本发明专利技术公开一种基因TSA在检测鸡枞源性成分中的应用，建立一套定性定量PCR检测鸡枞的方法，以及对鸡枞的深加工产品进行检测验证，经过分析，发现TSA基因的BLAST比对结果图中显示，没有任何其它基因的全部序列与TSA基因的序列相同或相似，这说明TSA基因与其它基因没有同源性，具有极强的物种特异性，因此，挑选TSA基因作为鸡枞的候选内标准基因，可快速、灵敏地检测食品中的鸡枞源性成分，且本方法灵敏度高，特异性强，操作简单、成本低廉，反应结果易于观察，非常适用于现场实时检测，对鸡枞及其深加工产品进行快速生物源检测具有良好的发展前景。发展前景。发展前景。
【技术实现步骤摘要】
基因TSA在检测鸡枞源性成分中的应用
[0001]本专利技术涉及生物物种鉴定和PCR检测
，具体涉及一种基因TSA在检测鸡枞源性成分中的应用。
技术介绍
[0002]鸡枞（Collybiaalbuminosa）因味似鸡肉，又名鸡肉丝菌。主要分布在亚、非的热带、南太平洋岛屿和亚洲的亚热带区域，我国鸡枞则主产于云南、贵州、四川、台湾、西藏等地。鸡枞含有丰富的氨基酸、核黄素以及K、Fe、Cu、Mg、Zn、Ca等多种矿物质元素，蛋白质和总糖含量分别达到了32.82%、36.79%，是一种味道鲜美、营养价值极高的食用菌。但由于其与白蚁复杂的共生关系，使得鸡枞的生长环境极为苛刻，尚未有人工大量生产的报道，这也导致其价格居高不下。
[0003]目前鸡枞产品种类丰富，尤其随着深加工产品的开发，各种产品层出不穷，随之而来各种掺伪造假现象逐年增多。由于产品的深加工使得依赖传统的形态学检验无法应用，随着分子生物学技术的快速发展，分子方法快速、准确、特异性强的优点在鸡枞及其深加工产品检验具有良好的应用前景。
[0004]内标准基因作为一种表达稳定、物种特异性强的基因，在食品掺假的检测中得到了广泛应用。目前，对于内标准基因的开发与研究主要集中在农作物上，比如小麦、油菜、大豆、棉花、玉米、水稻等，其内标准基因已被广泛应用于成分来源的鉴别和分析中。而鸡枞的内标准基因尚未见到相关报道，为了建立一种能够快速、准确鉴定鸡枞的方法，有必要对鸡枞的内标准基因进行开发。
技术实现思路
[0005]本专利技术目的是提供一种基因TSA在检测鸡枞源性成分中的应用，以基因TSA作为内标基因，鉴定食品成分中是否含有鸡枞的应用，基因TSA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0006]本专利技术还提供一种用于检测鸡枞源性成分的试剂盒，以基因TSA为靶基因建立的试剂盒，包括扩增基因TSA的特异性引物，采用PCR方法检测内标基因TSA，特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，试剂盒还包括扩增用常规试剂。
[0007]本专利技术确定的用于检测鸡枞源性成分的基因TSA，设计了用于检测该基因的定性PCR和定量PCR的引物并用于试剂盒，建立了检测鸡枞源性成分的相应PCR方法，该方法费时少，特异性好，灵敏度高，操作简单，不需要专业人员操作，结果易于观察，非常适于鸡枞食品的检验分析。
附图说明
[0008]图1为TSA基因在Nucleotide数据库中的BLAST分析结果；图2为鸡枞TSA基因的定性PCR验证特异性，A图中泳道1
‑
23分别为，1：空白对照，2
‑
3：黄牛肝菌（Boletusauripes Pk.），4
‑
5：北风菌（Pleurotuscitrinipileatus），6
‑
7：黑牛
肝（Boletus griseus Frost），8
‑
9：奶浆菌（Lactariusvolemus），10
‑
11：青头菌（Russulavirescens），12
‑
13：干巴菌（Thelephoraganbajun），14
‑
15：鸡油菌（Cantharelluscibarius），16
‑
17：松茸（Tricholomamatsutake），18
‑
19：红见手青（BoletussinicusW.F.Chiu），20
‑
21：白牛肝（Boletus bainiuganDentinger），22
‑
23：大红菇菌（Russulavinosa），M：DNA marker DL 2000; B图泳道1
‑
17分别为：1：空白对照，2
‑
3：黄赖头（Leccinumextremiorientale (L.Vass.) Singer），4
‑
5：鸡枞（Collybiaalbuminosa），6
‑
7：老人头（Catathelasmaventricosum（Peck）Singer），8
‑
9：珊瑚菌（Ramariaflava），10
‑
11：香菇（Lentinusedodes），12
‑
13：茶树菇（Agrocybeaegirit），14
‑
15：杏鲍菇（Pleurotuseryngii），16
‑
17：口蘑（Tricholomamongolicum），M：DNA marker DL 2000；图3为鸡枞TSA基因引物检测灵敏度的定性检测，图中泳道1
‑
15分别为，1：阴性对照，2
‑
3：128ng/μL，4
‑
5：12.8ng/μL，6
‑
7：1.28 ng/μL，8
‑
9：0.128 ng/μL，10
‑
11：0.0128 ng/μL，M：DNA marker DL 2000；图4为鸡枞TSA基因引物检测灵敏度的定量检测的扩增曲线；图5为鸡枞TSA基因引物检测灵敏度的定量检测的标准曲线；图6为引物TSA
‑
F/B对深加工样品的PCR检测，图中泳道1
‑
4分别为，1：阴性对照，2：野生鸡枞样品，3
‑
4：鸡枞油豆豉，5
‑
6：香菇酱 M：DNA marker DL 2000。
具体实施方式
[0009]下面结合具体实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制，在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0010]黄牛肝，北风菌，黑牛肝，奶浆菌，青头菌，干巴菌，鸡油菌，松茸，红见手，白牛肝，大红菇，黄赖头，鸡枞，老人头，珊瑚菌，香菇，茶树菇，杏鲍菇，口蘑购买于云南当地野生菌市场。
[0011]实施例1：鸡枞源通用内标基因TSA的筛选在NCBI的Nucleotide数据库中，搜索鸡枞的基因信息，通过BLAST比对分析，最终筛选出用于编码糖苷酶的TSA基因 (登录号：JO124034.1) 作为内标准基因，TSA基因的BLAST结果和详细信息见图1，TSA基因的BLAST比对结果图中显示，没有任何其它基因的全部序列与TSA基因的序列相同或相似，这说明TSA基因与其它基因没有同源性，具有极强的物种特异性。
[0012]实施例2 ：鸡枞源性成分通用内标基因的验证1、针对实施例1筛选的内部基因TSA，利用Primer Premier 5.0软件设计引物，并对设计好的引物进行BLAST对比分析，保证引物的特异性，引物序列见表1；扩增的序列为SEQ ID NO:1的第213位碱基～第546位碱基；表1 TSA基因本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基因TSA在检测鸡枞源性成分中的应用，所述基因TSA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种用于检测鸡枞源性成分的试剂盒，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：商颖，曹建新，易伦朝，刘耀，李玲，魏元苗，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。