本发明专利技术涉及一种检测ABO血型抗原的方法、系统及其应用，属于生物检测技术领域。本发明专利技术提供了一种基于固相吸附法检测ABO血型抗原的正定型方法，此方法为将待分型红细胞分别添加至包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器中进行离心后，观察待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部的吸附情况，根据吸附情况判断待分型红细胞的ABO血型抗原；此方法避免了人工操作，易于自动化操作且稳定性高，此方法包被抗体用量少、样本红细胞经稀释后也是微量，反应结果清晰宜读，灵敏度高且特异性强，并且，此方法摆脱对价格较高的凝胶的依赖，两个微孔和微量抗体与样本红细胞就可以鉴定一个样本红细胞的血型抗原，成本低。成本低。成本低。
【技术实现步骤摘要】
一种检测ABO血型抗原的方法、系统及其应用
[0001]本专利技术涉及一种检测ABO血型抗原的方法、系统及其应用，属于生物检测领域。
技术介绍
[0002]ABO血型可以分为A型、B型、O型和AB型，是经典的人类遗传标记，在输血、亲子鉴定、人类学研究、法医物证检验等领域均占据重要地位，其中，临床输血中ABO血型分型的意义最为重要，属于临床输血前检查的必查项目。
[0003]ABO血型分型可分正定型和反定型。正定型是用抗A和抗B抗体去鉴定被检者红细胞上有没有相应的抗原，反定型是用A型红细胞和B型红细胞去鉴定被检者血清(血浆)中有无相应的抗体。根据正反定型结果，进而检测出被检者ABO系统的具体血型。
[0004]目前，通用的ABO血型分型方法有玻片法(纸片法)、试管法、微板凝集法、微柱凝胶法等方法(玻片法、试管法、微板凝集法、微柱凝胶法均记载于《全国临床检验操作规程》中)。但是，这些方法均存在缺陷，例如：
[0005]玻片法和试管法需要人工进行混匀的步骤，费时费力，还容易产生人为误差；
[0006]微板凝集法抗体和红细胞的加样量和抗体批间差异会影响结果的稳定性；
[0007]微柱凝胶法在运输过程中试剂凝胶容易变形和产生气泡，影响检测结果。
技术实现思路
[0008]为解决上述问题，本专利技术提供了一种检测ABO血型抗原的方法，所述方法包含分型步骤；所述分型步骤为：将待分型红细胞分别添加至包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器中进行离心，离心结束后，观察待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部是否被抗体吸附；
[0009]若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型；
[0010]若待分型红细胞仅在包被有抗B抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型；
[0011]若待分型红细胞仅在包被有抗A抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型；
[0012]若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述离心的转速为90～360g、时间为1～30min。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述离心的转速为190～360g、时间为1～3min。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，所述分型步骤前，还包含稀释步骤；所述稀释步骤为：将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述稀释步骤为：用Liss(低离子强度溶液)或生理盐水将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。
[0017]在本专利技术的一种实施方式中，所述稀释步骤为：用生理盐水将待分型红细胞洗涤3～5次后，用Liss或生理盐水将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器或包被有抗B抗体的容器中的添加量为10～100μL。
[0019]在本专利技术的一种实施方式中，所述包被有抗A抗体的容器的制备方法为：将抗A抗体添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；在经包被的容器中加入含有BSA(牛血清蛋白)和Tween20(吐温
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20)的缓冲液A后，于37℃封闭1～6h，得到包被有抗A抗体的容器。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，所述缓冲液A为pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液；所述BSA在缓冲液A中的体积浓度为0.1～5％；所述Tween20在缓冲液A中的体积浓度为0.02～1％。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，所述包被有抗A抗体的容器的制备方法包含如下步骤：
[0022]包被步骤：用pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液将抗A抗体倍比稀释16～2048倍，得到稀释液；将稀释液添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；
[0023]第一次洗板步骤：在经包被的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到经洗涤的容器；
[0024]封闭步骤：在经洗涤的容器中加入含有体积浓度为0.1～5％的BSA和体积浓度为0.02～1％的Tween20的pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭1～6h，得到经封闭的容器；
[0025]第二次洗板步骤：在经封闭的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到包被有抗A抗体的容器。
[0026]在本专利技术的一种实施方式中，所述包被有抗B抗体的容器的制备方法为：将抗B抗体添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；在经包被的容器中加入含有BSA和Tween20的缓冲液B后，于37℃封闭1～6h，得到包被有抗B抗体的容器。
[0027]在本专利技术的一种实施方式中，所述缓冲液B为pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液；所述BSA在缓冲液B中的体积浓度为0.1～5％；所述Tween20在缓冲液B中的体积浓度为0.02～1％。
[0028]在本专利技术的一种实施方式中，所述包被有抗B抗体的容器的制备方法包含如下步骤：
[0029]包被步骤：用pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液将抗B抗体倍比稀释16～2048倍，得到稀释液；将稀释液添加至容器后，于2～8℃包被8～16h，得到经包被的容器；
[0030]第一次洗板步骤：在经包被的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到经洗涤的容器；
[0031]封闭步骤：在经洗涤的容器中加入含有体积浓度为0.1～5％的BSA和体积浓度为0.02～1％的Tween20的pH 8.9～9.8的碳酸盐缓冲液后，于37℃封闭1～6h，得到经封闭的容器；
[0032]第二次洗板步骤：在经封闭的容器中加入pH 6.5～7.8的PBS缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到包被有抗B抗体的容器。
[0033]在本专利技术的一种实施方式中，所述容器为微孔板。
[0034]在本专利技术的一种实施方式中，所述微孔板为U型微孔板。
[0035]本专利技术还提供了利用上述方法进行检测的系统，所述系统包括分别包被有抗A抗体和抗B抗体的容器。
[0036]在本专利技术的一种实施方式中，所述容器为微孔板。
[0037]在本专利技术的一种实施方式中，所述微孔板为U型微孔板。
[0038]本专利技术还提供了上述系统的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0039]包被步骤：将抗A抗体或抗B抗体添加至容器中，于2～8℃包被8～16h，洗涤，得到经包被的容器；
[0040]封闭步骤：在经包被的容器中加入含有BSA和Tween20的缓冲液B，于37℃封闭1～6h，洗涤，得到包被有抗A抗体或抗B抗体的容器。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述方法包含分型步骤；所述分型步骤为：将待分型红细胞分别添加至包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器中进行离心，离心结束后，观察待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部是否被抗体吸附；若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均没有被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为O型；若待分型红细胞仅在包被有抗B抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为B型；若待分型红细胞仅在包被有抗A抗体的容器底部被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为A型；若待分型红细胞在包被有抗A抗体的容器和包被有抗B抗体的容器底部均被吸附，则待分型红细胞的ABO血型抗原为AB型。2.如权利要求1所述的一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述离心的转速为90～360g、时间为1～30min。3.如权利要求1或2所述的一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述分型步骤前，还包含稀释步骤；所述稀释步骤为：将待分型红细胞稀释至体积浓度为0.3～1％。4.如权利要求3所述的一种检测ABO血型抗原的方法，其特征在于，所述待分型红细胞采用Liss或生理盐水进行稀释。5.利用权利要求1～...
【专利技术属性】
技术研发人员：高明，陈玉平，陈芳芳，王布强，徐丹，门泉禄，徐孟静，
申请(专利权)人：江苏力博医药生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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