一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法技术

本发明专利技术提供了一种应用液质联用技术(HPLC-MS/MS)对人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法。该方法提高了提取回收率、减少了基质效应、增强了选择性，减少对分析物和内标定量分析的干扰以及改善了检测灵敏度。量分析的干扰以及改善了检测灵敏度。量分析的干扰以及改善了检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法


[0001]本专利技术属于生物分析领域，更具体地，涉及一种应用液质联用技术(HPLC-MS/MS)对人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法。

技术介绍

[0002]艾司西酞普兰作为一个新型抗抑郁药，能有效地改善患者的疗效，艾司西酞普兰花费的卫生成本低，心血管系统及肝功能方面不良反应发生率低，疗效好而不良反应少。
[0003]仿制药一致性评价中，如何确定更好更稳定的进行生物等效性评价，药物的检测分析显得非常重要。艾司西酞普兰生物样品的成分复杂、基体干扰大，同时样品较难获得而且量少，被分析物的浓度通常很低，因此对生物样品分离分析技术提出的要求越来越高，亟需建立一种高灵敏度、高选择性的艾司西酞普兰含量分析方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对上述现有技术中的不足，从样品前处理和检测技术两方面着手，提供了一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法。
[0005]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。
[0006]一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，包括如下步骤：
[0007](1)标准工作溶液的配制：称取艾司西酞普兰对照品于棕色容量瓶，加入甲醇溶液配制成浓度为50.00～500.0μg
·
mL-1
的艾司西酞普兰储备液，将所述艾司西酞普兰储备液用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成浓度为2.000～500.0ng
·
mL-1
的艾司西酞普兰标准曲线工作溶液；按上述步骤重复一次，配置成梯度浓度为2.000～400.0ng
·
mL-1
的艾司西酞普兰质控工作溶液；称取一定量的内标艾司西酞普兰-d4至玻璃瓶中，加入甲醇配制成浓度为10.00～50.00μg
·
mL-1
的内标储备液，用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成100.0ng
·
mL-1
的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0～10℃下保存，备用；
[0008]取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰标准曲线工作溶液，混匀，配置成相应梯度的标准曲线，其浓度范围为0.2000～50.00ng
·
mL-1
；取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰质控工作溶液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为0.2000～40.00ng
·
mL-1
；
[0009](2)样品处理：取等体积的标准曲线、质控样品、试验样品、空白人血浆和水，往标准曲线、质控样品、试验样品中分别加入等体积的所述内标工作溶液，往空白人血浆和水分别加入等体积的甲醇水溶液；向上述每个混合液中加入甲醇，混匀，离心，转移上清液至96孔板中，将各提取物保存；
[0010](3)标准曲线制作：将步骤(2)得到标准曲线、质控样品的提取物进行LC-MS/MS分析测定，以艾司西酞普兰和内标艾司西酞普兰-d4的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中艾司西酞普兰的浓度为横坐标制作标准曲线；
[0011](4)定量分析：将试验样品按照步骤(3)的方法处理，并按步骤(3)所得的标准曲线
方程计算，得到试验样品中艾司西酞普兰的浓度。
[0012]艾司西酞普兰的结构式如下：
[0013][0014]优选地，步骤(3)中所述LC-MS/MS分析测定过程的工作条件为：
[0015]a.色谱条件：色谱柱为Luna Omega Polar C18；流动相A：含0.1％甲酸和5mM甲酸铵的水溶液；流动相B：甲醇；柱温箱温度：40℃；流速：0.3mL/min；色谱柱平衡状态时的柱压：28.0～32.0MPa；洗脱方式为梯度洗脱；
[0016]b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：3000V；涡旋离子喷雾温度：650℃；气帘气种类：35psi；雾化气种类Gas1：45psi；辅助气Gas 2：60psi；数据收集时间：3.6min。
[0017]优选地，步骤(1)中所述艾司西酞普兰储备液的浓度为50.00～500.0μg
·
mL-1
，所述内标储备液的浓度为10.00～50.00μg
·
mL-1
，所述艾司西酞普兰工作溶液的梯度浓度分别为2.000、10.00、20.00、80.00、200.0、300.0、500.0ng
·
mL-1
，所述艾司西酞普兰质控工作溶液的浓度梯度为2.000、5.000、100.0、400.0ng
·
mL-1
，所述内标工作溶液的浓度为100ng
·
mL-1
。
[0018]优选地，步骤(1)所述质控样品的梯度浓度分别为0.2000、0.5000、10.00、40.00ng
·
mL-1
