一种PD-L1靶向肽药物偶联物及其合成方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种PD

【技术实现步骤摘要】
一种PD
‑
L1靶向肽药物偶联物及其合成方法和应用


[0001]本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种PD
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L1靶向肽药物偶联物及其合成方法和应用。

技术介绍

[0002]多肽药物是随着抗肿瘤药物研究发展出现的一类新药物。其可以通过将药物与多肽连接，降低药物毒副作用，提高抗肿瘤药物的靶向性等，进一步提高药物的治疗效果等。
[0003]程序性死亡配体1(PD
‑
L1)已被证明在抑制免疫系统T细胞的活性和在各种类型的癌症中上调起着重要作用。PPA1多肽(氨基酸序列为NYSKPTDRQYHFK)是对PD
‑
L1具有特异靶向的多肽。经研究发现，PPA1多肽能与结肠癌肿瘤细胞的PD
‑
L1特异性高结合，PPA1多肽对PD
‑
L1的阻断可以破坏抑制性PD
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1/PD
‑
L1免疫检查点并提供有希望的癌症治疗，同时PPA1的D肽构建体可防止血清中蛋白水解酶的降解。因此，PPA1多肽修饰的药物表现出出色的抗肿瘤以及靶向性，可有效进行抗肿瘤治疗。
[0004]但是尚未见利用PPA1多肽制备多肽药物偶联物，这是因为利用PPA1多肽制备多肽药物偶联物存在偶联合成技术的问题，比如：PPA1多肽具有自身的特点，它包括了很多活性基团，如羧基，羟基等，而小分子药物中经常包含氨基，羟基，羰基等，所以通常用酯化，酰胺化反应不能有效用于该偶联合成；多肽与小分子反应的溶剂溶解性和催化剂选择性，多肽药物偶联物的分离纯化方法的特殊性等。同时，由于多肽与药物连接后会改变各自的结构，得到的药物偶联物的生物活性是很难预期的(Tian T,Song Y,Li K,et al.Synthesis,Characterization,and Evaluation of Triptolide Cell
‑
Penetrating Peptide Derivative for Transdermal Delivery of Triptolide[J].Molecular pharmaceutics,2018,15(2):560
‑
570.)。因此，利用PPA1多肽制备多肽药物偶联物存在一定难度。
[0005]并非所有药物都能与PPA1多肽偶联形成多肽
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药物偶联物，即便可以形成多肽
‑
药物偶联物，也并非所有偶联物都具有理想的生物活性。研究一种对PD
‑
L1具有特异靶向作用，药效优良的PPA1多肽
‑
药物偶联物具有重要意义。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种PD
‑
L1靶向肽药物偶联物及其合成方法和应用。
[0007]本专利技术提供了一种PD
‑
L1靶向肽药物偶联物，所述偶联物的结构如式I所示：
[0008]D
‑
T
‑
PPA1
[0009]式I
[0010]其中，
[0011]PPA1为末端叠氮修饰的多肽PPA1，多肽PPA1的氨基酸序列为：NYSKPTDRQYHFK；
[0012]D为药物单元；
[0013]T为连接键；所述连接键的结构式为n为0～9的整数；R选自
[0014]进一步地，所述药物单元为细胞毒性药物、治疗自身免疫疾病的药物、抗炎的药物或抗肿瘤的药物。
[0015]进一步地，所述药物为多柔比星、松萝酸或喜树碱。
[0016]进一步地，所述偶联物的结构如下：
[0017][0018]进一步地，所述末端叠氮修饰的多肽PPA1的制备方法包括如下步骤：
[0019](1)采用Fmoc固相合成方法，在树脂上合成叠氮修饰的目标氨基酸序列；
[0020](2)将含目标氨基酸序列的树脂在裂解液中裂解，使叠氮修饰的氨基酸序列从树脂上洗脱下来，纯化后得目标氨基酸序列。
[0021]进一步地，步骤(1)中，所述Fmoc固相合成方法包括如下步骤：
[0022]A.将叠氮修饰的Fmoc
‑
赖氨酸和树脂加入无水DCM中，加入DIEA、甲醇，反应后即得载末端叠氮修饰的Fmoc
‑
赖氨酸的树脂；
[0023]B.将上述树脂用含30％哌啶的DMF溶液脱除Fmoc，根据多肽PPA1氨基酸序列加入Fmoc
