降钙素原致敏胶乳、试剂盒及制备方法、应用技术

本发明专利技术公开了降钙素原致敏胶乳、试剂盒及制备方法、应用，降钙素原致敏胶乳的制备方法，包括以下步骤：S1、将两种不同粒径的氨基微球分别与N

【技术实现步骤摘要】
降钙素原致敏胶乳、试剂盒及制备方法、应用


[0001]本专利技术涉及生化试剂测定
，具体涉及降钙素原致敏胶乳、试剂盒及制备方法、 应用。

技术介绍

[0002]降钙素原(PCT)是降钙素(CT)的前体物，由116个氨基酸组成的糖蛋白，分子量约 为13KD，包括59个氨基酸的N端，32肽的活性降钙素(CT)以及21肽的下钙素；正常人 全血、血浆及血清中含量极低，小于0.5ng/ml；半衰期约20～24小时，稳定性较好；大量的 研究资料表明，PCT与感染所致的炎症反应综合征、脓毒症、脓毒性休克等全身感染情况的 严重程度和预后具有明确的相关性。当PCT浓度升至2～10ng/ml时，很可能为脓毒症、严重 脓毒症或脓毒性休克，具有高度器官功能障碍的风险；当PCT浓度超过10ng/ml时，高度提 示为严重细菌性脓毒症或脓毒性休克，并常伴有器官功能衰竭，具有高度死亡风险；当PCT 浓度不超过0.05ng/ml时，细菌感染的可能性非常小，几乎不会发生血流感染。
[0003]目前，采用降钙素原试剂盒用于检测降钙素原(PCT)的浓度。现有的降钙素原试剂盒 以胶乳增强免疫技术为基础的诊断试剂凭借其高灵敏度、线性范围广、稳定性好的性能，越 来越受到临床医学检验工作者的认可，主要包括降钙素原致敏胶乳。但是，现有的降钙素原 试剂盒存在批间及批内精密度差、样本局限、及稳定性差等缺点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供降钙素原致敏胶乳及其制备方法、应用，采用本专利技术所述方法制 备的降钙素原致敏胶乳，既能保证产品灵敏度和线性，且大大提高了产品的批批间、批内精 密度及稳定性性能。
[0005]此外，本专利技术还包括采用上述降钙素原致敏胶乳制备的试剂盒。
[0006]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0007]降钙素原致敏胶乳的制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1、将两种不同粒径的氨基微球分别与N
‑
琥珀酰亚胺基
‑3‑
(2
‑
吡啶基二硫)丙酸酯进行交 联反应，分别得到产物A和产物B；
[0009]S2、将步骤S1得到的产物A和产物B分别加入二巯苏糖醇进行产物巯基化，分别得到 产物C和产物D；
[0010]S3、将产物A和产物D进行交联，或产物B和产物C进行交联获得微球结合物；
[0011]S4、将步骤S3获得的微球结合物与交联剂按一定比例混合活化微球结合物，然后加入降 钙素原抗体包被微球结合物，加入封闭液，获得降钙素原致敏胶乳。
[0012]本专利技术制备的产物A和产物中含有硫醇吡啶保护基，产物C和产物D中含有巯基硫醇吡 啶保护基，在步骤S3中，巯基与硫醇吡啶保护基交换，微球交联。
[0013]本专利技术运用硫醇吡啶保护基交换作用，将不同粒径大小的聚苯乙烯微球连接在一起，将 特异性抗体包被在融合微球可制备得到致敏胶乳。与现有的偶联技术相比，大大缩
短了制备 时间，提高了生产效率。
[0014]本专利技术硫醇吡啶保护基交换作用，将不同粒径大小的聚苯乙烯微球连接在一起，将特异 性抗体包被在融合微球可制备得到致敏胶乳，既保证产品灵敏度和线性的同时，与现有的多 种致敏胶乳混合相比，大大提高了产品的批间、批内精密度及稳定性性能。
[0015]进一步地，氨基微球为聚苯乙烯微球，粒径为50nm～500nm，所述聚苯乙烯微球具有表 面修饰基团，表面修饰基团为羧基、氨基或甲苯璜酰基中的一种。
[0016]聚苯乙烯微球由聚苯乙烯通过乳液聚合方法制得，粒径范围一般为50nm～500nm。表面 无功能性基团的聚苯乙烯微球适合以物理吸附的方式结合抗原或抗体；表面修饰氨基、羧基 等疏水基团的聚苯乙烯微球可通过共价结合的方式与抗原/半抗原、抗体、多肽及核酸探针等 配体偶联。
[0017]进一步地，降钙素原抗体为一种或多种单克隆抗体，或为一种或多种多克隆抗体，或一 种或多种单克隆抗体和一种或多种多克隆抗体联合使用。
[0018]进一步地，降钙素原抗体至少包括鼠PCT单抗、羊PCT单抗、兔PCT单抗、兔抗人PCT 多抗、羊抗人PCT多抗中的一种。
[0019]进一步地，步骤S4中，微球结合物与交联剂的比例为10～15：10，微球结合物与降钙素 原抗体的比例为2～5：1。
[0020]一种采用上述制备方法制备的降钙素原致敏胶乳。
[0021]一种降钙素原试剂盒，包括采用上述制备方法制备的降钙素原致敏胶乳。
