一种过氧亚硝基阴离子和粘度双响应型荧光探针及其制备和应用制造技术

本申请公开一种过氧亚硝基阴离子和粘度双响应型荧光探针及其制备和应用，双响应型荧光探针结构式如式I所示：本申请提供的双响应型荧光探针的制备方法简单，只需要简短的反应路线即可得到。本申请的探针自身的荧光微弱可在不同激发/发射通道下分别检测溶液和细胞环境中的ONOO

【技术实现步骤摘要】
一种过氧亚硝基阴离子和粘度双响应型荧光探针及其制备和应用


[0001]本申请涉及荧光探针检测
，具体涉及一种过氧亚硝基阴离子和粘度双响应型荧光探针及其制备和应用。

技术介绍

[0002]新型高效的荧光探针检测技术有助于人们更加深入了解诸多生理和病理的发生机制，已被广泛应用于生命健康领域。然而，目前已开发的荧光探针大多是单响应型荧光探针，即只能在单一荧光通道下实现特异性识别单一分析物，无法满足研究多种分析物在生物体内的生物关联性的需求。因此，常规的单响应型荧光探针具有一定的局限性。双响应型荧光探针，不同于单响应型荧光探针，可在不同荧光通道下可分别检测两个不同的分析物，是研究多分析物在生物体内的生物关联性的有力工具之一。

