用于制备副猪嗜血杆菌疫苗的组合菌株、八价灭活疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌血清1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型八价灭活疫苗制备及应用。该疫苗对1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型菌株的感染具有100%的保护率，对3型、6型、8型、9型、11型、15型及不能分型的副猪嗜血杆菌的感染均具有较好的交叉保护力，疫苗制备工艺简单，无毒副作用，安全性好，免疫期长、免疫效果好。果好。果好。

【技术实现步骤摘要】
用于制备副猪嗜血杆菌疫苗的组合菌株、八价灭活疫苗及其应用


[0001]本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种副猪嗜血杆菌血清1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型八价灭活疫苗及应用。

技术介绍

[0002]副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）是猪副猪嗜血杆菌病的病原菌，主要引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。本病在全世界范围内广泛存在。副猪嗜血杆菌可以感染各种年龄段的猪，主要发生在断奶后和保育阶段，主要感染2周龄到4月龄的猪，发病率一般在 10% ～ 15%，严重时死亡率可达 80%，该病已成为近年来断奶、保育仔猪死亡的主要原因之一，是临床混合感染的主要病原之一，给养猪业造成较大的经济损失，严重影响养猪业的健康发展。
[0003]副猪嗜血杆菌临床血清型较多，标准分型有15个血清型，临床上还有20%以上的不可分型菌株，该病原呈世界性分布，各地流行菌株血清型不一，各血清型之间缺乏免疫交叉保护能力。疫苗免疫接种是防控副猪嗜血杆菌病的最佳途径，国内副猪嗜血杆菌商品化疫苗多为针对血清4型、5型的二价疫苗，与各地区主要流行菌株血清型差异较大，导致防控效果不佳。因此亟需一种新的最大限度包含所有国内不同地区流行优势毒株研制的疫苗，且对所有血清型和不能分型的副猪嗜血杆菌的感染都具有极好保护率的疫苗。
[0004]
技术实现思路

