一种在兽疫链球菌发酵过程中原位诱导纳米纤维素凝胶化的方法技术

本发明专利技术公开了一种在兽疫链球菌发酵过程中原位诱导纳米纤维素凝胶化的方法，在兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)发酵过程中加入纳米纤维素。通过上述方法，加入纳米纤维素既可形成凝胶，同时，对透明质酸的产量也有很大的提高，具有产品得率高，条件温和、可操作性强、经济环保等特点。经济环保等特点。经济环保等特点。

【技术实现步骤摘要】
39920。
[0010]其中，将兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)的种子液以1％
‑
10％的体积比接入发酵培养基中。
[0011]优选地，将兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)的种子液以5％的体积比接入发酵培养基中。
[0012]其中，所述发酵的发酵培养基中各组分的含量为：葡萄糖5
‑
20g/L、蛋白胨5
‑
20g/L、牛肉粉1
‑
10g/L、酵母粉1
‑
10g/L、NaH2PO
4 1
‑
5g/L、NaCl 1
‑
5g/L、MgSO4·
7H2O 0.1
‑
2g/L。
[0013]优选地，所述发酵的发酵培养基中各组分的含量为：葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、牛肉粉5g/L、酵母粉5g/L、NaH2PO
4 2g/L、NaCl 2g/L、MgSO4·
7H2O 1g/L
[0014]其中，整个发酵过程中，不论在加入纳米纤维素前后，所述发酵的温度均为30
‑
40℃。
[0015]其中，在加入纳米纤维素前，所述发酵的转速为120
‑
300rpm。
[0016]优选地，在加入纳米纤维素前，所述发酵的转速为150rpm。
[0017]其中，在发酵中后期加入纳米纤维素。
[0018]优选地，在发酵10
‑/>30h后加入纳米纤维素。
[0019]进一步优选地，在发酵24h后加入纳米纤维素。
[0020]其中，所述纳米纤维素以纳米纤维素分散液的形式加入。
[0021]其中，所述纳米纤维素分散液的溶剂为蒸馏水。
[0022]其中，所述纳米纤维素分散液中纳米纤维素的质量含量为0.1％
‑
2％。
[0023]优选地，所述纳米纤维素分散液中纳米纤维素的质量含量为0.5％
‑
2％。
[0024]其中，控制纳米纤维素的添加量，使体系中纳米纤维素的最终质量含量为0.1％
‑
1％。
[0025]优选地，控制纳米纤维素的添加量，使体系中纳米纤维素的最终质量含量为0.5％。
[0026]其中，加入纳米纤维素后，所述发酵的转速为80
‑
119rpm。
[0027]优选地，加入纳米纤维素后，所述发酵的转速为110rpm。
[0028]其中，加入纳米纤维素后，继续发酵2
‑
20h。
[0029]优选地，加入纳米纤维素后，继续发酵10h。
[0030]有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下优势：
[0031]本专利技术所提供的一种由微生物原位诱导纳米纤维素凝胶化的方法，加入纳米纤维素既可形成凝胶，同时，对透明质酸的产量也有很大的提高，具有产品得率高，条件温和、可操作性强、经济环保等特点。
附图说明
[0032]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术做更进一步的具体说明，本专利技术的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
[0033]图1为添加0.5％纳米纤维素(a)和2％纳米纤维素(b)由兽疫链球菌诱导凝胶化后的SEM图片。
[0034]图2为添加纳米纤维素不同添加量所得HA的产量。
具体实施方式
[0035]根据以下实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。
[0036]下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0037]下述实施例中所用的兽疫链球菌为ATCC 39920。
[0038]下述实施例中所用的培养基的配制：葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、牛肉粉5g/L、酵母粉5g/L、NaH2PO
4 2g/L、NaCl 2g/L、MgSO4·
7H2O 1g/L。预先用氢氧化钠调节pH值至7.0后灭菌。
[0039]下述实施例中，所述纳米纤维的粒径为200
‑
500nm。
[0040]下述实施例中，所述“％”均指质量百分含量。
[0041]下述实施例中，所述纳米纤维素分散液的溶剂为蒸馏水。
[0042]实施例1：用兽疫链球菌发酵原位诱导纳米纤维素凝胶化，包括以下步骤：
[0043](1)将
‑
80℃冰箱保存的甘油菌兽疫链球菌ATCC 39920接种至固体培养基上进行培养，得到兽疫链球菌ATCC 39920的种子液；
[0044](2)将得到的种子液接入装有100mL的种子培养基的摇瓶中，接种量为5％v/v。在摇床上进行培养，培养条件为：转速150rpm，初始pH为7.0，发酵温度为36℃，培养时间24小时；
[0045](3)将浓度为0.5％的纳米纤维素分散液直接倒入步骤(2)的摇瓶中，使该体系中纳米纤维素的终浓度为0.2％，降低转速为100rpm，继续培养10h，最终可以得到淡黄色的凝胶状物质，在同时最终HA的产量为3.26g/L。
[0046]实施例2：
[0047]同实施例1的方法，摇瓶发酵方法依旧，所不同的是，步骤(3)将浓度为2％的纳米纤维素分散液直接倒入步骤(2)的摇瓶中，使该体系中纳米纤维素的终浓度为0.5％，降低转速为100rpm，继续培养10h，最终可以得到近似无色的透明凝胶，与此同时最终HA的产量为4.96g/L。
[0048]实施例3
[0049]对实施例1、2中的凝胶进行表征。图1为添加0.5％纳米纤维素(初浓度)和2％纳米纤维素(初浓度)由兽疫链球菌诱导凝胶化后的SEM图片，可以从a，b，两图中明显的看到，在添加0.5％的纳米纤维素时，纤维素被大部分的HA所包裹，表现出片层状结构，而当纳米纤维素的含量提高到2％时，凝胶表现为致密的网络骨架结构。同时可以说明兽疫链球菌发酵对纳米纤维素的原位诱导凝胶化是可调控的。
[0050]实施例4
[0051]同实施例1的方法，摇瓶发酵方法依旧，所不同的是，步骤(3)将浓度为0.2％的纳米纤维素分散液直接倒入步骤(2)的摇瓶中，使该体系中纳米纤维素的终浓度为0.08％，继续培养10h，最终得到的凝胶强度过低，不能保持其形状。
[0052]对比例1
[0053]同实施例1，摇瓶发酵方法依旧，所不同的是，步骤(3)将不加入纳米纤维素，直接
降低转速为100rpm，继续培养10h，最终不能得到透明凝胶，与此同时最终HA的产量为2.022g/L。
[0054]对实施例1、实施例2和对比例1的透明质酸进行了测定，如图2所示，发现添加2％的纳米纤维素后，透明质酸的产量较添加0.5％的提高了52.14％。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种在兽疫链球菌发酵过程中原位诱导纳米纤维素凝胶化的方法，其特征在于，在兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)发酵过程中加入纳米纤维素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)的种子液以1％
‑
10％的体积比接入发酵培养基中。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵的发酵培养基中各组分的含量为：葡萄糖5
‑
20g/L、蛋白胨5
‑
20g/L、牛肉粉1
‑
10g/L、酵母粉1
‑
10g/L、NaH2PO
41‑
5g/L、NaCl 1
‑
5g/L、MgSO4·
7H2O 0...

【专利技术属性】
技术研发人员：李鑫，汤学宇，范一民，刘亮，王志国，勇强，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：