一种番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法技术

本发明专利技术属于植物抗性鉴定技术领域，具体涉及一种番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法。该方法通过模拟低钾胁迫条件，测定受测番茄品系叶片中H

【技术实现步骤摘要】
一种番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法
本专利技术属于植物抗性鉴定
，具体涉及一种番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法。
技术介绍
钾素亏缺严重影响番茄的品质和产量，目前我国农田钾平衡总体表现为亏缺态势，且不合理的施肥导致土壤板结而影响作物营养吸收，致使农产品的生产成本较高且品质下降。由于耐低钾基因型较钾敏感基因型常具有更好的吸收能力，更高的利用效率及更优化的自我保护能力等方面的优势。筛选及鉴定耐低钾型的番茄材料，对开发新品种及推广应用具有重要的实践意义。目前，番茄耐低钾性的鉴定方法，主要包括鉴定其吸钾量、钾利用效率、生物量、产量、根系活力、光合作用能力等指标。通过这些指标的测定，已在多种物种中筛选鉴定得到耐低钾型品系及钾敏感型品系。在挖掘优质种资资源的工作中发挥了的重要的作用。但也存在着一些不足之处，如鉴定植株耐低钾性时常将植物吸收钾的能力(吸钾量)及对钾的利用效率(钾利用效率)作为主要衡量指标，在实际测定的时候往往会出现，吸钾量高而钾利用效率并不高的情况，或者钾利用效率较高而吸钾能力并不高的情况出现，因此常需要测定其它多种生理生化指标，综合判定植株对低钾的耐性。使整个鉴定的周期及工作量加大。因此，迫切需要建立一种快速简便、准确性高的番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为解决上述技术问题，而提供的一种快速而简便的番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法，以准确鉴定番茄品系间耐低钾性的差异。本专利技术提供的番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法包括如下步骤：>(1)取待测番茄品系，选择其中无病虫植株，置于全营养液(K+)及无钾营养液(K-)中培养；(2)测量H2O2含量。取上述步骤(1)培养的植株叶片1g-2g，剪碎后加3ml4℃预冷丙酮匀浆，10min(10000r/min)离心后留取上清液，加3ml萃取剂，再加5-10ml蒸馏水，混匀后离心1min(4000r/min),上清液为H2O2待测液；[(3)取上述步骤(2)中待测液，加入硫酸钛溶液2ml与浓氨水3ml溶液，待沉淀形成后离心10min(3000r/min)，弃去上清液，沉淀用丙酮反复洗涤3-5次；(4)向上述步骤(3)中沉淀加入2mol/L硫酸，待沉淀溶解后，转入10ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，△A415nm波长下比色；(5)制作H2O2标准曲线，△A415nm波长下比色，获得H2O2浓度，根据计算公式计算植物组织中H2O2含量(μmol/gFW)＝(C*Vt)/(FW*V1)，K+、K-每组取3-5次重复，取平均值。式中C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度(μmol)；Vt—样品提取液总体积(ml)；FW—植物组织鲜重(g)；V1—测定时用样品提取液体积(ml)；(6)分析结果，根据每种番茄品系叶片中相对H2O2含量(K--K+)值的大小，判定其耐低钾能力的强弱，数值越小，耐低钾性越强；数值越大，耐低钾性越弱。上述方法中，所述的步骤(1)中全营养液(K+)组配方按1-3mMCa(NO3)2·4H2O，3-5mMKNO3，0.5-1mMNH4H2PO4，1-3mMMgSO4·7H2O，0.03-0.07mMH3BO3，0.005-0.01mMMnSO4·4H2O，0.5-1mMZnSO4·7H2O，0.2-0.5mMCuSO4·5H2O，0.1-0.2mM(NH4)2MoO4，0.05-0.1mMFeSO4·7H2O和0.04-0.05mMNa2-EDTA配制；无钾营养液(K-)组去掉配方中KNO3，用NaNO3补齐溶液中缺乏的NO3-同时达到低钾效果，将pH调节至5.8±0.1。上述方法中，所述的步骤(2)中取培养12h-24h的植株叶片，萃取剂配置方法按CHCl3(三氯甲烷)：CCl4(四氯化碳)＝1:3体积比混匀。上述方法中，所述的步骤(3)中加入5％-10％硫酸钛溶液。上述方法中，所述的步骤(4)中加入硫酸3ml-6ml，直至沉淀全部溶解。本专利技术基于植物自我保护机制的强弱来判定番茄耐低钾能力。在低钾胁迫条件下，植物体内积累H2O2，其含量越多，说明植物自身清除活性氧的能力越弱，对植物体自身产生的影响越大，抗逆性越弱。反之，其含量越少，说明植物自身清除活性氧的能力越强，抗逆性越强。本专利技术与现有的筛选与鉴定技术相比较有如下优势：(1)通过一项指标的测定就能判定番茄品系间对低钾胁迫的不同耐性，避免测定多个指标，由于指标之间不具有正相关性，而对测定结果造成误判；(2)在植株的早期就能进行鉴定，极大的缩短了鉴定的周期；(3)使用实验室常规仪器与试剂，方法简单、易行、可靠，鉴定结果准确；(4)适用性广，适合于科研、教学、农业等部门与机构实现快速耐低钾番茄品系的选育并大大缩减了基础研究的工作量。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。本实施例选用8种对低钾不同耐性的番茄品系为试材，品系名称分别为田嘉101、东农709、辽研162、金冠8号、辽粉9、CM209、粉钻12、LW30。具体实施步骤如下：(1)取待测8种番茄品系中无病虫植株，置于正常全营养液(K+)及无钾营养液(K-)中培养。K+组配方按1.5mMCa(NO3)2·4H2O，4mMKNO3，0.67mMNH4H2PO4，2mMMgSO4·7H2O，0.05mMH3BO3，0.009mMMnSO4·4H2O，0.7mMZnSO4·7H2O，0.32mMCuSO4·5H2O，0.1mM(NH4)2MoO4，0.05mMFeSO4·7H2O和0.04mMNa2-EDTA配制；K-组去掉配方中KNO3，用NaNO3补齐溶液中缺乏的NO3-同时达到低钾效果。将pH调节至5.8±0.1；(2)培养12h，取番茄叶片1.5g(K+、K-组分别重复3次)，剪碎后加入3ml4℃预冷丙酮匀浆，4℃离心10min(10000r/min),取1ml上清液，加3ml萃取剂(CHCl3:CCl4＝1:3体积比混匀)，再加5ml蒸馏水，混匀，离心1min(4000r/min),上清液为H2O2待测液；(3)取H2O2待测液1ml，加入5％硫酸钛溶液2ml，浓氨水3ml，待沉淀形成后离心10min(3000r/min)，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3-5次；(4)向洗涤后的沉淀中加入2mol/L硫酸5ml，待沉淀完全溶解后，转入10ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，△A415nm波长下比色；(5)制做H2O2的标准曲线100μmol/LH2O2试剂：取30％分析纯H2O21μl，溶于10ml蒸馏水中，再稀释100倍。取7支试管按表1顺序依次加入试剂，待沉淀溶解后定容至10ml，△A415nm波长下比色：表1H2O2测定标准曲线配制表表2不同浓度H2O2吸光度测定结果...

