一种经修饰的免疫效应细胞及其制备方法技术

本申请涉及一种经修饰的免疫效应细胞，其中与未经所述修饰的相应细胞中相应基因的表达和/或活性相比，TRAC基因和HLA‑A基因的表达和/或活性被下调，B2M基因的表达和/或活性未被下调，且CIITA基因的表达和/或活性未被下调。本申请还涉及制备所述的经修饰的免疫效应细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种经修饰的免疫效应细胞及其制备方法
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种经修饰的免疫效应细胞及其制备方法。
技术介绍
抗肿瘤免疫疗法在多种恶性肿瘤中能够引起持久和强烈的反应，可以用于治疗许多不同类型的癌症，显示出广泛的潜力。当前抗肿瘤免疫疗法主要包括两种类型的免疫疗法：免疫细胞靶向单克隆抗体(mAb)疗法和过继性细胞疗法(ACT)。其中，ACT是指依赖在体外刺激和扩增的自体或者异体淋巴细胞回输到人体中，以达到抗肿瘤的效果，但是该疗法仅在MHC多态一致的患者中疗效相对好。CAR-T是新型有效的不依赖MHC的过继性细胞疗法，CAR又称嵌合抗原受体，是模拟TCR功能的人工受体，它能够特异性的识别肿瘤细胞表面的抗原，从而靶向杀死肿瘤细胞。但是及时并成功制造和输注自体CART细胞是实施有效CART细胞疗法的最大障碍，例如病人之前采用化疗方案治疗，化疗药物会引起病人T细胞在体外扩增困难或功能降低，导致不能产生足够数量的CAR-T细胞产品，或质量较差。另外目前自体CAR-T多用于ALL或CLL患者，在实体瘤患者中的应用面临很大的挑战，例如肿瘤抗原的异质性限制了自体CAR-T的应用。为了增加CAR的灵活性和扩大抗原识别的范围，通用型CAR-T应运而生。通用型CART细胞的主要设计原则是从同种异体健康供体产生肿瘤抗原特异性T细胞，通过该方式获得的CART细胞扩增效率和活力增强，然而异体T细胞的内源性TCR可识别受体的同种异体抗原，会导致移植物抗宿主病(GVHD)，同时HLA在异体T细胞表面的表达会导致宿主免疫系统的快速排斥(HVGR)。因此，同种异体细胞治疗引起免疫排斥反应的问题尚需进一步解决。
技术实现思路
本申请提供了一种经修饰的免疫效应细胞，其中与未经所述修饰的相应细胞中相应基因的表达和/或活性相比，TRAC基因和HLA-A基因的表达和/或活性被下调，B2M基因的表达和/或活性未被下调，且CIITA基因的表达和/或活性未被下调。在某些实施方式中，所述修饰使得两种基因的表达和/或活性被下调，其中所述两种基因由TRAC基因和HLA-A基因组成。在某些实施方式中，与相应的野生型细胞相比，TRAC基因和HLA-A基因的表达和/或活性被下调，B2M基因的表达和/或活性未被下调，且CIITA基因的表达和/或活性未被下调。在某些实施方式中，与相应的野生型细胞相比，两种基因的表达和/或活性被下调，其中所述两种基因由TRAC基因和HLA-A基因组成。在某些实施方式中，所述免疫效应细胞包括T细胞。在某些实施方式中，所述基因的表达水平和/或活性被下调包括使编码所述基因的核酸分子的表达和/或活性下调；和/或使所述基因编码的蛋白质产物的表达和/或活性被下调。在某些实施方式中，所述修饰包括：基因突变和/或基因沉默。在某些实施方式中，所述修饰包括向所述免疫效应细胞施用一种或多种选自下组的物质：反义RNA、siRNA、shRNA和CRISPR/Cas9系统。在某些实施方式中，所述修饰包括向所述免疫效应细胞施用CRISPR/Cas9系统。在某些实施方式中，所述HLA-A基因的等位基因选自以下组：A*02，A*11，A*24，A*30，A*33，A*03，A*01和A*26。在某些实施方式中，所述HLA-A基因中的至多2个等位基因的表达水平和/或活性下调。在某些实施方式中，所述HLA-A基因中的1个等位基因的表达水平和/或活性下调。在某些实施方式中，所述修饰包括向所述免疫效应细胞施用靶向所述HLA-A基因外显子部分的sgRNA。在某些实施方式中，所述靶向所述HLA-A基因外显子部分的sgRNA包含SEQIDNo.16-54、91-92中任一项所示的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述修饰还包括向所述免疫效应细胞施用靶向所述TRAC基因外显子部分的sgRNA。在某些实施方式中，所述靶向所述TRAC基因外显子部分的sgRNA包含SEQIDNo.1-15中任一项所示的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述反义RNA包含SEQIDNo.93-96中任一项所示的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述修饰还包括向所述细胞施用Cas蛋白。在某些实施方式中，Cas蛋白包括Cas9蛋白。在某些实施方式中，所述免疫效应细胞包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，所述CAR包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域、共刺激结构和初级信号传导结构域。