【技术实现步骤摘要】
一种基于调控信号通路的小鼠模型的构建方法及其应用
本专利技术涉及生物
,具体涉及一种基于调控信号通路的小鼠模型的构建方法及其应用。
技术介绍
目前,耳聋问题受到人们的关注。2015年,约有5亿人听力丧失,约占世界人口的6.8%。这些数字远远高于2013年之前公布的估计数字,显示听力损失的人数在逐渐增加,说明全球听力保健的重要性日益突出。另外据WHO2018年数据显示有超过4.32亿成年人和3400万儿童患有致残性听力丧失,使其成为一个影响社会健康和经济的主要负担。听力障碍会导致社交孤立、抑郁和专业能力下降。目前临床上尚无疗效确切的内耳靶向性药物可用于治疗感音神经性聋。由于哺乳动物耳蜗毛细胞不可再生,因此如何使毛细胞在损伤后修复和再生,从而在根本上治疗感音神经性聋是近年来听觉领域研究的重点。而提供一种非人类的动物模型作为研究与试验平台以表征毛细胞的修复与再生,同样具有重要的意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足,本专利技术提出了一种基于调控信号通路的小鼠模型的构建方法及其应用。本专利 ...
【技术保护点】
1.一种小鼠模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:/n构建β-catenin敲除、Notch1敲除、以及两者双敲除的小鼠模型。在鼠龄为0或1天的时候,注射tamoxifen与EdU,鼠龄为7天时,解剖所述小鼠的基底膜进行免疫荧光实验,用myosin7a抗体标记毛细胞,用Sox2抗体标记支持细胞,并且对EdU+Sox2与EdU+Myo7a均阳性的细胞进行计数统计;/n分别分离野生型对照组、β-catenin过表达(β-cat OE)、Notch1-KO以及β-cat OE/Notch1-KO鼠龄7天天小鼠基底膜,分别提取其RNA进行测序;/n构建Atoh1过表达的小鼠,注 ...
【技术特征摘要】
1.一种小鼠模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
构建β-catenin敲除、Notch1敲除、以及两者双敲除的小鼠模型。在鼠龄为0或1天的时候,注射tamoxifen与EdU,鼠龄为7天时,解剖所述小鼠的基底膜进行免疫荧光实验,用myosin7a抗体标记毛细胞,用Sox2抗体标记支持细胞,并且对EdU+Sox2与EdU+Myo7a均阳性的细胞进行计数统计;
分别分离野生型对照组、β-catenin过表达(β-catOE)、Notch1-KO以及β-catOE/Notch1-KO鼠龄7天天小鼠基底膜,分别提取其RNA进行测序;
构建Atoh1过表达的小鼠,注射tamoxifen,小鼠取出基底膜进行免疫荧光实验,用myosin7a抗体标记毛细胞,用Sox2抗体标记支持细胞,并且对于EdU/Myo7a双阳性的细胞进行计数统计;
通过抑制YAP的表达调控Hippo信号通路,成球实验分析Hippo信号通路对表达Lgr5的祖细胞的增殖能力。
2.根据权利要求1所述的小鼠模型的构建方法,其特征在于,还包括以下步骤:
从Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2、Lgr5-EGFP-CreERT2和Foxg1-loxp/loxp均阳性的小鼠耳蜗基底膜消化制成的单细胞悬液中,分选出表达Lgr5的内耳干细胞进行培养,对所述表...
【专利技术属性】
技术研发人员:柴人杰,羌睿颖,张莎莎,程诚,高下,
申请(专利权)人:东南大学,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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