[0005]针对副猪嗜血杆菌各地流行血清型不一，各血清型之间缺少有效交叉保护导致疫苗效果不佳的缺陷和问题，本专利技术提供一种副猪嗜血杆菌血清1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型八价灭活疫苗。本专利技术解决其技术问题所采用的方案是：提供用于制备副猪嗜血杆菌疫苗的组合菌株，包括副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）1型HN1397株，保藏编号为CGMCC NO：16804；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）2型HN1553株，保藏编号为CGMCC NO：16801；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）4型HNHPS1株，保藏编号为CGMCC NO：13335；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）5型HN1570株，保藏编号为CGMCC NO：16802；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）7型HN1565株，保藏编号为CGMCC NO：16803；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）12型HN486株，保藏编号为CGMCC NO：16805；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）13型HN1601株，保藏编号为CGMCC NO：16806；副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）14型HN1513株，保藏编号为CGMCC NO：16807。
[0006]本专利技术还提供一种上述组合菌株制备的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，包括灭活的八种副猪嗜血杆菌菌液和免疫佐剂。
[0007]上述的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，副猪嗜血杆菌1型、2型、4型、5型、7型、12型、
13型、14型的血清型抗原比例为1:1:1:1:1:1:1:1。
[0008]上述的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，所述副猪嗜血杆菌血清1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型抗原的含量均为1
×
10
10 CFU/mL。
[0009]上述的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，其特征在于：所述免疫佐剂为畜禽用水包油包水佐剂Summit S550。
[0010]本专利技术还提供一种副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：（1）增殖：1型HN1397株、2型HN1553株、4型HNHPS1株、5型HN1570株、7型HN1565株、12型HN486株、13型HN1601株和14型HN1513株菌株分别繁殖培养，获得8种副猪嗜血杆菌菌液，并分别进行活菌计数；（2）灭活：分别向步骤（1）中获得的副猪嗜血杆菌HN1397株、HN1553株、HNHPS1株、HN1570株、HN1565株、HN486株、HN1601株和HN1513株菌液中按照菌液体积的0.2%加入甲醛溶液，于37℃灭活48 h；（3）浓缩：使用超滤装置分别浓缩灭活后检验合格的副猪嗜血杆菌HN1397株、HN1553株、HNHPS1株、HN1570株、HN1565株、HN486株、HN1601株和HN1513株菌液，根据灭活前的活菌计数，用无菌生理盐水调整浓缩终浓度；（4）制备疫苗：将增殖、灭活、浓缩后获得的副猪嗜血杆菌HN1397株、HN1553株、HNHPS1株、HN1570株、HN1565株、HN486株、HN1601株和HN1513株抗原液，按照比例混匀，加入佐剂，混匀制得副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗。
[0011]上述的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗的制备方法，步骤（4）中将八种菌株灭活抗原液按照1:1:1:1:1:1:1:1的比例混匀，加入终体积30%的畜禽用水包油包水佐剂混合均匀。
[0012]本专利技术的有益效果：本专利技术从临床分离株中筛选出优势流行菌株副猪嗜血杆菌HN1553株、HNHPS1株、HN1570株、HN1565株、HN1397株、HN486株、HN1601株和HN1513株菌株，其中菌株HN1397株、HN1553株、HNHPS1株、HN1570株、HN486株、HN1601株和HN1513株对保育仔猪具有较强的致病力，引起保育猪发病死亡。本专利技术中的菌株HN1565株对保育仔猪致病力稍弱，但能引起保育仔猪呼吸道症状，发育迟缓，饲料报酬降低；通过试验发现这八株副猪嗜血杆菌均有良好的免疫原性，用这八株副猪嗜血杆菌作为菌株抗原制备的灭活疫苗对1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型的感染具有100%的保护率，对3型、6型、8型、9型、11型、15型及不能分型的副猪嗜血杆菌的感染均具有较好的交叉保护力，疫苗制备工艺简单，无毒副作用，安全性好，免疫期长、免疫效果好。
附图说明
[0013]图1为副猪嗜血杆菌的PCR分型鉴定结果，图中的Marker为DL 2000 bp，从上到下依次为2000 bp、1000 bp、750 bp、500 bp、250 bp，100 bp；泳道1～15分别为副猪嗜血杆菌1～15血清型标准株的扩增结果。
具体实施方式
[0014]下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明。
[0015]实施例1：副猪嗜血杆菌的分离和鉴定1.1 病料来源
2016年1月到2019年12月，共采集来自河南、山西、陕西、山东、湖北、安徽、江苏、河北等省具有疑似副猪嗜血杆菌病临床症状猪的病例的肺脏、心血、淋巴结、脾脏、脑、关节液等病料，发病猪多表现为发热、呼吸困难、关节肿胀、跛行、皮肤及黏膜发绀、站立困难甚至瘫痪、僵猪或死亡。
[0016]1.2 培养基配制TSB液体培养基：将TSB肉汤粉（Tryptic Soy broth，胰蛋白胨大豆肉汤，BD公司）3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于制备副猪嗜血杆菌疫苗的组合菌株，其特征在于：包括副猪嗜血杆菌1型HN1397株，保藏编号为CGMCC NO：16804；副猪嗜血杆菌2型HN1553株，保藏编号为CGMCC NO：16801；副猪嗜血杆菌4型HNHPS1株，保藏编号为CGMCC NO：13335；副猪嗜血杆菌5型HN1570株，保藏编号为CGMCC NO：16802；副猪嗜血杆菌7型HN1565株，保藏编号为CGMCC NO：16803；副猪嗜血杆菌12型HN486株，保藏编号为CGMCC NO：16805；副猪嗜血杆菌13型HN1601株，保藏编号为CGMCC NO：16806；副猪嗜血杆菌14型HN1513株，保藏编号为CGMCC NO：16807。2.一种如权利要求1所述的组合菌株制备的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，其特征在于：包括灭活的八种副猪嗜血杆菌菌液和免疫佐剂。3.根据权利要求2所述的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，其特征在于：副猪嗜血杆菌1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型的血清型抗原比例为1:1:1:1:1:1:1:1。4.根据权利要求2所述的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，其特征在于：所述副猪嗜血杆菌血清1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型抗原的含量均为1
×
10
10 CFU/mL。5.根据权利要求2所述的副猪嗜血杆菌八价灭活疫苗，其特征在于：所述免疫佐剂为畜禽用水包油包水佐剂Summit S550。6.一种如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐引弟，王治方，冯丽丽，张青娴，朱文豪，许峰，焦文强，李海利，郎利敏，张立宪，游一，王克领，
申请(专利权)人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：