在某些实施方式中，所述抗原结合结构域特异性地结合肿瘤抗原。在某些实施方式中，所述肿瘤抗原选自以下组：CD19、CD133、CD123、CD22、CD30、CD171、CA125、C-met、L1CAM、EC、DLL3、CD99、CS1、5T4、CD138、CS-1(也称作CD2亚类1、CRACC、SLAMF7、CD319或19A24)、C型凝集素样分子-1(CLL-1或CLECL1)、CD33、表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)、神经节苷脂G2(GD2)、神经节苷脂GD3、TNF受体家族成员B细胞成熟抗原(BCMA)、Tn抗原(例如TnAg、GalNAcα-Ser/Thr)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)；受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)；肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、CD38、CD44v6、癌胚抗原(CEA)、上皮细胞黏附分子(EPCAM)、B7H3(CD276)、KIT(CD117)、白介素-13受体亚基α-2(IL-13Ra2或CD213A2)、间皮素、白介素11受体α(IL-11Ra)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、蛋白酶丝氨酸21、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Lewis(Y)抗原、CD24、血小板衍生生长因子受体β(PDGFR-β)、阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4)、CD20、叶酸受体α、受体酪氨酸-蛋白激酶ERBB2(Her2/neu)、细胞表面相关黏蛋白1(MUC1)、表皮生长因子受体(EGFR)、神经细胞黏附分子(NCAM)、Prostase、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、突变的延伸因子2(ELF2M)、肝配蛋白B2、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、胰岛素样生长因子1受体(IGF-I受体)、碳酸酐酶IX(CAIX)、蛋白酶体(例如蛋白酶体、巨蛋白因子)亚基Β型9(LMP2)、糖蛋白100(gp100)、由断点簇集区(BCR)和Abelson鼠白血病病毒癌基因同源物1(Abl)组成的癌基因融合蛋白(bcr-abl)、酪氨酸酶、肝配蛋白A型受体2(EphA2)、岩藻糖基GM1；唾液酰Lewis黏附分子(sLe)、转谷氨酰胺酶5(TGS5)、高分子量-黑素瘤相关抗原(HMWMAA)、o-乙酰基-GD2神经节苷脂(OAcGD2)、叶酸受体β、肿瘤内皮标志物1(TEM1/CD248)、肿瘤内皮标志物7相关(TEM7R)、紧密连接蛋白6(CLDN6)、促甲状腺激素受体(TSHR)、G蛋白偶联受体C类第5群成员D(GPRC5D)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.经修饰的免疫效应细胞，其中与未经所述修饰的相应细胞中相应基因的表达和/或活性相比，TRAC基因和HLA-A基因的表达和/或活性被下调，B2M基因的表达和/或活性未被下调，且CIITA基因的表达和/或活性未被下调。/n

【技术特征摘要】
20200102 CN 20201000292931.经修饰的免疫效应细胞，其中与未经所述修饰的相应细胞中相应基因的表达和/或活性相比，TRAC基因和HLA-A基因的表达和/或活性被下调，B2M基因的表达和/或活性未被下调，且CIITA基因的表达和/或活性未被下调。


2.根据权利要求1所述的免疫效应细胞，其中所述修饰使得两种基因的表达和/或活性被下调，其中所述两种基因由TRAC基因和HLA-A基因组成。


3.根据权利要求1所述的免疫效应细胞，其中与相应的野生型细胞相比，TRAC基因和HLA-A基因的表达和/或活性被下调，B2M基因的表达和/或活性未被下调，且CIITA基因的表达和/或活性未被下调。


4.根据权利要求3所述的免疫效应细胞，其中与相应的野生型细胞相比，两种基因的表达和/或活性被下调，其中所述两种基因由TRAC基因和HLA-A基因组成。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述免疫效应细胞包括T细胞。


6.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述修饰包括向所述免疫效应...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚小云，蒋海娟，王丹，沈慧，马丽，辛雨，徐凡丽，李甲璐，马少文，赵丹，
申请(专利权)人：江苏茂行科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32