本发明专利技术公开了一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，包括：(1)制备杨梅苷、槲皮苷和山柰酚
【技术实现步骤摘要】
何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法
[0001]本专利技术涉及何首乌叶中黄酮类化合物含量的检测方法，尤其涉及何首乌叶中黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，属于何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的检测领域。
技术介绍
[0002]何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)，又名夜交藤，首乌藤，为蓼科(Polygonaceae)何首乌属(Fallopia Adans.)多年生草本植物何首乌的干燥块茎。在《本草纲目》、《中国药典》上均有收录记载，《本草纲目》曰“性甘、平；归心、肝经。具有养血安神、祛风通络的功效。用于失眠多梦、血虚身痛、风湿痹痛、皮肤瘙痒等症。”何首乌中含有多种生物活性类物质，其中最主要的包括黄酮类化合物、二苯乙烯苷类化合物、蒽醌类化合物、多酚类化合物和磷脂类及脂肪酸类等活性成分。现代药理研究表明何首乌具有镇静安神、抗慢性炎症及抗菌等作用。
[0003]随着国民生活水平的提高，当今人们对健康愈发重视。何首乌作为我国传统的补益中药，其性状评价和品质鉴定的内容和领域需有所拓宽。目前何首乌块根的化学成分及含量测定已有大量学者进行了研究，而何首乌的其余部分如何首乌叶中的化学成分及其含量，仍存在着研究不够深入、评价标准模糊、体系不够完善、分析方法难以统一等问题，造成整个行业总体缺乏标准的鉴定体系，发展步伐缓慢。黄酮类化合物作为何首乌中的重要活性物质之一，也是广受人们关注的天然自由基清除剂，具有抗氧化、抗衰老、抗三高的作用。何首乌叶中黄酮类化合物的含量测定研究，对于提高何首乌资源的整体利用率，提升何首乌的整体价值有重要意义。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC(高效液相色谱)检测方法。
[0005]本专利技术的目的通过下述技术方案来实现，
[0006]一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，包括：
[0007](1)制备杨梅苷、槲皮苷、山柰酚
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鼠李糖苷的标准品，吸取不同浓度的标准品采用高效液相色谱仪进行分析，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线，确定杨梅苷、槲皮苷、山柰酚
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鼠李糖苷的线性回归方程；
[0008](2)将待检测的何首乌叶样品溶液采用高效液相色谱仪进行分析，将样品进行梯度洗脱，测定洗脱物的优势峰的峰面积；
[0009](3)通过步骤(1)的线性回归方程计算待检测何首乌叶样品中杨梅苷、槲皮苷和山柰酚
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鼠李糖苷的含量。
[0010]具体地，步骤(1)中所确定的线性回归方程如下：
[0011]杨梅苷：Y1＝4201.6X1‑
80.608,R2＝0.9981；
[0012]槲皮苷：Y2＝15561X2‑
98.699,R2＝0.9991；
[0013]山柰酚
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鼠李糖苷：Y3＝18931X3‑
61.969,R2＝1。
[0014]具体地，步骤(2)中所述的何首乌叶样品溶液的制备包括：将何首乌叶烘干，粉碎过筛后加入甲醇水溶液进行超声提取得到待检测的样品溶液。
[0015]具体地，步骤(2)中，所述的甲醇水溶液的浓度优选为70
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95％。
[0016]具体地，步骤(2)中，所述的超声提取的条件优选为：温度为30
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50℃、超声时间为25
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60min、超声频率为30
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50kHz。
[0017]具体地，步骤(1)或(2)中采用高效液相色谱仪进行分析的色谱条件优选为：固定相是以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；流动相A为100％乙腈溶液，流动相B为超纯水；流速：0.5mL
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1.5mL/min；检测波长：200
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280nm；进样量：5
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20μL；柱温：30
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40℃。
[0018]具体地，采用梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：
[0019]时间：0～10min，流动相A：15，流动相B：85；时间：10
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13min，流动相A：25，流动相B：75；时间13
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35min，流动相A：25，流动相B：75。
[0020]本专利技术对所建立的何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法进行了方法学验证包括专属性实验、精密度实验、稳定性实验、重复性实验、加样回收实验，验证试验结果显示，本专利技术所建立的检测方法良好以及仪器精密良好，在所建立的检测条件下检测样品中主要黄酮类化合物含量具有可行性。
[0021]本专利技术所建立的何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法选择性好、灵敏度高、准确可靠，为何首乌制品的品质分析和质量控制提供了新的分析方法及依据。
附图说明
[0022]图1是杨梅苷标准曲线。
[0023]图2是槲皮苷标准曲线。
[0024]图3是山柰酚
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鼠李糖苷标准曲线。
[0025]图4是供试品溶液色谱图。
[0026]图5是对照品溶液色谱图。
[0027]图6是空白溶剂色谱图。
具体实施方式
[0028]以下结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。
[0029]实施例1何首乌叶中主要黄酮类化合物含量测定方法建立
[0030]何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，包括：
[0031](1)、制备杨梅苷、槲皮苷、山柰酚
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鼠李糖苷的标准品，吸取不同浓度的标准品采用高效液相色谱仪进行分析，高效液相色谱仪进行分析的色谱条件为：固定相是以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；流动相A为100％乙腈溶液，流动相B为超纯水；流速：0.5mL
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1.5mL/min；检测波长：200
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280nm；进样量：5
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20μL；柱温：30
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40℃。以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线，确定杨梅苷、槲皮苷、山柰酚
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鼠李糖苷的
线性回归方程；所确定的线性回归方程如下：
[0032]杨梅苷：Y1＝4201.6X1‑
80.608,R2＝0.9981；
[0033]槲皮苷：Y2＝15561X2‑
98.699,R2＝0.9991；...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)制备杨梅苷、槲皮苷和山柰酚
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鼠李糖苷的标准品，吸取不同浓度的混合标准品采用高效液相色谱仪进行分析，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标分别绘制杨梅苷、槲皮苷、山柰酚
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鼠李糖苷的标准曲线并确定杨梅苷、槲皮苷、山柰酚
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鼠李糖苷的线性回归方程；(2)将待检测的何首乌叶样品溶液采用高效液相色谱仪进行分析，将样品进行梯度洗脱，分别测定洗脱物三个优势峰的峰面积干燥；(3)对照步骤(1)的标准曲线和线性回归方程计算待检测何首乌叶样品中杨梅苷、槲皮苷和山柰酚
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鼠李糖苷的含量。2.根据权利要求1所述的何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，其特征在于，所确定的杨梅苷、槲皮苷、山柰酚
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鼠李糖苷的线性回归方程分别如下：杨梅苷：Y1＝4201.6X1‑
80.608,R2＝0.9981；槲皮苷：Y2＝15561X2‑
98.699,R2＝0.9991；山柰酚
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鼠李糖苷：Y3＝18931X3‑
61.969,R2＝1。3.根据权利要求1所述的何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述的何首乌叶样品溶液的制备包...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴磊，吴静，谢传奇，徐敢珍，熊伟，曹明源，
申请(专利权)人：江西新世嘉农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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