草鱼黏液IgM重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种草鱼黏液IgM重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用。本发明专利技术草鱼黏液IgM重组表达蛋白的制备方法，包括如下步骤：构建黏液IgM表达载体pET28a(+)‑IgM；将构建的重组质粒pET28a(+)‑IgM转入大肠杆菌菌株，使用IPTG诱导表达草鱼黏液IgM。本发明专利技术还涉及一种抗草鱼IgM多克隆抗体的制备方法和抗草鱼IgM多克隆抗体的应用。本发明专利技术为研究草鱼黏液IgM的结构、来源、功能提供了重要工具，为草鱼疾病的预防及治疗提供了重要的技术手段，为其他养殖鱼类疾病的防治提供参考。

【技术实现步骤摘要】
草鱼黏液IgM重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用
本专利技术涉及一种多克隆抗体的制备方法及其应用，具体讲是一种抗草鱼(Paralichthysolivaceus)黏液IgM重组表达蛋白、多克隆抗体制备方法及其应用，属于鱼类分子免疫学

技术介绍
鱼类具有以免疫球蛋白(Ig)为中心的特异性免疫机制，在水环境中，其皮肤、鳃及其分泌的黏液等与外界环境直接接触，是鱼体抵抗外界病毒和细菌入侵的第一道防线，在免疫应答与免疫保护过程中起着极其重要的作用。鱼类黏液除含有非特异性免疫成分外，还含有免疫球蛋白。关于鱼类黏液免疫球蛋白与血清免疫球蛋白是否有着共同的起源，是否是一样的，目前还有很多争议。草鱼作为我国淡水养殖的四大家鱼之一，其养殖对我国农业经济增长具有重要的意义。目前，关于其免疫球蛋白的研究较多，已经报道了IgM、IgZ和IgD三种类型免疫球蛋白，及新型免疫球蛋白IgZ2、IgM-IgZ，其中，IgM、IgZ存在分泌型(即黏液IgM、IgZ)和膜结合型两种形式。本专利制备抗草鱼黏液IgM的多克隆抗体，可以为阐明IgM的结构、来源、功本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种草鱼黏液IgM重组表达蛋白的制备方法，包括如下步骤：构建黏液IgM表达载体pET28a(+)-IgM；将构建的重组质粒pET28a(+)-IgM转入大肠杆菌菌株，使用IPTG诱导表达草鱼黏液IgM。/n

【技术特征摘要】
1.一种草鱼黏液IgM重组表达蛋白的制备方法，包括如下步骤：构建黏液IgM表达载体pET28a(+)-IgM；将构建的重组质粒pET28a(+)-IgM转入大肠杆菌菌株，使用IPTG诱导表达草鱼黏液IgM。


2.一种抗草鱼IgM多克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：构建黏液IgM表达载体pET28a(+)-IgM；将构建的重组质粒pET28a(+)-IgM转入ArcticExpress菌株，使用IPTG诱导表达草鱼黏液IgM。


3.权利要求2所述的抗草鱼IgM多克隆抗体的制备方法，其特征在于：优化表达条件通过变复性的方式重溶目标蛋白，Ni柱亲和纯化获得目的蛋白。


4.权利要求2所述的抗草鱼IgM多克隆抗体的制备方法，其特征在于：以制备的草鱼黏液IgM蛋白作为抗原免疫新西兰白兔，经过3-4次免疫之后，经免疫学检测筛选方法，筛选出特异性分泌抗草鱼黏液IgM多克隆抗体。


5.权利要求2所述的抗草鱼IgM多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述的构建黏液IgM表达载体，是设计全长拼接引物获得草鱼黏液IgM基因，经EcoRV及XhoI双酶切后连接pET28a(+)。


6.权利要求4所述的抗草鱼IgM多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述的免疫学检测筛选方法是间接酶联免疫法和转印免疫印迹...

【专利技术属性】
技术研发人员：许国晶，张金路，杜兴华，孟庆磊，王志忠，李壮，巩俊霞，成慧中，张明磊，
申请(专利权)人：山东省淡水渔业研究院山东省淡水渔业监测中心，
类型：发明
国别省市：山东;37