一种用于检测基质金属蛋白酶-2的磁性荧光复合探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于检测基质金属蛋白酶

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测基质金属蛋白酶
‑
2的磁性荧光复合探针及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种用于检测基质金属蛋白酶
‑
2的磁性荧光复合探针及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]基质金属蛋白酶
‑
2(MMP
‑
2)又称明胶酶A或Ⅳ型胶原酶，其广泛存在于细胞和组织中，参与多种生理和病理过程，如血管生成、组织修复和形态变化等。MMP
‑
2在细胞增殖、凋亡和免疫监视方面也发挥着重要作用，在多种恶性肿瘤(如结肠癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌等)中，MMP
‑
2会均有异常表达，是重要的癌症标志物，因此监测MMP
‑
2含量变化对癌症的早期诊断与治疗具有重要的意义。
[0003]目前检测MMP
‑
2的方法主要包括荧光明胶酶检测法、明胶酶谱法、高效液相色谱法、荧光法以及电化学法。然而，这些方法往往需要昂贵的仪器、复杂的操作和熟练的操作人员，而且检测的灵敏度和选择性也需提高，这极大地限制了这些方法的实际应用。因此，急需发展简单快速、准确、选择性好、低成本的基质金属蛋白酶检测新技术，从而为了解癌症早期诊断和治疗提供新手段，也为治疗相关疾病药物的研发提供方向。
[0004]近年来研究者们基于石墨烯、量子点、贵金属纳米颗粒和上转换纳米材料等新型纳米材料构建了纳米探针用于MMP
‑
2的检测，由于纳米材料的引入，使得MMPr/>‑
2检测方法的灵敏度、特异性、响应速度、响应时间以及响应范围等性能指标又提高到一个新的水平。但上述纳米探针仍然存在一些缺点，如制备过程复杂、成本高昂，不能重复利用，有些还有毒性。因此，探索新型复合探针，并基于其性能建立检测MMP
‑
2的新方法具有重要意义。
[0005]针对现有技术存在的问题，专利技术人意外发现，采用磁性材料、功能多肽和荧光探针制备获得的磁性荧光复合探针具有可操控、可通过磁性分离实现重复利用、灵敏度高、抗干扰能力强、背景信号小等优点，并建立了简单、快速、灵敏的MMP
‑
2的检测方法。

技术实现思路

[0006]针对上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种用于检测基质金属蛋白酶
‑
2的磁性荧光复合探针，所述的复合探针由金属螯合配基修饰的纳米磁珠和荧光素标记的功能多肽构成。
[0007]优选的，所述的功能多肽的氨基酸序列为：
[0008]①
Cys
‑
Leu
‑
(Aib)
‑
Glu
‑
Glu
‑
Lys
‑
Ser
‑
Gly
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Gly
‑
Ser
‑
Lys
‑
Glu
‑
Glu
‑
(Aib)
‑
Leu
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His，
[0009]②
Ser
‑
Gly
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Gly
‑
Ser
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His，
[0010]③
Phe
‑
Try
‑
Leu
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Phe
‑
Try
‑
Leu
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His，
[0011]④
Asp
‑
Thr
‑
Asp
‑
Lys
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Phe
‑
Try
‑
Leu
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His，
[0012]⑤
Cys
‑
Pro
‑
(Aib)
‑
Trp
‑
Leu
‑
Try
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Try
‑
Leu
‑
Trp
‑
(Aib)
‑
Pro
‑
Cys
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His中的任一种。
[0013]优选的，所述的荧光素为异硫氰酸荧光素(FITC)、羧基荧光素(FAM)、罗丹明类(TAMRA、ROX等)中的任一种；
[0014]优选的，所述的金属螯合配基修饰的纳米磁珠为钴离子螯合配基修饰的纳米磁珠、镍离子螯合配基修饰的纳米磁珠、铜离子螯合配基修饰的纳米磁珠中的任一种。
[0015]本专利技术还提供了所述磁性荧光复合探针的制备方法，包括以下步骤：
[0016](1)合成功能多肽并制成溶液备用；
[0017](2)将金属螯合配基修饰的纳米磁珠分散在PBS溶液中，再加入步骤(1)所述的功能多肽溶液，37℃下孵育反应后磁分离，得到负载功能功能多肽的纳米磁珠；
[0018](3)用HEPES缓冲溶液将步骤(2)得到的纳米磁珠洗涤，至洗涤液的荧光强度趋于零，即得磁性荧光复合探针。
[0019]优选的，所述的功能多肽溶液浓度为5.0
‑
10.0μM，所述的金属螯合配基修饰的纳米磁珠浓度为0.5
‑
2.0mg/mL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测基质金属蛋白酶
‑
2的磁性荧光复合探针，其特征在于：所述复合探针是由荧光素、功能多肽和金属螯合配基修饰的纳米磁珠组成。2.如权利要求1所述的磁性荧光复合探针，其特征在于，所述功能多肽的氨基酸序列为
①
Cys
‑
Leu
‑
(Aib)
‑
Glu
‑
Glu
‑
Lys
‑
Ser
‑
Gly
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Gly
‑
Ser
‑
Lys
‑
Glu
‑
Glu
‑
(Aib)
‑
Leu
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His，
②
Ser
‑
Gly
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Gly
‑
Ser
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His，
③
Phe
‑
Try
‑
Leu
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Phe
‑
Try
‑
Leu
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His
‑
His，
④
Asp
‑
Thr
‑
Asp
‑
Lys
‑
Pro
‑
Leu
‑
Gly
‑
Val
‑
Arg
‑
Phe
‑
Try
‑
Leu
‑
His
‑
His
‑
His
...

【专利技术属性】
技术研发人员：左显维，王玉祥，韩根亮，刘一丹，冯治棋，何欣，王焱，
申请(专利权)人：甘肃省科学院传感技术研究所，
类型：发明
国别省市：