一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其包括如下步骤：(1)原料检测筛选；(2)收集胎盘血和冲洗水；(3)对收集的胎盘血和冲洗水进行病原微生物灭活处理；(4)经病原微生物灭活处理后的液体进行冻融处理；(5)冻融处理后物料进行酶解；(6)酶解液离心分离、过滤、除菌获得小分子多肽无菌溶液。本发明专利技术将胎盘中的血液经挤压冲洗收集用于多肽的提取，充分利用胎盘的蛋白资源，实现了胎盘利用的最大化；本发明专利技术方法可以提取小分子多肽产物，制备得到的小分子多肽具有很好的抗氧化功能。备得到的小分子多肽具有很好的抗氧化功能。备得到的小分子多肽具有很好的抗氧化功能。

【技术实现步骤摘要】
一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法

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[0001]本专利技术涉及一种多肽的提取方法，特别是涉及一种从人胎盘血中提取具有抗氧化能力的多肽的方法。

技术介绍
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[0002]胎盘多肽是二十一世纪生命科学的革新产品，它是利用现代高科技手段从胎盘中提取的人体需要、也适合人体吸收的生物产品，同时具备缓解疾病和调节人体机能、补充各种生物营养物质、预防疾病发生的多种功效。无论是在临床应用，还是在美容保健等领域，其功效和安全性都是值得认可的。
[0003]《本草纲目》称人胎盘为紫河车，提到：紫河车具有“安神养血、补气、益精、补血的作用”，“久服者，耳聪目明，须发黑，延年益寿，有夺造化之功”。紫河车作为药用已有数百年历史，且在不断延伸扩展。胎盘多肽则是从健康产妇胎盘组织液中精致萃取的小分子核酸多肽，含有多种营养素、生长因子及因子等，这些大量的活性成分帮助协调、提高自身免疫力，增强新陈代谢，促进受损细胞和创伤组织的自我修复和愈合；具有抗病毒、抗感染、抗过敏、抗突变、抗肿瘤等缓解及预防保健作用。
[0004]胎盘多肽具有广泛的生物学活性，应用于医学美容，其作用全面、效果确切。例如：因其含有大量生长因子，如表皮生长因子，可促进皮肤的新陈代谢；全面的营养素，有效解决皮肤营养不良等问题；其抗感染，抗过敏，能增加细胞功能，增强巨噬细胞活性，具有改善局部营养、生肌、促进切口愈合的作用，尤其对脂肪液化引起的切口障碍，疗效更显著；能够改善更年期症状，提高生活质量等。
[0005]常见的胎盘多肽提取都是以胎盘组织为原料，采用高温煮沸，超滤提取等技术提取，制备过程中胎盘中留存的胎盘血被冲洗掉，既会对环境造成污染，又浪费了宝贵的蛋白资源。胎盘血液主要成分为多种蛋白质，含少量脂类、葡萄糖及无机盐等。蛋白质主要是血红蛋白，其次是血清白蛋白、血清球蛋白和少量纤维蛋白。血浆蛋白经酶解后，酶解物组成中含有丰富的肽，其分子量大小不一，功能各异，已经报道的包括增强免疫力、抗高血压、抗菌、抗氧化等功能。
[0006]近几年来采用动物血液蛋白源制备生物肽的研究较为活跃，Brant报道从牛血血红蛋白中分离得到两种吗啡肽。任建东等曾报道过在鹿茸血的Alcalase水解物有抗氧化活性和ACE抑制活性作用。刘骞中等人研究了酶水解猪血浆蛋白的工艺条件，获得具有抗氧化活性的猪血浆蛋白肽，但是对人胎盘血提取多肽的研究较少。
[0007]公开号为CN103784935A的中国专利技术专利公开了一种采用超滤技术提取胎盘血中多肽的方法，用反复冻融的方法获得多肽提取液，用截留分子量为10000D的超滤膜超滤多肽提取液，提取的多肽分子量大，抗氧化能力低。