‑
氨基酸、1
‑
羟基苯并三唑、苯并三氮唑
‑
四甲基脲六氟磷酸酯、DIEA反应，将第二个氨基酸接枝在树脂上；
[0024]C.重复步骤B的方法，在树脂上合成目标氨基酸序列。
[0025]进一步地，步骤(1)中，所述树脂为2
‑
氯三苯基甲基氯树脂；
[0026]和/或，步骤(2)中，所述裂解液由苯酚、乙二硫醇、苯甲硫醚、水和三氟乙酸组成；所述苯酚、乙二硫醇、苯甲硫醚、水和三氟乙酸的体积比为5：5：2.5：5：82.5；
[0027]和/或，步骤(2)中，所述纯化为HPLC纯化；所述HPLC纯化的条件为采用Newstyle反相半制备高效液相色谱分离系统；色谱柱Hedera ODS
‑
2反相硅胶半制备柱；流动相A为
0.3％醋酸水溶液，流动相B为ACN，梯度洗脱(0
→
30min:B 20％
→
40％)；流速8ml/min；检测波长215nm，260nm。
[0028]本专利技术还提供了一种制备前述的PD
‑
L1靶向肽药物偶联物的方法，它包括如下步骤：
[0029]1)将药物与连接键溶于有机溶剂中，加入分子筛和三氟乙酸，在惰性气体条件下反应，得到药物衍生物；
[0030]2)将三(苄基三唑甲基)胺、药物衍生物与叠氮修饰的多肽PPA1溶于有机溶剂中，加入催化剂，在惰性气体条件下反应，即得；
[0031]优选地，
[0032]步骤1)中，所述有机溶剂为甲醇；
[0033]和/或，步骤2)中，所述有机溶剂为DMF与H2O的混合溶剂；所述DMF与H2O的体积为3:1；
[0034]和/或，步骤2)中，所述催化剂为CuSO4.5H2O和抗坏血酸钠；所述CuSO4.5H2O和抗坏血酸钠的摩尔比为1:1。
[0035]本专利技术还提供了前述的PD
‑
L1靶向肽药物偶联物在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途；
[0036]优选地，所述肿瘤选自肺癌、尿道癌、大肠癌、前列腺腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、胃肠道间质瘤、宫颈癌、食道癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤或肉瘤。
[0037]本专利技术还提供了一种药物，它是以前述的PD<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PD
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L1靶向肽药物偶联物，其特征在于：所述偶联物的结构如式I所示：D
‑
T
‑
ppA1式I其中，PPA1为末端叠氮修饰的多肽PPA1，多肽PPA1的氨基酸序列为：NYSKPTDRQYHFK；D为药物单元；T为连接键；所述连接键的结构式为n为0～9的整数；R选自2.根据权利要求1所述的PD
‑
L1靶向肽药物偶联物，其特征在于：所述药物单元为细胞毒性药物、治疗自身免疫疾病的药物、抗炎的药物或抗肿瘤的药物。3.根据权利要求2所述的PD
‑
L1靶向肽药物偶联物，其特征在于：所述药物为多柔比星、松萝酸或喜树碱。4.根据权利要求1～3任一项所述的PD
‑
L1靶向肽药物偶联物，其特征在于：所述偶联物的结构如下：5.根据权利要求1～3任一项所述的PD
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L1靶向肽药物偶联物，其特征在于：所述末端叠氮修饰的多肽PPA1的制备方法包括如下步骤：(1)采用Fmoc固相合成方法，在树脂上合成叠氮修饰的目标氨基酸序列；(2)将含目标氨基酸序列的树脂在裂解液中裂解，使叠氮修饰的氨基酸序列从树脂上洗脱下来，纯化后得目标氨基酸序列。6.根据权利要求5所述的PD
‑
L1靶向肽药物偶联物，其特征在于：步骤(1)中，所述Fmoc固相合成方法包括如下步骤：A.将叠氮修饰的Fmoc
‑
赖氨酸和树脂加入无水DCM中，加入DIEA、甲醇，反应后即得载末
端叠氮修饰的Fmoc
‑
赖氨酸的树脂；B.将上述树脂用含30％哌啶的DMF溶液脱除Fmoc，根据多肽PPA1氨基酸序列加入Fmoc
‑
氨基酸、1
‑
羟基苯并三唑、苯并三氮唑
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：鲁军，邓赟，王茂林，肖乾龙，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：