一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用制造技术

本发明专利技术涉及刺老苞研究技术领域,更具体的说是涉及一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用。本发明专利技术提供了一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A，从药用植物刺老苞中首次分离制备出一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A，并进行了单体化合物体外抗氧化作用的研究，为今后开展刺老苞相关通过抗氧化或淬灭自由基功能治疗相关疾病(心血管疾病、关节炎、老年黄斑变性等)的治病作用提供了可靠的实验数据支撑与理论依据。

【技术实现步骤摘要】
一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用
本专利技术涉及刺老苞研究
,更具体的说是涉及一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用。
技术介绍
刺老苞AraliaechinocaulisHand.-Mazz.为五加科楤木属植物，在我国分布广泛，生于森林中，垂直分布海拔可达2600m。药材块片状或槽状，气微香，嚼之带粘液性，味辛，性平。归肝、肾经，功能滋阴健肾，祛风湿，壮筋骨，散瘀血，消肿毒，可用于风湿痹痛、跌打损伤、骨折等治疗。现阶段刺老苞的研究，多集中在药材鉴定、人工栽培与药理作用等方面，而关于其药效物质基础的研究较为薄弱。目前从刺老苞中分离鉴定的化合物有皂苷类10个、挥发油95个、有机酸类1个及甾醇类1个，此外，刺老苞还含有丰富的糖类及微量元素。刺老苞根皮中总多糖、总黄酮的含量分别为7.33％及0.92％，钙、镁、铯、镓、铜、锌等无机元素含量较高，尤其是铜、钙、铯元素的含量高过同类中草药10多倍。刺老苞根皮能通过增强细胞活力、提高超氧化物歧化酶(SOD)活性及细胞膜流动性，降低活性自由氧(ROS)及脂质过氧化物(LPO)的含量，从而改善H2O2对MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤。但就其单体化合物体外淬灭不同来源的自由基的研究较为稀少。综上所述，现有技术存在以下缺陷：缺陷一：现阶段刺老苞的研究，多集中在药材鉴定、人工栽培与药理作用等方面，而关于其药效物质基础的研究较为薄弱。目前从刺老苞中分离鉴定的化合物有皂苷类10个、挥发油95个、有机酸类1个及甾醇类1个。本专利从刺老苞中分离出一种新骨架单体化合物，即刺老苞皂苷A。缺陷二：现阶段刺老苞的上述新骨架单体化合物的体外抗氧化作用尚无报道。本专利对刺老苞皂苷A体外DPPH自由基的清除能力、·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用以及H2O2诱导DNA氧化损伤的保护作用进行了首次研究。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用，即从刺老苞中首次分离出刺老苞皂苷A，即刺老苞皂苷A体外DPPH自由基的清除能力、·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用以及H2O2诱导DNA氧化损伤的保护作用进行了首次研究。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：刺老苞根皮2.0kg以70％乙醇加热回流提取3次，每次加入7L乙醇加热2h，提取物旋转蒸发为400mL浸膏，取200mL浸膏以10％乙醇稀释为2.5L溶液过MCI-GEL大孔树脂，乙醇-水按照10％、30％、50％、70％、90％乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥为粉末，得到9份样品，分别为10％乙醇Fr.1-4、10％乙醇Fr.5-9、30％乙醇Fr.1-3、30％-50％乙醇Fr.3-4、50％乙醇Fr.1、50％乙醇Fr.2-3、70％乙醇Fr.1、70％乙醇Fr.2-4、90％乙醇Fr.1-3，通过薄层色谱检测；取50％乙醇Fr.1部位13.00g，甲醇溶解，用30g硅胶进行拌样，干法装柱，柱体积4L，以CH2Cl2∶MeOH∶H2O＝75∶20∶5、70∶22∶5、75∶25∶5、70∶26∶5、65∶25∶5、70∶43∶10的梯度洗脱，依据薄层色谱合并浓缩，得12份样品Fr.F1-12；取Fr.F4部分190mg，以乙腈∶水＝28∶72溶液溶解，过滤，经制备液相制备，流动相比例：乙腈∶水＝28∶72，得到化合物V10mg所述化合物V为刺老苞皂苷A。所述水中含0.01％甲酸。所述刺老苞皂苷A对DPPH自由基有一定的清除能力。所述刺老苞皂苷A对·OH诱导DNA氧化损伤有保护作用。所述刺老苞皂苷A对H2O2诱导DNA氧化损伤有保护作用。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术从药用植物刺老苞中首次分离制备出本种植物未报道的刺老苞皂苷A，并进行了刺老苞皂苷A体外抗氧化作用的研究，为今后开展地梢瓜相关通过抗氧化或淬灭自由基功能治疗相关疾病(心血管疾病、关节炎、老年黄斑变性等)的治病作用提供了可靠的实验数据支撑与理论依据。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。一、刺老苞皂苷A的分离鉴定方法：(1)提取：刺老苞根皮2.0kg以70％乙醇加热回流提取3次，每次加入7L乙醇加热2h，提取物旋转蒸发为400mL浸膏，取200mL浸膏以10％乙醇稀释为2.5L溶液过MCI-GEL大孔树脂，乙醇-水(10％、30％、50％、70％、90％乙醇梯度)梯度洗脱，收集各洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥为粉末。共得到9份样品，分别为10％乙醇Fr.1-4、10％乙醇Fr.5-9、30％乙醇Fr.1-3、30％-50％乙醇Fr.3-4、50％乙醇Fr.1、50％乙醇Fr.2-3、70％乙醇Fr.1、70％乙醇Fr.2-4、90％乙醇Fr.1-3，通过薄层色谱检测。取50％乙醇Fr.1部位13.00g，甲醇溶解，用30g硅胶(100～200目)进行拌样，干法装柱，柱体积4L。以CH2Cl2∶MeOH∶H2O＝75∶20∶5、70∶22∶5、75∶25∶5、70∶26∶5、65∶25∶5、70∶43∶10梯度洗脱，依据薄层色谱合并浓缩，得12份样品Fr.F1-12。Fr.F4部分(190mg)以乙腈∶水(0.01％甲酸)＝28∶72溶液溶解，过滤，经制备液相制备，流动相比例：乙腈∶水(0.01％甲酸)＝28∶72，得化合物V(10mg)。利用MCI-GEL大孔树脂、硅胶柱及色谱制备等方法，从刺老苞提取物中分离鉴定得到了一种新骨架单体化合物(化合物V)，通过对化合物的MS、13C-NMR、1H-NMR、HSQC、HMBC、1H-1HCOSY等波谱学方法鉴定化合物结构，所得化合物数据未见文献报道，鉴定为新化合物。(2)鉴定：刺老苞皂苷A(echinocaulisaponinA，化合物V)化合物V为白色粉末，硫酸乙醇显紫色。TOF-MS：m/z695.4015[M+COOH]ˉ，分子式为C36H58O10(理论值650.4030)。1HNMR(表1)显示该化合物有六个甲基信号，分别为δ0.93(3H,s)，1.13(3H,s)，1.40(3H,s)，1.67(3H,s)，2.01(3H,s)和1.26(d,3H,J＝6.2Hz)，一个烷烃质子信号δ4.89(2H,m)，糖质子信号δ3.5-6.0。13CNMR在δ157.18、106.06处显示一个烯烃碳信号，在δ107.17处显示一个糖端基碳信号。δ157.18和δ106.06是典型的末端双键信号。通过1H-1HCOZY，质子信号在δ4.97(d,J＝7.7Hz)，4.04(d,J＝8.0Hz)，4.19(dd,J＝3.5,6.8Hz)，3.97(m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A，其特征在于，所述的刺老苞皂苷A的制备方法包括以下步骤：/n刺老苞根皮2.0kg以70％乙醇加热回流提取3次，每次加入7L乙醇加热2h，提取物旋转蒸发为400mL浸膏，取200mL浸膏以10％乙醇稀释为2.5L溶液过MCI-GEL大孔树脂，乙醇-水按照10％、30％、50％、70％、90％乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥为粉末，得到9份样品，分别为10％乙醇Fr.1-4、10％乙醇Fr.5-9、30％乙醇Fr.1-3、30％-50％乙醇Fr.3-4、50％乙醇Fr.1、50％乙醇Fr.2-3、70％乙醇Fr.1、70％乙醇Fr.2-4、90％乙醇Fr.1-3，通过薄层色谱检测；/n取50％乙醇Fr.1部位13.00g，甲醇溶解，用30g硅胶进行拌样，干法装柱，柱体积4L，以CH