[0022]进一步地，包括试剂R1和试剂R2；
[0023]所述试剂R1为缓冲液，pH为6.0～9.0；
[0024]所述试剂R2包括降钙素原致敏胶乳、表面活性剂、生物防腐剂及缓冲液。
[0025]本专利技术所述试剂盒能够直接用于全血、血清及血浆中降钙素原的定量检测，缩短了样本 预处理时间，有效解决样本局限所带来的困扰，对临床疾病的诊断和治疗具有一定的促进作 用。
[0026]进一步地，试剂R1的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷
‑
盐酸缓冲液、甘氨酸
‑
三羟甲基氨基甲 烷缓冲液、4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙磺酸
‑
氢氧化钠缓冲液、硼酸
‑
四硼酸钠缓冲液、2
‑
吗啉乙磺 酸
‑
氢氧化钠缓冲液、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的一种或多种；表面活性剂为非离子表面 活性剂，为烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯烷基醇酰胺、聚醚类中的一种或多种；试剂R2的 缓冲液的pH值为5.0～9.0，试剂R2的缓冲液为硼酸
‑
四硼酸钠缓冲液、碳酸
‑
碳酸氢钠缓冲液、 Tris
‑
HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液和甘氨酸
‑
三羟甲基氨基甲烷缓冲液一种或多种，生物防腐剂 为叠氮钠、苯酚、双咪唑烷基脲、咪唑烷基脲、ProClin150、ProClin300及ProClin950的一种 或多种。
[0027]降钙素原致敏胶乳或降钙素原试剂盒在检测全血、血清或血浆中降钙素原浓度中的应用。
[0028]本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
[0029]1、本专利技术运用硫醇吡啶保护基交换作用，将不同粒径大小的聚苯乙烯微球连接在一起， 将特异性抗体包被在融合微球可制备得到致敏胶乳。与现有的偶联技术相比，大大缩短了制 备时间，提高了生产效率。
[0030]2、本专利技术硫醇吡啶保护基交换作用，将不同粒径大小的聚苯乙烯微球连接在一
起，将特 异性抗体包被在融合微球可制备得到致敏胶乳，既保证产品灵敏度和线性的同时，与现有的 多种致敏胶乳混合相比，大大提高了产品的批间、批内精密度及稳定性性能。
[0031]3、本专利技术所述试剂盒能够直接用于全血、血清及血浆中降钙素原的定量检测，缩短了样 本预处理时间，有效解决样本局限所带来的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.降钙素原致敏胶乳的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将两种不同粒径的氨基微球分别与N
‑
琥珀酰亚胺基
‑3‑
(2
‑
吡啶基二硫)丙酸酯进行交联反应，分别得到产物A和产物B；S2、将步骤S1得到的产物A和产物B分别加入二巯苏糖醇进行产物巯基化，分别得到产物C和产物D；S3、将产物A和产物D进行交联，或产物B和产物C进行交联获得微球结合物；S4、将步骤S3获得的微球结合物与交联剂按一定比例混合活化微球结合物，然后加入降钙素原抗体包被微球结合物，加入封闭液，获得降钙素原致敏胶乳。2.根据权利要求1所述的降钙素原致敏胶乳的制备方法，其特征在于，所述氨基微球为聚苯乙烯微球，粒径为50nm～500nm，所述聚苯乙烯微球具有表面修饰基团，表面修饰基团为羧基、氨基或甲苯璜酰基中的一种。3.根据权利要求1所述的降钙素原致敏胶乳的制备方法，其特征在于，所述降钙素原抗体为一种或多种单克隆抗体，或为一种或多种多克隆抗体，或一种或多种单克隆抗体和一种或多种多克隆抗体联合使用。4.根据权利要求3所述的降钙素原致敏胶乳的制备方法，其特征在于，所述降钙素原抗体至少包括鼠PCT单抗、羊PCT单抗、兔PCT单抗、兔抗人PCT多抗、羊抗人PCT多抗中的一种。5.根据权利要求1所述的降钙素原致敏胶乳的制备方法，其特征在于，步骤S4中，微球结合物与交联剂的比例为10～15：10，微球结合物与降钙素原抗体的比例为...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓红兵，任伟超，周玥，张小飞，颜松，黄敬双，鲜静，王健，宋佳，刘萍，
申请(专利权)人：四川携光生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：