【技术实现步骤摘要】
一种ATP酶组织化学染色方法
本专利技术属于生物组织化学染色领域,具体涉及一种ATP酶组织化学染色方法。
技术介绍
在肌纤维形态学分型研究和肌肉疾病病理诊断上,采用新鲜肌肉标本进行经典ATP酶组织化学染色非常重要。ATP酶组织化学主要原理是钙激活法,当新鲜肌肉组织中的三磷酸腺苷水解为二磷酸腺苷和磷酸,磷酸能够与钙离子结合,在酶活性处形成无色的磷酸钙,磷酸钙经氯化钴处理,会形成磷酸钴,再经硫化铵处理便形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位。采用新鲜肌肉组织做相关病理学检查,因为组织本身时效要求严格,但在肌肉各种特殊染色实验操作中的步骤繁复且需时较长,所以实验者们一直在临床运用中不断的改进和完善。现有的ATP酶组织化学染色方法存在取材切片处理不规范、预孵育液适用性不好等问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种ATP酶组织化学染色方法,旨在至少一定程度的克服现有技术中存在的上述问题。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下:一种ATP酶组织化学染色方法,其包括如下步骤:(1)取材与冷冻切片:麻醉完成后,偏离麻醉剂注射的位置确定为肌肉取材部位,刀片划开皮肤及目标肌肉,用带齿镊子夹住划开位置,使用刀片切下10mm×5mm×5mm的肌肉块,并转移至用生理盐水湿润过的纱布上,将装有异戊烷的离心管置于液氮中预冷至底部结霜,将切下的肌肉块用镊子夹起后浸入预冷好的异戊烷中,匀速顺时针旋转40-60次,再将其迅速置于封口袋中并置于液氮中保存,使用冷冻切片机对冷冻的肌肉块进行切片; ...
【技术保护点】
1.一种ATP酶组织化学染色方法,其特征在于,包括如下步骤:/n(1)取材与冷冻切片:麻醉完成后,偏离麻醉剂注射的位置确定为肌肉取材部位,刀片划开皮肤及目标肌肉,用带齿镊子夹住划开位置,使用刀片切下10mm×5mm×5mm的肌肉块,并转移至用生理盐水湿润过的纱布上,将装有异戊烷的离心管置于液氮中预冷至底部结霜,将切下的肌肉块用镊子夹起后浸入预冷好的异戊烷中,匀速顺时针旋转40-60次,再将其迅速置于封口袋中并置于液氮中保存,使用冷冻切片机对冷冻的肌肉块进行切片;/n(2)试剂配制:配制预孵育液、增强洗液、孵育液、氯化钴溶液及硫化铵溶液,备用;/n(3)染色处理:室温下将切片置于预孵育液中处理3-5min,处理完后取出切片并置入增强洗液中洗15-30s,随后将切片浸入孵育液中37℃处理25-30min,再将切片浸入氯化钴溶液中处理3-5min,取出后先用自来水冲洗数次,再用双蒸水洗4次,随后将切片浸入硫化铵溶液中处理20-30s,流水冲洗,然后脱水封片。/n
【技术特征摘要】
1.一种ATP酶组织化学染色方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取材与冷冻切片:麻醉完成后,偏离麻醉剂注射的位置确定为肌肉取材部位,刀片划开皮肤及目标肌肉,用带齿镊子夹住划开位置,使用刀片切下10mm×5mm×5mm的肌肉块,并转移至用生理盐水湿润过的纱布上,将装有异戊烷的离心管置于液氮中预冷至底部结霜,将切下的肌肉块用镊子夹起后浸入预冷好的异戊烷中,匀速顺时针旋转40-60次,再将其迅速置于封口袋中并置于液氮中保存,使用冷冻切片机对冷冻的肌肉块进行切片;
(2)试剂配制:配制预孵育液、增强洗液、孵育液、氯化钴溶液及硫化铵溶液,备用;
(3)染色处理:室温下将切片置于预孵育液中处理3-5min,处理完后取出切片并置入增强洗液中洗15-30s,随后将切片浸入孵育液中37℃处理25-30min,再将切片浸入氯化钴溶液中处理3-5min,取出后先用自来水冲洗数次,再用双蒸水洗4次,随后将切片浸入硫化铵溶液中处理20-30s,流水冲洗,然后脱水封片。...
【专利技术属性】
技术研发人员:鄢哲雄,
申请(专利权)人:武汉魅杰生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:湖北;42
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