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5
‑
1mg/mL，EDTA0.1
‑
0.5mg/mL，盐酸0.02
‑
0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst
‑
8 0.08
‑
0.2mg/mL，1
‑
Methoxy PMS0.05
‑
0.3mg/mL，钙盐0.1
‑r/>0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。
[0006]进一步地，所述添加因子一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将透明质酸酶、EDTA和盐酸混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于
‑
20℃保存。
[0007]进一步地，所述添加因子二的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将wst
‑
8、1
‑
Methoxy PMS、钙盐和无菌水混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于
‑
20℃保存。
[0008]进一步地，所述钙盐包括氯化钙、硝酸钙、硫酸钙、磷酸钙中的至少一种。
[0009]优选地，所述钙盐为氯化钙。
[0010]第二个方面，本专利技术提供上述CCK8检测试剂盒在类器官药敏活力检测中的应用。
[0011]第三个方面，本专利技术提供一种类器官药敏活力检测方法，包括：
[0012](1)将类器官样本接种于孔板中，培养48
‑
72h后进行药物接触；
[0013](2)加药96h后在孔板中加入添加因子一继续培养20～30min；
[0014](3)继续在孔板中加入添加因子二培养2
‑
4h，于450nm进行活力检测。
[0015]本专利技术提供了一种新的CCK8检测试剂盒及药敏检测方法，与传统CCK8检测方法相比，具有以下几个优点：。
[0016]1、本专利技术在类器官药敏实验上的反应时间短，更快速。
[0017]2、本专利技术在类器官药敏实验的准确性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。
[0018]3、本专利技术在类器官药敏实验的重复性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例6的人肺癌类器官细胞活力随来那替尼药物浓度变化的曲线图。
[0020]图2为本专利技术实施例7的人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线图。
[0021]图3为本专利技术实施例8的人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线图。
[0022]图4为本专利技术实施例9的人卵巢癌类器官细胞活力随奥拉帕利药物浓度变化的曲线图。
[0023]图5为本专利技术实施例10的人胃癌类器官细胞活力随伊立替康药物浓度变化的曲线图。
[0024]图6为本专利技术对比例1的人肺癌类器官细胞活力随来那替尼药物浓度变化的曲线图。
[0025]图7为本专利技术对比例2的人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线图。
[0026]图8为本专利技术对比例3的人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线图。
[0027]图9为本专利技术对比例4的人卵巢癌类器官细胞活力随奥拉帕利药物浓度变化的曲线图。
[0028]图10为本专利技术对比例5的人胃癌类器官细胞活力随伊立替康药物浓度变化的曲线图。
[0029]图11为本专利技术对比例6的人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线图。
[0030]图12为本专利技术对比例7的人乳腺癌类器官细胞活力随阿法替尼药物浓度变化的曲线图。
[0031]图13为本专利技术对比例8的人卵巢癌类器官细胞活力随依托泊苷药物浓度变化的曲线图。
具体实施方式
[0032]本专利技术实施例采用的传统CCK8检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司，货号为C0039。
[0033]在本专利技术的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0034]下面结合附图和具体的实施例对本专利技术做进一步详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。
[0035]实施例1
[0036]本实施例提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5mg/mL，EDTA 0.1mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述
添加因子二包括以下终浓度的组分：wst
‑
8 0.08mg/mL，1
‑
Methoxy PMS 0.05mg/mL，氯化钙0.1mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将透明质酸酶、EDTA和盐酸混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于
‑
20℃保存。所述添加因子二的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将wst
‑
8、1
‑
Methoxy PMS、氯化钙和无菌水混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于
‑
20℃保存。
[0037]实施例2
[0038]本实施例提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.6mg/mL，EDTA 0.2mg/mL，盐酸0.02mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst
‑
8 0.10mg/mL，1
‑
Methoxy PMS 0.1mg/mL，氯化钙0.2mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。所述添加因子一和所述添加因子二的制备及保存方法同实施例1。
[0039]实施例3...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CCK8检测试剂盒，其特征在于：包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5
‑
1mg/mL，EDTA0.1
‑
0.5mg/mL，盐酸0.02
‑
0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst
‑
8 0.08
‑
0.2mg/mL，1
‑
Methoxy PMS0.05
‑
0.3mg/mL，钙盐0.1
‑
0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。2.根据权利要求1所述的一种CCK8检测试剂盒，其特征在于：所述添加因子一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将透明质酸酶、EDTA和盐酸混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于
‑
20℃保存。3.根据权利要求1所述的一种CCK8检...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢素瑶，朱宇，陈泽新，黄敏，
申请(专利权)人：创芯国际生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：