一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法技术

本发明专利技术涉及一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，包括如下步骤：S1，收集受试者在基础状态下的一个或多个呼出气体的样品作为参比气体；S2，给受试者服用含柠檬酸且pH值在2至3之间的食品、

【技术实现步骤摘要】
一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法
本专利技术涉及幽门螺旋杆菌的检测
，尤其是一种成本低、灵敏度高的基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法。
技术介绍
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，简称Hp)，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌，于1982年被巴里·马歇尔(BarryJ.Marshall)和罗宾·沃伦(J.RobinWarren)首次发现，在随后的研究中证实此细菌会造成胃炎、慢性胃肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、非溃疡性消化不良及部分胃癌等消化系统的疾病。目前，幽门螺旋杆菌患病人数为5～7亿，因此幽门螺旋杆菌检测也被列入了定期体检项目之中。具体而言，幽门螺旋杆菌主要的检测方法是13C-尿素和14C-尿素的呼气试验，被称为检测的金标准，但由于14C-尿素本身带有微量放射性在被逐渐取代，而13C同位素由于分离难度大，分离条件苛刻，需要在极低温度下(-200℃)进行，造成其生产成本高，进而导致检测成本升高，同时又由于13C的敏感性低，在尿素酶活性产生变化时就会有错误的结果产生，进而导致测试结果准确度降低。
技术实现思路
针对现有的不足，本专利技术提供一种成本低、灵敏度高的基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，包括如下步骤：S1，收集受试者在基础状态下的一个或多个呼出气体的样品作为参比气体；S2，给受试者服用含柠檬酸且pH值在2至3之间的食品、18O标记的尿素或18O标记的葡萄糖内服药物中的任意一种物品；S3，在服用完S2中的物品后在给定时间内收集受试者一个或多个呼出气体的样品作为样本气体；S4，分别检测计算出参比气体和样本气体中18O的DOB值，若DOB值大于等于1.92‰则表示受试者的消化系统中存在有幽门螺旋杆菌。作为优选，所述参比气体是在受试者空腹10-12小时后，漱口并将呼出气体收集在标准容积的气体收集袋中的，所述样本气体的收集是在服用完S2中物品后的两个小时内，每隔15分钟收集一次的。作为优选，在步骤S4之前还有一步骤，即测试收集到的所述参比气体和样本气体在各自密封容器中的浓度并使样本气体与参比气体的浓度差对参比气体的浓度不超过1％，若超过1％则往样本气体充入高纯氮气作为零气来对样本气体进行稀释直至样本气体与参比气体的浓度差对参比气体的浓度的比值不超过1％。作为优选，所述参比气体和样本气体中18O的DOB值是通过色谱法、同位素质谱法、火焰电离法或光谱法中的任意一种方法来测得的。作为优选，所述同位素质谱法采用的是高精度激光ICOS系统的同位素分析仪。作为优选，所述同位素质谱法中同位素分析仪的设定参数是：电子轰击(EI)离子源，电子能量124eV，加速电压10KV，工作标准气(高纯CO2，含量≥99.999％)，以国际标准(V-SMOW)为参考，其步骤包括：a1，连续通入相同量的10组标准CO2气进行连续测定，做校零测试；a2,在相同条件下，改变标准CO2气的进样量确定系统的检测范围；a3，在相同条件下，在确定好的检测范围内分别测试得出所述参比气体和样本气体中18O的DOB值。作为优选，所述18O标记的尿素的制备方法采用二氧化碳与氨合成或一氧化碳与氨合成方法中的任意一种方法来制得，所述二氧化碳与氨的合成方法包括如下步骤：b1，通过精馏制取H218O；b2，将精馏制得的H218O进行电解，得到18O2气体；b3，将得到的18O2气体过量地与碳燃烧得到C18O2气体；b4，将氨与C18O2气体反应合成含有18O的尿素合成液；b5，使用步骤b3中得到的C18O2气体对步骤b4中合成得到的尿素合成液进行气提；所述一氧化碳与氨的合成方法包括如下步骤：c1，通过精馏制取H218O；c2，将精馏制得的H218O进行电解，得到18O2气体；c3，将得到的18O2气体与碳不完全燃烧得到C18O气体；c4，将氨与C18O气体加压并冷却形成液态，使液态的氨和C18O与固态单质S在反应釜中合成含有18O的尿素合成液。作为优选，所述18O标记的内服药物是单一剂量单位形式的组合物，每剂中包含18O尿素或18O葡萄糖为5-25毫克，组合物为液体时其浓度范围为30-1000mg/ml，组合物为固体时其浓度范围是重量百分比0.07-98％。作为优选，所述步骤S2中的内服药物是一种以散剂、片剂、丸剂、胶囊或液体中的任意一种形式存在的组合物，其还包括有增敏剂、矫味剂中的一种或多种。作为优选，所述增敏剂是苹果酸、抗坏血酸、酒石酸中的任意一种或多种，所述矫味剂是甜菊甙、阿斯巴甜、甜菊素中的任意一种或多种。本专利技术的有益效果在于：该专利技术使用18O来标记追踪，18O可以从天然水中进行分离，原料易得，易分离生产，稳定同位素分离的难度得以极大的降低，也就极大的节约了生产成本，同时18O的检测灵敏度高，不会受到尿素酶活性的变化而影响反应，保证了检测结果的准确性。附图说明图1是本专利技术实施例测试方法的系统结构示意图；图2是本专利技术实施例中不同患者服用pH值在2至3的含柠檬酸食品的测试结果示意图；图3是本专利技术实施例中不同患者服用18O标记的尿素并通过ICOS系统的测试结果示意图；图4是本专利技术实施例的测试方法与传统13C标记测试方法的测试结果对比示意图；图5是本专利技术实施例中不同患者服用18O标记的葡萄糖并通过ICOS系统的测试结果示意图图中零部件名称及序号：1-离线模式10-气体采集袋11-气密注射器2-在线模式3-气体阀门4-质谱仪测试装置40-压力计41-第二气泵42-第一气泵5-毛细管气体阀门6-数据处理终端。具体实施方式为了更清楚地说明本专利技术实施例的目的、技术方案和优点，下面将结合实施例对本专利技术作进一步说明，进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的部分实施例，而不是全部实施例。基于本专利技术的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术的保护范围。本专利技术实施例一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，包括如下步骤：一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，包括如下步骤：S1，收集受试者在基础状态下的一个或多个呼出气体的样品作为参比气体；此基础状态则需要受试者的呼吸未处于巨大波动状态，即呼吸急促或呼吸过缓等非常规状态，此时若只收集一个样品则可以使用一个呼气管对着收集气体的密封容器呼气或者直接对着测试系统吹气向测试系统中注入气体，收集气体的密封容器则选用常规的具有容积规定的标准的气体收集袋中，如美国公司Quintron的QT00892呼气样品收集袋，这样收集到的气体在体积、压强、浓度之间就不会产生大的偏差，待所收集的气体达到需求后停止收集，对于单个样本来说其测试的结果就会存在有偶然误差在内，会对测试结果的准确性产生影响，优选收集多个样本，在收集多个样本时，使用呼气管一个接一个连续的收集，这样收集的样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS1，收集受试者在基础状态下的一个或多个呼出气体的样品作为参比气体；/nS2，给受试者服用含柠檬酸且pH值在2至3之间的食品、

