细胞外囊泡的回收方法技术

本发明专利技术提供从含有细胞外囊泡的样品中回收细胞外囊泡的方法。更具体而言，本发明专利技术提供包含在聚合物的存在下从含有细胞外囊泡的样品中分离细胞外囊泡的步骤的细胞外囊泡的回收方法。收方法。收方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞外囊泡的回收方法


[0001]本专利技术涉及细胞外囊泡的回收方法等。

技术介绍

[0002]细胞外囊泡(extracellular vesicles：EV)是从各种各样的细胞中分泌的、具有膜结构的微小的囊泡，存在于血液等的体液中或细胞培养液中。被分泌至细胞外的细胞外囊泡中含有外泌体(exosome)、核外颗粒体(ectosome)、凋亡小泡(apoptotic bleb)。由于细胞外囊泡是含有承担细胞间的信息传达等的功能的各种物质的多样的集团，因此出于诊断、新药研发等的目的而正在被解析。因此，需要开发对这样的解析有用的细胞外囊泡的回收方法。例如，专利文献1中记载了使用了螯合剂的细胞外囊泡的回收方法。
[0003]现有技术文献
[0004]专利文献
[0005][专利文献1]国际公开第2018/070479号

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题
[0007]如果能从含有细胞外囊泡的样品中高效率地回收细胞外囊泡，则该方法有望应用于诊断、新药研发等。细胞外囊泡主要通过使用针对细胞外囊泡标志物的抗体的免疫沉淀法或超离心法来进行回收。但是，在这样的方法中，细胞外囊泡并非一定能够高效率地回收，另外，由于被回收的细胞外囊泡是非特异性浓缩的，其品质会有波动。
[0008]因此，本专利技术的目的是开发能够回收细胞外囊泡的新方法。
[0009]解决技术问题的技术手段
[0010]本专利技术者们深入研究的结果，发现通过在特定的聚合物的存在下，从含有细胞外囊泡的样品中分离细胞外囊泡，能够高效率地回收细胞外囊泡，从而完成了本专利技术。
[0011]也就是说，本专利技术如下。
[0012][1]、一种细胞外囊泡的回收方法，其包含：
[0013]在聚合物的存在下，从含有细胞外囊泡的样品中分离细胞外囊泡的步骤。
[0014][2]、项[1]所述的方法，其中，
[0015]聚合物在20～30℃下1～20重量％水溶液中的粘度为1.5mPa
·
s以上的值。
[0016][3]、项[1]或[2]所述的方法，其中，
[0017]聚合物为纤维素衍生物或具有含羰基的亲水性基团的聚乙烯基衍生物。
[0018][4]、项[3]所述的方法，其中，
[0019]聚合物为至少1个羟基的氢原子被羧烷基或羟烷基取代的纤维素衍生物或至少1个氢原子被内酰胺取代的聚乙烯基衍生物。
[0020][5]、项[4]所述的方法，其中，
[0021]聚合物为羧甲基纤维素、羟乙基纤维素，羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或聚乙
烯基吡咯烷酮。
[0022][6]、项[1]～[5]中的任一项所述的方法，其中，
[0023]聚合物具有10kDa以上的重均分子量。
[0024][7]、项[1]～[6]中的任一项所述的方法，其中，
[0025]从含有细胞外囊泡的样品中分离细胞外囊泡时的聚合物的浓度为0.01～10.00重量％。
[0026][8]、项[1]～[7]中的任一项所述的方法，其进一步包含：
[0027]将含有细胞外囊泡的样品与螯合剂混合的步骤。
[0028][9]、项[1]～[8]中的任一项所述的方法，其中，
[0029]细胞外囊泡是外泌体。
[0030][10]、项[1]～[9]中的任一项所述的方法，其中，
[0031]所述分离通过使用了细胞外囊泡膜结合物质的分离方法或含有细胞外囊泡的样品的超离心方法进行。
[0032][11]、项[10]所述的方法，其中，
[0033]细胞外囊泡膜结合物质是针对四跨膜蛋白的抗体或针对细胞外基质金属蛋白酶诱导物质的抗体。
[0034][12]、项[11]所述的方法，其中，
[0035]细胞外囊泡膜结合物质是针对CD9、CD63、CD81或CD147的抗体。
