重组人促红细胞生成素的纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种促红细胞生成素的纯化方法，包括特定顺序的纯化步骤。与现有的纯化方法相比，工艺简单，可获得高纯度高活性的重组人促红细胞生成素蛋白。

【技术实现步骤摘要】
重组人促红细胞生成素的纯化方法
本专利技术涉及蛋白质纯化领域。更具体地，本专利技术涉及一种对重组人促红细胞生成素(rhEPO)蛋白的纯化方法。
技术介绍
重组人促红细胞生成素(rhEPO)是一种激活并调节红细胞生成的糖蛋白激素，广泛用于因慢性肾病、化疗及其他原因引起的贫血症。作为第一代重组蛋白药物，rhEPO疗效明确，医生认可度高，产品生命周期长。促红细胞生成素(EPO)的分子骨架具有不同的糖基化位点，为一种高度糖基化的蛋白，糖链的末端带有唾液酸，唾液酸含量的多少决定了EPO在体内的代谢速度，对体内的生物活性有决定性的影响。末端唾液酸残基数量较多的EPO会相对较慢地从生物体中清除，有较长的半衰期和较高的活性；反之亦然。EPO末端唾液酸化的差异会体现在其所带电荷量上，不同唾液酸化的EPO也可以视为糖异构体。因此EPO蛋白中糖异构体的含量分布是影响安全性和有效性的重要因素。糖异构体的含量分布与纯化工艺有着紧密的联系，通过改进蛋白纯化工艺制得高品质EPO，从而保证药品的有效性和安全性是迫切需要的。专利技术内容本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纯化促红细胞生成素的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1、过滤与浓缩含有促红细胞生成素的细胞培养液；/n步骤2、将步骤1处理后的过滤浓缩产物进行Q琼脂糖凝胶强阴离子交换层析；/n步骤3、将步骤2处理后的层析产物进行Oligo R3反相层析；/n步骤4、将步骤3处理后的层析产物进行DEAE琼脂糖凝胶弱阴离子交换层析；/n步骤5、将步骤4处理后的层析产物进行葡聚糖凝胶S200分子筛层析。/n

【技术特征摘要】
1.一种纯化促红细胞生成素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、过滤与浓缩含有促红细胞生成素的细胞培养液；
步骤2、将步骤1处理后的过滤浓缩产物进行Q琼脂糖凝胶强阴离子交换层析；
步骤3、将步骤2处理后的层析产物进行OligoR3反相层析；
步骤4、将步骤3处理后的层析产物进行DEAE琼脂糖凝胶弱阴离子交换层析；
步骤5、将步骤4处理后的层析产物进行葡聚糖凝胶S200分子筛层析。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述OligoR3反相层析依次包括平衡柱床、上样、淋洗、洗脱、收集洗脱峰步骤，所述OligoR3反相层析洗脱步骤使用pH为6.8-7.2的62-72％的乙醇/0.01MTris-HCl的缓冲液洗脱。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述OligoR3反相层析淋洗步骤使用pH为6.8-7.2的48-58％乙醇/0.01MTris-HCl的缓冲液淋洗至基线。


4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述Q琼脂糖凝胶强阴离子交换层析依次包括平衡柱床、上样、淋洗、洗脱、收集洗脱峰步骤，所述Q琼脂糖凝胶强阴离子交换层析淋洗步骤包括两次淋洗，先用pH为4.2-4.6的6M尿素/1mM甘氨酸淋洗至基线平稳，再用pH为6.8-7.2的0.02-0.08M的NaCl/0.01MTris-HCl的缓冲液淋洗至基线平稳。


5.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：程楚鸿，吴园园，张向荣，黄健，苗双双，王康，王梦格，
申请(专利权)人：深圳赛保尔生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44