【技术特征摘要】
1.一种基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1，收集受试者在基础状态下的一个或多个呼出气体的样品作为参比气体；
S2，给受试者服用含柠檬酸且pH值在2至3之间的食品、18O标记的尿素或18O标记的葡萄糖内服药物中的任意一种物品；
S3，在服用完S2中的物品后在给定时间内收集受试者一个或多个呼出气体的样品作为样本气体；
S4，分别检测计算出参比气体和样本气体中18O的DOB值，若DOB值大于等于1.92‰则表示受试者的消化系统中存在有幽门螺旋杆菌。


2.根据权利要求1所述基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，其特征在于：所述参比气体时在受试者空腹10-12小时后，漱口并将呼出气体收集在标准容积的气体收集袋中的，所述样本气体的收集是在服用完S2中物品后的两个小时内，每隔15分钟收集一次的。


3.根据权利要求1所述基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，其特征在于：在步骤S4之前还有一步骤，即测试收集到的所述参比气体和样本气体在各自密封容器中的浓度并使样本气体与参比气体的浓度差对参比气体的浓度不超过1％，若超过1％则往样本气体充入高纯氮气作为零气来对样本气体进行稀释直至样本气体与参比气体的浓度差对参比气体的浓度的比值不超过1％。


4.根据权利要求1所述基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，其特征在于：所述参比气体和样本气体中18O的DOB值是通过色谱法、同位素质谱法、火焰电离法或光谱法中的任意一种方法来测得的。


5.根据权利要求3所述基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，其特征在于：所述同位素质谱法采用的是高精度激光ICOS系统的同位素分析仪。


6.根据权利要求3所述基于氧同位素的幽门螺旋杆菌的测试方法，其特征在于：所述同位素质谱法中同位素分析仪的设定参数是：电子轰击(EI)离子源，电子能量124eV，加速电压10KV，工作标准气(高纯CO2，含量≥99.999％)，以国际标准(V-SMOW)为参考，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓军，肖桂山，阮英恒，
申请(专利权)人：深圳鼎邦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44