技术实现思路
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[0008]为解决以上技术问题，本专利技术的目的在于提供一种能够从人胎盘血中提取抗氧化
能力强、易吸收的小分子多肽的方法。
[0009]本专利技术的目的由如下技术方案实施：一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其包括如下步骤：(1)原料检测筛选；(2)收集胎盘血和冲洗水；(3)对收集的胎盘血和冲洗水进行病原微生物灭活处理；(4)经病原微生物灭活处理后的液体进行冻融处理；(5)冻融处理后物料进行酶解；(6)酶解液离心分离、过滤、除菌获得小分子多肽无菌溶液；其中，
[0010]所述步骤(5)冻融处理后物料进行酶解的具体操作方法为：检测冻融物料的蛋白浓度，用纯水调节最终底物蛋白浓度为5
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8％，调节冻融瓶中物料的pH值到6.0
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8.0，按照底物蛋白含量加入碱性蛋白酶为2400
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3000U/g，放入气浴恒温摇床中，温度设置成50
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55℃，酶解3
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5h，得到酶解液。
[0011]进一步，所述步骤(1)原料检测筛选：收集健康产妇足月分娩的胎盘，经乙肝、丙肝、梅毒和艾滋检测合格后作为原料。
[0012]进一步，所述步骤(2)收集胎盘血和冲洗水：将合格的胎盘放入无菌托盘中，清除胎盘表面血污；用无菌的剪刀将胎盘剪成3
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5厘米的组织块，并用2
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3升注射用水进行组织表面和内部冲洗3
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5次，挤压收集胎盘血和冲洗水后，弃除胎盘组织。
[0013]进一步，所述步骤(3)对收集的胎盘血和冲洗水进行病原微生物灭活处理：将收集的胎盘血和冲洗水装入无菌容器充分混匀后，向混匀后的液体中通15
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20mg/L臭氧10
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20分钟，进行病原微生物灭活处理；防止在以后的冻融过程中细菌大量增殖，影响产品质量。
[0014]进一步，所述步骤(4)经病原微生物灭活处理后的液体进行冻融处理：经病原微生物灭活处理后的液体进行2
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4次冻融，冷冻温度在零下40℃，融化温度控制在10
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25℃，控制每次融化时间不超过12小时，防止时间过长，造成物料的变质和活性物质的损失。通过本专利技术冻融处理，可以使得胎盘血里的细胞在冻融的过程中破裂，有助于在后期酶解步骤中产生更多的具有抗氧化能力的小分子多肽。
[0015]进一步，所述步骤(6)酶解液离心分离、过滤、除菌获得小分子多肽无菌溶液：酶解液以4000
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6000rpm离心20
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50分钟后取上清液；然后用0.45um的滤膜过滤掉上清液中的细胞碎片，再用截留分子量为3
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5KD的超滤膜过滤收集小分子多肽超滤液，最后用0.22um的滤膜过滤小分子多肽超滤液，进行除菌，得到小分子多肽无菌溶液；得到的小分子多肽无菌溶液需要在零下40℃～零下80℃冷冻保存，可避免本专利技术制备的小分子多肽的肽键水解断裂，能够稳定保存多肽液体。
[0016]进一步，将得到的小分子多肽超滤液制备成冻干粉，具体方法为：在每100ml所述小分子多肽超滤液中加入6g的冻干保护剂，用0.22um的滤膜过滤除菌，分装至1ml/支，按照冻干程序进行冻干。
[0017]进一步，所述冻干程序具体为：首先在零下50℃预冻2
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3.5h，然后在冻干压力为20
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60Pa，冻干温度为零下25℃
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零下30℃的冻干条件下冻干24
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36h，保持真空在30℃的冻干条件下10小时使产品含水量小于2％，即获得小分子多肽冻干粉。冻干粉呈疏松的多孔组织；在室温下可以长期保存。
[0018]进一步，所述冻干保护剂为4份甘露醇与2份海藻糖的组合。
[0019]本专利技术的优点：
[0020]1、本专利技术将胎盘中的血液经挤压冲洗收集用于多肽的提取，充分利用胎盘的蛋白资源，胎盘可以进行回收再利用，实现了胎盘利用的最大化，且操作方法简便易行。
[0021]2、采用本专利技术的多次冻融方法，结合碱性蛋白酶酶解胎盘血，充分水解胎盘血中的蛋白，得到大量小分子的多肽产物，然后采用3
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5KD的超滤膜过滤收集小分子多肽超滤液，获得的小分子多肽具有较强的抗氧化功本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)原料检测筛选；(2)收集胎盘血和冲洗水；(3)对收集的胎盘血和冲洗水进行病原微生物灭活处理；(4)经病原微生物灭活处理后的液体进行冻融处理；(5)冻融处理后物料进行酶解；(6)酶解液离心分离、过滤、除菌获得小分子多肽无菌溶液；其中，所述步骤(5)冻融处理后物料进行酶解的具体操作方法为：检测冻融物料的蛋白浓度，用纯水调节最终底物蛋白浓度为5
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8％，调节冻融瓶中物料的pH值到6.0
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8.0，按照底物蛋白含量加入碱性蛋白酶为2400
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3000U/g，放入恒温摇床中，温度设置成50
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55℃，酶解3
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5h，得到酶解液。2.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(1)原料检测筛选：收集健康产妇足月分娩的胎盘，经乙肝、丙肝、梅毒和艾滋检测合格后作为原料。3.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(2)收集胎盘血和冲洗水：将合格的胎盘放入无菌托盘中，清除胎盘表面血污；用无菌的剪刀将胎盘剪成3
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5厘米的组织块，并用2
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3升注射用水进行组织表面和内部冲洗3
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5次，挤压收集胎盘血和冲洗水后，弃除胎盘组织。4.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧化多肽的方法，其特征在于，所述步骤(3)对收集的胎盘血和冲洗水进行病原微生物灭活处理：将收集的胎盘血和冲洗水装入无菌容器充分混匀后，向混匀后的液体中通15
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20mg/L臭氧10
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20分钟，进行病原微生物灭活处理。5.根据权利要求1所述的一种从人胎盘血中提取抗氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋丽霞，李彬，刘伟，张潇，曹进宝，
申请(专利权)人：内蒙古元丹生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：