用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸及其制备制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种用于检测人淀粉样蛋白‑β的胶体金免疫层析试纸及其制备，该试纸包括底板，以及重叠设置在该底板上的吸水垫、层析膜、结合物释放垫和样品垫，结合物释放垫上包被有胶体金标记的单克隆抗体1F12；层析膜上的第一检测线包被有单克隆抗体1F12，第二检测线包被有单克隆抗体2C6，质控线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明专利技术通过对试纸的细节组成等进行改进，得到能够检测人淀粉样蛋白‑β的胶体金免疫层析试纸，能够用于检测不同形式人淀粉样蛋白‑β，如人淀粉样蛋白‑β单体、人淀粉样蛋白‑β寡聚体，填补了当前hAβ

【技术实现步骤摘要】
用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸及其制备
本专利技术属于生物
，更具体地，涉及一种用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸及其制备，该试纸利用了双抗体夹心检测抗原的原理，能够用于检测不同形式人淀粉样蛋白-β，包括人淀粉样蛋白-β单体(humanamyloidbetapeptide(1-42)Monomers,hAβ1-42Ms)、人淀粉样蛋白-β寡聚体(humanamyloidbetapeptide(1-42)Oligomers,hAβ1-42Os)，该试纸及基于该试纸构成的试剂盒能够应用于检测，实现快速、灵敏的检测。
技术介绍
阿兹海默病(Alzheimer'sdisease,AD)，又译为阿尔茨海默病，是一种神经退行性疾病，其特征是淀粉样斑块和神经原纤维缠结的大脑沉积。截至2020年，中国阿尔茨海默病每年新发患者超过100万例，阿尔茨海默病总患者人数接近750万例。随着人口结构步入老龄化，中国阿尔茨海默病患者总数至2029年预计将会超过1000万例，10年复合增长率达到4％。而这一增长在中国城市人口中尤为显著，10年复本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，包括底板，以及重叠设置在该底板上的吸水垫、层析膜、结合物释放垫和样品垫，其特征在于，所述结合物释放垫上包被有胶体金标记的单克隆抗体1F12；所述层析膜上设有两条检测线和一条质控线，记这两条检测线分别为第一检测线和第二检测线，所述第一检测线包被有单克隆抗体1F12，所述第二检测线包被有单克隆抗体2C6，所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；/n其中，分泌单克隆抗体1F12的杂交瘤细胞株Hustabomab-1F12于2020年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2020131；分泌单克隆抗体2C6的杂交瘤细胞株Hu...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，包括底板，以及重叠设置在该底板上的吸水垫、层析膜、结合物释放垫和样品垫，其特征在于，所述结合物释放垫上包被有胶体金标记的单克隆抗体1F12；所述层析膜上设有两条检测线和一条质控线，记这两条检测线分别为第一检测线和第二检测线，所述第一检测线包被有单克隆抗体1F12，所述第二检测线包被有单克隆抗体2C6，所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；
其中，分泌单克隆抗体1F12的杂交瘤细胞株Hustabomab-1F12于2020年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：C2020131；分泌单克隆抗体2C6的杂交瘤细胞株Hustabomab-2C6于2020年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：C2020132。


2.一种用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，包括底板，以及重叠设置在该底板上的吸水垫、层析膜、结合物释放垫和样品垫，其特征在于，所述结合物释放垫上包被有胶体金标记的单克隆抗体2C6；所述层析膜上设有两条检测线和一条质控线，记这两条检测线分别为第一检测线和第二检测线，所述第一检测线包被有单克隆抗体2C6，所述第二检测线包被有单克隆抗体1F12，所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；
其中，分泌单克隆抗体1F12的杂交瘤细胞株Hustabomab-1F12于2020年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：C2020131；分泌单克隆抗体2C6的杂交瘤细胞株Hustabomab-2C6于2020年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：C2020132。


3.如权利要求1或2所述用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述第一检测线包被有浓度为0.5-2mg/mL的单克隆抗体1F12，所述第二检测线包被有浓度为0.5-2mg/mL的单克隆抗体2C6，所述质控线包被有浓度为0.5-2mg/mL的羊抗鼠IgG抗体；
或者，所述第一检测线包被有浓度为0.5-2mg/mL的单克隆抗体2C6，所述第二检测线包被有浓度为0.5-2mg/mL的单克隆抗体1F12，所述质控线包被有浓度为0.5-2mg/mL的羊抗鼠IgG抗体。


4.如权利要求1所述用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述胶体金标记的单克隆抗体1F12，是按包括如下步骤的制备方法制备得到的：
S1：取10mL烧制完成的胶体金溶液，加入10-30μL0.1MK2CO3溶液，混匀，在磁力搅拌下加入含有100-300μg单克隆抗体1F12的溶液，混匀，静置10-30min；
S2：向所述步骤S1得到的溶液中逐滴加入100μL含10-20wt％BSA的溶液，混匀后静置10-30min；接着，4000r/min离心10-30min进行第一次离心，然后将第一次离心得到的上清移到另一离心管中，8000r/min离心10-30min进行第二次离心；接着，再将第二次离心得到的上清移到另一离心管中，12000r/min离心10-30min进行第三次离心，去上清；这三次离心所得的沉淀即为胶体金标记的单克隆抗体1F12的浓缩液。


5.如权利要求2所述用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述胶体金标记的单克隆抗体2C6，是按包括如下步骤的制备方法制备得到的：
S1：取10mL烧制完成的胶体金溶液，加入10-30μL0.1MK2CO3溶液，混匀，在磁力搅拌下加入含有100-300μg单克隆抗体2C6的溶液，混匀，静置10-30min；
S2：向所述步骤S1得到的溶液中逐滴加入100μL含10-20wt％BSA的溶液，混匀后静置10-30min；接着，4000r/min离心10-30min进行第一次离心，然后将第一次离心得到的上清移到另一离心管中，8000r/min离心10-30min进行第二次离心；接着，再将第二次离心得到的上清移到另一离心管中，12000r/min离心10-30min进行第三次离心，去上清；这三次离心所得的沉淀即为胶体金标记的单克隆抗体2C6的浓缩液。


6.如权利要求4或5所述用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述胶体金溶液中的胶体金为氯金酸在柠檬酸钠还原下烧制获得的30-40nm的胶体金颗粒。


7.如权利要求1或2所述用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述底板为PVC底板。


8.制备如权利要求1、3、4、6、7任意一项所述用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆海明，骆清铭，张立定，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42