一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法技术

本发明专利技术生物酶合成技术领域，特别是涉及一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L‑苹果酸的方法。本发明专利技术要解决的技术问题是富马酸酶提取的产率低、成本高。本发明专利技术的技术方案是一种利用重组大肠杆菌合成L‑苹果酸的方法，具体如下：构建表达富马酸酶基因的大肠杆菌工程菌，液体培养工程菌，加入反应底物富马酸钠，全细胞催化直至反应完全，收集反应液。本申请利用分子生物学技术，通过重组大肠杆菌全细胞，以富马酸钠为转化底物生产L‑苹果酸。本发明专利技术方法中L‑苹果酸的产率可达到95％。本发明专利技术为提高苹果酸产量的研究提供方向，同时也为其他有机酸的研究奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法
本专利技术生物酶合成
，特别是涉及一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法。
技术介绍
苹果酸别名2-羟基丁二酸，是一种十分常见却又十分重要的天然有机酸，其电离常数K1为4.0×10-4、K2为9×10-6，是生物体内三羧酸循环成员之一。分子内含有一个不对称碳原子，有两个对映体，即L-苹果酸和D-苹果酸，分别呈左旋和右旋。在许多领域都有着广泛的用途，生产苹果酸的方法有许多，诸如化学合成法、生物合成法、直接发酵法(又称一步发酵法)、两步发酵法、酶转化法、直接抽提法等。其中的化学合成法因为合成的是消旋苹果酸，其产物很难实现良好的分离效果，在日后的研究中已经被淘汰不用。生物合成法主要采用联L-苹果酸和乳酸及固定化细胞联产L-苹果酸生产工艺。再有一步发酵法生产L-苹果酸由于需要消耗比较大的能源物质，也很少有人继续采用此方法。之后又有部分国内外人士提出使用固定化细胞和固定化酶法生产L-苹果酸，并在之后形成了一定规模的工业化生产，但是人们仍然发现这种方法的产量过低，并且成本偏高。现如今，随本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在于，具体如下：构建表达富马酸酶基因的大肠杆菌工程菌，液体培养工程菌，离心收集湿菌体细胞，加入反应底物富马酸钠，待反应完全，收集反应液。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在于，具体如下：构建表达富马酸酶基因的大肠杆菌工程菌，液体培养工程菌，离心收集湿菌体细胞，加入反应底物富马酸钠，待反应完全，收集反应液。


2.如权利要求1所述利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在于，所述反应温度为30～40℃；优选的，所述反应温度为35℃。


3.如权利要求1或2所述利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在于，所述反应pH为7～8；优选的，所述反应pH为7。


4.如权利要求1或2所述利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在于，所述反应时间为8～12h；优选的，所述反应时间为10h。


5.如权利要求1或2所述利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在于，所述反应体系中，每10mL转化合成体系中添加0.5～2g富马酸钠和0.05～2g湿菌体细胞；优选的，所述反应体系中，每10mL转化合成体系中添加1g富马酸钠和0.1g湿菌体细胞。


6.如权利要求1或2所述利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹龙飞，付永前，罗希，郑伟龙，孙小龙，
申请(专利权)人：台州学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33