一种透射电镜样品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种透射电镜样品的制备方法。本发明专利技术针对尖孢镰刀菌孢子比较厚的特点，采用戊二醛、饿酸双固定法固定，并配合孢子不断均匀分散技术，使固定更加充分。本发明专利技术在戊二醛、饿酸双固定法固定后，增加过夜预染色的方法，凸显孢子细胞内各细胞器的结构。本发明专利技术和现有技术相比，具有成像清晰，尖孢镰刀菌孢子内细胞器(尤其是线粒体)反差明显的特点。从而为进一步研究尖孢镰刀菌孢子内部结构变化提供技术支持，为后续采取有针对性尖孢镰刀菌防控策略提供微观水平基础。防控策略提供微观水平基础。防控策略提供微观水平基础。

【技术实现步骤摘要】
一种透射电镜样品的制备方法


[0001]本专利技术属于透射电镜
，具体涉及一种透射电镜样品的制备方法。

技术介绍

[0002]尖孢镰刀菌是引起香蕉枯萎病的主要原因。其中1号生理小种与4号生理小种严重威胁着全球香蕉产量(Siddhesh,International Journal of Pest Management,2015,61(3):250
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263)。其土传特性使得控制甚至消灭尖孢镰刀菌变得十分困难(Carvalhais,Frontier in plant science,2019,10)。随着病情的发展，植株叶片开始变黄，并逐渐枯萎。伴随着病情的进一步蔓延，叶片会掉落，围着假茎形成一圈。新生叶片会出现边缘皱褶(Berg,Molecular Plant Pathology,2010,8(3))。一旦香蕉植株被尖孢镰刀菌感染，目前来说还未有有效的控制措施。这种困难是由于尖孢镰刀菌可以产生大量孢子，这些孢子可以在土壤中存活30年之久(Ploetz,Plant Health Prog,2000,10:1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种透射电镜样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将样品固定后用染色剂进行预染色，然后经脱水、过渡、渗透与包埋、切片、染色后得到透射电镜样品。2.根据权利要求1所述的透射电镜样品的制备方法，其特征在于，所述的染色剂为质量分数0.5％的乙酸双氧铀水溶液。3.根据权利要求2所述的透射电镜样品的制备方法，其特征在于，所述的预染色具体为：将固定后的样品置于质量分数0.5％的乙酸双氧铀水溶液过夜，然后用磷酸钠缓冲液漂洗。4.根据权利要求3所述的透射电镜样品的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：1)戊二醛、饿酸双固定法固定：将样品用2.5％戊二醛固定液抽真空固定24小时以上，用0.1M，pH 7.2的磷酸钠缓冲液漂洗，然后用0.1M，pH 7.2的磷酸钠缓冲液配制的质量分数1％的饿酸溶液后固定4小时后，用0.1M，pH 7.2的磷酸钠缓冲液漂洗；2)预染色：将固定后的样品置于质量分数0.5％的乙酸双氧铀水溶液过夜，然后用0.1M，pH 7.2的磷酸钠缓冲液漂洗；3)脱水：将预染色后的样品依次用体积分数30％的乙醇水溶液、体积分数50％的乙醇水溶液、体积分数70％的乙醇水溶液、体积分数80％的乙醇水溶液、体积分数90％的乙醇水溶液、无水乙醇脱水，环氧丙烷置换；4)过渡、渗透与包埋：将脱水后的样品依次用环氧丙烷：包埋剂体积比＝3:1混合液、环氧丙烷：包埋剂体积比＝1:1混合液、环氧丙烷：包埋剂体积比＝1:3混合液过渡，包埋剂渗透，然后将样品置于包埋管中，注满包埋剂，60℃聚合；5)切片，然后置于质量分数0.5％的乙酸双氧铀水溶液过夜，再用0.1M，pH 7.2的磷酸钠缓冲液漂洗，得到透射电镜样品。5.根据权利要求1
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4任一项所述的透射电镜样品的制备方法，其特征在于，所述的包埋剂为环氧树脂
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812，所述的样品为尖孢镰刀菌孢子。6.一种透射电镜样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将样品固定后进行脱水，在脱水期间进行预染色，然后经过渡、渗透与包埋、切片、染色后得到透射电镜样品。7.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建雄，邓汝芳，田志宏，朱志炎，贾永霞，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：