技术实现思路

[0003]本申请提供一种荧光探针，可在不同荧光通道下分别检测ONOO
‑
和粘度，解决单响应型荧光探针的缺陷。
[0004]过氧亚硝基阴离子ONOO
‑
由于其高化学反应能力，是活性氧簇中的最有害的小分子。众多研究表明，ONOO
‑
可以破坏各类生物大分子，如蛋白质、脂类和核酸等。细胞内环境粘度是细胞正常活动的重要指标，对细胞内生物分子间的扩散、化学信号的传递起着至关重要的作用。为了进一步了解ONOO
‑
和粘度的生物学作用，大量能够特异性检测ONOO
‑
或粘度的单响应型荧光探针被报道，然而，能够分别检测ONOO
‑
和粘度的双响应型荧光探针仍十分稀缺。
>[0005]本申请提供的双响应型荧光探针的制备方法简单，只需要简短的反应路线即可得到。本申请的探针自身的荧光微弱可在不同激发/发射通道下分别检测缓冲液和细胞环境中的ONOO
‑
和粘度，属于荧光探针检测
从实验数据可知，该探针在发射波长为570nm处对粘度具有响应能力，在发射波长为640nm处对ONOO
‑
具有响应能力。该探针检测效果良好，抗干扰能力强，可为研究ONOO
‑
和粘度的生物关联性提供了一种新型的潜在有力分析工具。
[0006]一种双响应型荧光探针，具有如式(I)所示的结构式：
[0007][0008]本申请还提供一种所述荧光探针的制备方法，包括：
[0009]惰性气体保护下，将化合物2、化合物3和甲醇钠加入到溶剂中反应，反应液通过分
离纯化后得所述荧光探针；
[0010][0011]可选的，所述化合物2、化合物3和甲醇钠的物质的量之比为1:1.2～2:0.2～0.5；进一步为1:1.5:0.3。
[0012]化合物2为公开的化合物，其制备方法可参考文献(Wu Y Y,Yu W T,Hou T C,et al.A selective and sensitive fluorescent albumin probe for the determination of urinary albumin[J].Chemical Communications,2014,50(78):11507
‑
11480.)，化合物3为市购获得。
[0013]可选的，所述溶剂为乙腈。
[0014]可选的，反应条件为：40℃～50℃搅拌反应10h～14h。
[0015]可选的，所述分离纯化方法如下：将所得的反应液通过减压浓缩除去溶剂，粗产物以乙酸乙酯/石油醚(v/v，1:5)混合液为展开剂，利用柱层析法进行纯化，得到目标双响应型荧光探针。
[0016]本申请还提供一种如所述的双响应型荧光探针在制备检测ONOO
‑
和/或粘度试剂中的应用。
[0017]可选的，所述ONOO
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为细胞中ONOO
‑
或溶液中ONOO
‑
；所述粘度为细胞中粘度或溶液中粘度。
[0018]可选的，所述细胞为人宫颈癌细胞Hela细胞。
[0019]应用于溶液ONOO
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检测时，可对溶液中ONOO
‑
浓度进行定量检测，检测方法包括：
[0020]将所述荧光探针加入待测溶液中，反应一段时间后，在激发波长为490nm、发射波长为640nm处采集缓冲液的荧光强度，根据标准曲线计算得到待测溶液的ONOO
‑
浓度。
[0021]可选的，荧光探针在待测溶液中的加入量以荧光探针的摩尔量与溶液中ONOO
‑
浓度比计为：0.005mM荧光探针：0～0.1mM ONOO
‑
。
[0022]可选的，标准曲线的制备如下：
[0023]将0.005mM荧光探针分别与ONOO
‑
浓度为0～0.1mM的缓冲液中反应，激发波长为490nm、发射波长为640nm处采集缓冲液的荧光强度，以荧光强度为纵坐标、ONOO
‑
浓度为横坐标，绘制即得线性标准曲线。
[0024]可选的，检测溶液ONOO
‑
时，溶液的pH值为7.4。
[0025]本申请的荧光探针，还具有粘度响应特性，可用于制备粘度检测试剂中，应用于检测溶液粘度值时，可定量检测溶液的粘度值，方法包括：
[0026]将所述荧光探针加入待测溶液中，经混匀、超声、静置后，在激发波长为410nm，发射波长为570nm处采集溶液的荧光强度，根据标准曲线计算得到待测溶液的粘度值。
[0027]可选的，双响应型荧光探针在待测溶液中的加入量以荧光探针的摩尔量与溶液中粘度比计为：0.005mM荧光探针：粘度100～950CP。
[0028]可选的，标准曲线的制备如下：
[0029]将0.005mM荧光探针分别与粘度在100～950CP内的溶液反应，激发波长为410nm、发射波长为570nm下采集反应液的荧光强度，以ln(荧光强度)为纵坐标、log(溶液粘度)为横坐标，绘制即得线性标准曲线。
[0030]可选的，检测粘度时，溶液的pH值为7.4。
[0031]本申请的荧光探针还可用于非诊断目的的细胞中ONOO
‑
浓度变化及粘度变化检测。在激发波长为488nm、发射接收波长范围为620～720nm可检测ONOO
‑
浓度变化；在激发波长为405nm、发射接收波长范围为520～620nm可检测粘度值变化。
[0032]本申请的荧光探针的双响应荧光检测机理如下：
[0033]ONOO
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可与硼酯发生特异性反应，释放出羟基裸露的近红外荧光团；溶液粘度的增加限制结构碳碳单键的旋转，减少探针的非辐射能量，释放出发射波长为荧光。
[0034]与现有技术相比，本申请至少具有如下有益效果之一：
[0035](1)本申请提供的双响应型荧光探针的结构新颖，合成简单，并适合大量生产。
[0036](2)本申请提供的双响应型荧光探针能在不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双响应型荧光探针，其特征在于，具有如式(I)所示的结构式：2.如权利要求1所述的双响应型荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：惰性气体保护下，将化合物2、化合物3和甲醇钠加入到溶剂中反应，反应液通过分离纯化后得所述双响应型荧光探针；3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物2、化合物3和甲醇钠的物质的量之比为1:1.2～2:0.2～0.5。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂为乙腈。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，反应条件为：40℃～50℃搅拌反应10h～14h。6.如权利要求1所述的双响应型荧光探针在制备检测ONOO
‑
和/或粘度试剂中的应用。7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ONOO
‑
为细胞中ONOO
‑
或溶液中ONOO
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；所述粘度为细胞中粘度或溶液中粘度。8.根据权利要求7所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：周戚，姜春筱，谢振达，
申请(专利权)人：台州学院，
类型：发明
国别省市：