[0036][13]、项[1]～[12]中的任一项所述的方法，其中，
[0037]含有细胞外囊泡的样品是血液样品、尿或唾液。
[0038][14]、一种细胞外囊泡的分析方法，其包含以下的步骤：
[0039](1)在聚合物的存在下，从含有细胞外囊泡的样品中分离细胞外囊泡的步骤；和
[0040](2)分析被分离的细胞外囊泡的步骤。
[0041][15]、项[14]所述的方法，其进一步包含：
[0042]向含有细胞外囊泡的样品中添加螯合剂的步骤。
[0043][16]、项[14]或[15]所述的方法，其中，
[0044]对被分离的细胞外囊泡中的蛋白质或核酸进行分析。
[0045][17]、一种试剂盒，其包含聚合物和细胞外囊泡膜结合物质。
[0046][18]、项[17]所述的试剂盒，其进一步包含螯合剂。
[0047]专利技术的效果
[0048]根据本专利技术，通过使用特定的聚合物，可以以高效率并且高纯度回收细胞外囊泡。
附图说明
[0049][图1]图1是表示，实施例1中，以PBS、EDTA/EGTA
‑
PBS(“ED/EG”)或各浓度的各种CMC
‑
PBS稀释的血清检查材料的、通过使用抗CD9抗体进行的免疫沉淀法而得的样品的基于生物素化抗CD9抗体的免疫印迹的图。
[0050][图2]图2是表示，实施例2中，使以PBS或各浓度的CMC
‑
PBS稀释的血清检查材料在4℃下一晚或在37℃下1小时与抗CD9抗体进行免疫沉淀而得的样品的基于生物素化抗CD9抗体的免疫印迹的图。
[0051][图3]图3是表示，实施例3中，以PBS、EDTA/EGTA
‑
PBS(“ED/EG”)或CMC
‑
PBS稀释的血清检查材料的、通过使用抗CD9抗体进行的免疫沉淀法而得的样品的基于纳米颗粒跟踪分析测得的粒子数测定结果的图。
[0052][图4]图4是表示，实施例4中，将含有血清和5种抗凝固剂(肝素、EDTA、柠檬酸(citrate)、ACD(酸
‑
柠檬酸
‑
葡萄糖、acid
‑
citrate
‑
dextrose)、CPD(柠檬酸
‑
磷酸
‑
葡萄糖、citrate phosphate dextrose))的血浆用PBS、CMC
‑
PBS、EDTA/EGTA
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PBS(“ED/EG”)或EDTA/EGTA/CMC
‑
PBS(“ED/EG/C”)稀释的检查材料的、通过使用抗CD9抗体进行的免疫沉淀法而得的样品的基于生物素化抗CD9抗体的免疫印迹的图。
[0053][图5A]图5A是表示，实施例5中，以PBS、CMC
‑
PBS、EDTA/EGTA
‑
PBS(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞外囊泡的回收方法，其包含：在聚合物的存在下，从含有细胞外囊泡的样品中分离细胞外囊泡的步骤。2.权利要求1所述的方法，其中，聚合物在20～30℃下1～20重量％水溶液中的粘度为1.5mPa
·
s以上的值。3.权利要求1或2所述的方法，其中，聚合物为纤维素衍生物或具有含羰基的亲水性基团的聚乙烯基衍生物。4.权利要求3所述的方法，其中，聚合物为至少1个羟基的氢原子被羧烷基或羟烷基取代的纤维素衍生物或至少1个氢原子被内酰胺取代的聚乙烯基衍生物。5.权利要求4所述的方法，其中，聚合物为羧甲基纤维素、羟乙基纤维素，羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯基吡咯烷酮。6.权利要求1～5中的任一项所述的方法，其中，聚合物具有10kDa以上的重均分子量。7.权利要求1～6中的任一项所述的方法，其中，从含有细胞外囊泡的样品中分离细胞外囊泡时的聚合物的浓度为0.01～10.00重量％。8.权利要求1～7中的任一项所述的方法，其进一步包含：将含有细胞外囊泡的样品与螯合剂混合的步骤。9.权利要求1～8中的任一项所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：川崎佑季，栗本绫子，犬塚达俊，
申请(专利权)人：合同会社予幸集团中央研究所，
类型：发明
国别省市：