【技术特征摘要】
1.一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A，其特征在于，所述的刺老苞皂苷A的制备方法包括以下步骤：
刺老苞根皮2.0kg以70％乙醇加热回流提取3次，每次加入7L乙醇加热2h，提取物旋转蒸发为400mL浸膏，取200mL浸膏以10％乙醇稀释为2.5L溶液过MCI-GEL大孔树脂，乙醇-水按照10％、30％、50％、70％、90％乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥为粉末，得到9份样品，分别为10％乙醇Fr.1-4、10％乙醇Fr.5-9、30％乙醇Fr.1-3、30％-50％乙醇Fr.3-4、50％乙醇Fr.1、50％乙醇Fr.2-3、70％乙醇Fr.1、70％乙醇Fr.2-4、90％乙醇Fr.1-3，通过薄层色谱检测；
取50％乙醇Fr.1部位13.00g，甲醇溶解，用30g硅胶进行拌样，干法装柱，柱体积4L，以CH2Cl2∶MeOH∶H2O＝75∶20∶5、70∶22∶5、75∶25∶5、70∶26∶5、65∶25∶5、70∶43∶10的梯度洗脱，依据薄层色谱合并浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴凌鹏，孙九许，燕梦云，周文斌，
申请(专利权)人：中央民族大学，
类型：发明
国别省市：北京;11