【技术保护点】
1.本专利技术提供一种番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法，其步骤如下：/n（1）取待测番茄品系，选择其中无病虫植株，置于全营养液（K

【技术特征摘要】
1.本发明提供一种番茄品系间耐低钾性差异的鉴定方法，其步骤如下：
（1）取待测番茄品系，选择其中无病虫植株，置于全营养液（K+）及无钾营养液（K-）中培养；
（2）测量H2O2含量，取上述步骤（1）培养的植株叶片1g-2g，剪碎后加3ml4℃预冷丙酮匀浆，10min（10000r/min）离心后留取上清液，加3ml萃取剂，再加5-10ml蒸馏水，混匀后离心1min（4000r/min）,上清液为H2O2待测液；
（3）取上述步骤（2）中待测液，加入硫酸钛溶液2ml与浓氨水3ml溶液，待沉淀形成后离心10min（3000r/min），弃去上清液，沉淀用丙酮反复洗涤3-5次；
（4）向上述步骤（3）中沉淀加入2mol/L硫酸，待沉淀溶解后，转入10ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，△A415nm波长下比色；
（5）制作H2O2标准曲线，△A415nm波长下比色，获得H2O2浓度，根据计算公式计算植物组织中H2O2含量（μmol/gFW）=（C*Vt）/（FW*V1），K+、K-每组取3-5次重复，取平均值；式中C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）；Vt—样品提取液总体积（ml）；FW—植物组织鲜重（g）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；
（6）分析结果，根据每种番茄品系叶片中相对H2O2含量（K--K+）值的大小，判定其耐低钾能力的强...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓明，于佳，于洋，李宏宇，苏宝玲，刘泓铄，
申请(专利权)人：沈阳大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21