，所述质控样品于-15～-90℃储存；所述标准曲线的梯度浓度分别为0.1000、1.000、2.000、8.000、20.00、30.00、50.00ng
·
mL-1
，所述标准曲线为新鲜配制。
[0019]优选地，步骤(2)所述离心的条件为以17000
×
g的速度离心15min。
[0020]优选地，步骤(3)所述色谱条件还包括：进样体积2.00μL；自动进样器清洗溶液为甲醇；自动进样器洗针体积：200μL；压脚提升量：48mm；自动进样针清洗时浸泡时间2s；自动进样器清洗模式：进样前清洗和进样后清洗；自动进样器温度：4.0℃；自动进样器清洗时间：0s。
[0021]优选地，步骤(3)所述质谱条件还包括：入口电压10V，碰撞室出口电压8V。
[0022]优选地，步骤(3)所述LC-MS/MS分析测定过程中艾司西酞普兰的监测离子对为325.300/109.100，每次扫描一个离子对时所停留的时间90ms，去簇电压121V，碰撞能量34eV，保留时间1.15min；内标艾司西酞普兰-d4的监测离子对为329.300/113.100，每次扫描一个离子对时所停留的时间90ms，去簇电压108V，碰撞能量34eV，保留时间1.15min。
[0023]现有技术相比，本专利技术有益效果在于：(1)提高了提取回收率，基本都在95％以上。(2)减少了基质效应，绝对基质因子达到了0.97～1.05之间。(3)增强了选择性，减少对分析物和内标定量分析的干扰。(4)改善了检测灵敏度，确定了定量范围，使得预期的定量下限样品满足定量分析要求。本专利技术应用液质联用技术(HPLC-MS/MS)测定人血浆中艾司西酞普兰的浓度，准确定量人血浆中艾司西酞普兰的浓度，通过色谱柱、溶解液、流动相、质谱条件等的合理选择，流速、洗脱方式、质谱条件等工艺条件的优化，使得本专利技术艾司西酞普兰的
定量检测方法切实可行，操作简便，仪器自动化程度高，重复性高，准确性好，可操作性强，可以直接运用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)标准工作溶液的配制：称取艾司西酞普兰对照品于棕色容量瓶，加入甲醇溶液配制成浓度为50.00～500.0μg
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mL-1
的艾司西酞普兰储备液，将所述艾司西酞普兰储备液用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成浓度为2.000～500.0ng
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mL-1
的艾司西酞普兰标准曲线工作溶液；按上述步骤重复一次，配置成梯度浓度为2.000～400.0ng
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mL-1
的艾司西酞普兰质控工作溶液；称取一定量的内标艾司西酞普兰-d4至玻璃瓶中，加入甲醇配制成浓度为10.00～50.00μg
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mL-1
的内标储备液，用体积比7:3的甲醇-水溶液稀释成100.0ng
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mL-1
的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0～10℃下保存，备用；取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰标准曲线工作溶液，混匀，配置成相应梯度的标准曲线，其浓度范围为0.2000～50.00ng
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mL-1
；取空白人正常血浆，分别加入所述艾司西酞普兰质控工作溶液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为0.2000～40.00ng
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mL-1
；(2)样品处理：取等体积的标准曲线、质控样品、试验样品、空白人血浆和水，往标准曲线、质控样品、试验样品中分别加入等体积的所述内标工作溶液，往空白人血浆和水分别加入等体积的甲醇水溶液；向上述每个混合液中加入甲醇，混匀，离心，转移上清液至96孔板中，将各提取物保存；(3)标准曲线制作：将步骤(2)得到标准曲线、质控样品的提取物进行LC-MS/MS分析测定，以艾司西酞普兰和内标艾司西酞普兰-d4的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中艾司西酞普兰的浓度为横坐标制作标准曲线；(4)定量分析：将试验样品按照步骤(3)的方法处理，并按步骤(3)所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中艾司西酞普兰的浓度。2.根据权利要求1所述的一种人血浆中艾司西酞普兰的定量分析方法，其特征在于，步骤(3)中所述LC-MS/MS分析测定过程的工作条件为：a.色谱条件：色谱柱为Luna Omega Polar C18；流动相A：含0.1％甲酸和5mM甲酸铵的水溶液；流动相B：甲醇；柱温箱温度：40℃；流速：0.3mL/min；色谱柱平衡状态时的柱压：28.0～32.0MPa；洗脱方式为梯度洗脱；b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：3000V；涡旋离子喷雾温度：650℃；气帘气种类：35psi；雾...

【专利技术属性】
技术研发人员：楼金芳，曲双，乐艳，汤吕莎，沈卓凡，
申请(专利权)人：杭州百杏生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：