一种富集、鉴定待测病样中分子标志物的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用脱氧核酶探针对待测病样中分子标志物的鉴定方法，该方法利用脱氧核酶探针与分子标志物之间的相互作用，结合蛋白纯化技术和磁分离技术，对某一组分中的分子标志物进行特异性地捕获、富集，再通过互补的置换链将目标蛋白洗脱，做后续的身份鉴定。针对三阴性乳腺癌(TNBC)以及其他任何未明确标志物的疾病模型，研究人员都可运用本发明专利技术所述方法简单、快速地鉴定出标志物。因此，针对未知靶标分子的研究对象，本发明专利技术提供了一种基于“探针富集，探针检测”的简单、快速明确标志物的新方法。的新方法。的新方法。

【技术实现步骤摘要】
一种富集、鉴定待测病样中分子标志物的方法


[0001]本专利技术属于分子标志物鉴定
，具体涉及一种利用脱氧核酶探针富集、鉴定三阴性乳腺癌分子标志物的方法。

技术介绍

[0002]三阴性乳腺癌(triple
‑
negative breast cancers，简称TNBC)，是一类雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2均表达为阴性的乳腺癌，占乳腺癌总体的15％
‑
20％。TNBC具有患者年轻化、肿瘤侵袭性强、放化疗预后差、疾病早期即发生远处转移等特点，是目前最为恶性的乳腺癌。因为缺乏明确的标志物(即治疗靶点)，现有的内分泌治疗和靶向治疗对TNBC效果欠佳，且常规放化疗仅能使部分患者获益。目前，对于肿瘤(如TNBC)标志物的筛查研究，大都运用蛋白质组、基因组、转录组、表观遗传组、代谢组等多组学联用方法，并通过分子作用机制研究进一步分析和鉴定肿瘤标志物。这种方法常常会产生很多疑似的、假阳性/阴性候选靶点，短期内难以准确明确标志物身份。
[0003]脱氧核酶(deoxyribozyme)是一类有催化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用脱氧核酶探针对待测病样中分子标志物的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤，步骤a、脱氧核酶探针检测蛋白酶K和加热处理后的胞外代谢物，明确分子标志物的分子类型；步骤b、利用AKTApure系统对待筛选胞外代谢物进行浓缩纯化，并分成不同组分；步骤c、将能够识别所述分子标志物的脱氧核酶探针突变，得到突变后的脱氧核酶探针；步骤d、将所述突变后的脱氧核酶探针修饰于磁珠表面，得到磁珠探针；步骤e、将所述磁珠探针分别与不同组分共孵育，对分子标志物进行特异性捕获、富集，然后磁分离并清洗，得清洗后的孵育溶液；步骤f、在清洗后的孵育溶液中加入置换链，洗脱分子标志物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤e之前还包括对胞外代谢物各个组分中是否含有分子标志物进行评估。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述分子标志物的评估具体为，采用所述脱氧核酶探针分别与每个组分进行混合孵育，选取脱氧核酶探针切割信号最强一组或几组进行后续的特异性捕获、富集。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分子标志物为核酸、蛋白质、小分子化合物。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾宏周，胡沁沁，佟宗轩，江一舟，邵志敏，刘西禹，葛丽萍，傅彤，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：