一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用。所述检测方法包括获取孔板中实验组样品的显微图像、分析所述实验组样品的显微图像以及基于所述实验组样品的图像分析结果得到所述宿主细胞的感染程度和所述待测物的病毒中和能力的步骤。该检测方法对孔板中的荧光标记样本进行成像和分析，快速得出病毒中和抗体能力的实验数据，避免了细胞裂解或胰酶消化等过程对细胞自然状态的干扰，且该方法操作流程简单，不需要特殊的材料或耗时的维护。

【技术实现步骤摘要】
一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及药物的开发和筛选，尤其涉及一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用。
技术介绍
病毒中和抗体的功能研究主要涉及病毒中和能力和抗体结合能力的研究。抗体结合能力通常采用酶联免疫法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)、生物膜干涉技术(BiolayerInterferometry，BLI)和流式细胞荧光分选技术(FluorescenceactivatedCellSorting，FACS)等方法研究。抗体中和能力一般通过假病毒报告基因或病毒蚀斑减少中和实验(PRNT)来评估。但以上几种方法均存在各自的弊端与局限性，难以满足快速高通量筛选的迫切要求。其中，酶联免疫法的核心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来进行检测；该方法无法准确地评估抗体与天然构象抗原蛋白的结合，容易产生假阳性数据。生物膜干涉技术是基于干涉光谱图的位移变化来检测生物分子间的相互作用，此方法需要待检测的蛋白必须有标签才能以亲和的方式固定在传感器上。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：/n获取孔板中实验组样品的显微图像，所述实验组样品为至少两种浓度的待测物与病毒颗粒分别混合后，再与宿主细胞混合后得到的样品，其中，所述病毒颗粒携带荧光标记A或者与携带荧光标记A的标记物结合，在明场和/或与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发下对所述实验组样品进行显微成像，得到所述实验组样品的显微图像；/n分析所述实验组样品的显微图像，得到所述实验组样品的图像分析结果；/n基于所述实验组样品的图像分析结果得到所述宿主细胞的感染程度和所述待测物的病毒中和能力。/n

【技术特征摘要】
1.一种病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
获取孔板中实验组样品的显微图像，所述实验组样品为至少两种浓度的待测物与病毒颗粒分别混合后，再与宿主细胞混合后得到的样品，其中，所述病毒颗粒携带荧光标记A或者与携带荧光标记A的标记物结合，在明场和/或与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发下对所述实验组样品进行显微成像，得到所述实验组样品的显微图像；
分析所述实验组样品的显微图像，得到所述实验组样品的图像分析结果；
基于所述实验组样品的图像分析结果得到所述宿主细胞的感染程度和所述待测物的病毒中和能力。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述图像分析结果包括实验组平均荧光强度、细胞总数或细胞感染个数中的任意一种或至少两种的组合。


3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：
获取阳性对照组的显微图像和阴性对照组的显微图像，其中，所述阳性对照组中的样品为阳性样本与所述病毒颗粒混合后再与宿主细胞混合后得到的样品，所述阴性对照组中的样品为阴性样本与所述病毒颗粒混合后再与宿主细胞混合后得到的样品，
分析所述阳性对照组的显微图像和所述阴性对照组的显微图像，得到图像分析结果，包括阳性对照平均荧光强度、阴性对照平均荧光强度、细胞总数、细胞感染个数中的任意一种或至少两种的组合。


4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述宿主细胞的感染程度以感染率或结合抑制率表示；
所述感染率采用如下公式进行计算：
感染率＝细胞感染个数/细胞总数；
所述结合抑制率采用如下公式进行计算：
结合抑制率＝(实验组平均荧光强度-阴性对照平均荧光强度)/(阳性对照平均荧光强度-阴性对照平均荧光强度)。


5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括构建拟合曲线确定所述待测物的病毒中和能力；
所述拟合的方法为：以所述待测物的浓度、实验组平均荧光强度/细胞感染个数/感染率/结合抑制率为变量，得到反映病毒中和能力的剂量依赖曲线图。


6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，基于量-效关系方程拟合得到反映病毒中和能力的剂量依赖曲线：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope)
X表示待测物的浓度；
Y表示待测物在X浓度下，实验组...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜晶，
申请(专利权)人：上海睿钰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31