脱乙酰氧头孢菌素C合成酶突变体及其在β-内酰胺抗生素母核合成中的应用制造技术

本发明专利技术公开了脱乙酰氧头孢菌素C合成酶突变体及其在β‑内酰胺抗生素母核合成中的应用。本发明专利技术公开的脱乙酰氧头孢菌素C合成酶突变体为对scDAOCS7的第61、225、160、162、179、73、102和/或158位进行突变得到的蛋白质，scDAOCS7的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。实验证明，scDAOCS7及其突变体可以催化6‑APA一步生成7‑ADCA；还可以催化青霉素G钾盐合成G‑7‑ADCA，且催化能力相较于scDAOCS7有显著的提高，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
脱乙酰氧头孢菌素C合成酶突变体及其在β-内酰胺抗生素母核合成中的应用
本专利技术涉及生物
中，脱乙酰氧头孢菌素C合成酶突变体及其在β-内酰胺抗生素母核合成中的应用。
技术介绍
7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA，分子式为C8H10N2O3S)是重要的头孢类抗生素合成的母核，目前采用7-ADCA合成的药物包括头孢羟氨、头孢拉定、头孢克罗等，都是国内外抗生素市场用量较大的抗生素药物。7-ADCA合成方法主要有两种，化学法和酶法。其中化学法首先以青霉素G钾盐为原料将其氧化为青霉素G亚砜，然后扩环重排产生7-苯乙酰氨基去乙酰氧基头孢烷酸，最后采用化学水解的方法制得7-ADCA。因为化学法合成7-ADCA工艺复杂，工序多，设备要求严格，反应过程中会大量使用化工原料和有机溶媒，存在劳动保护和环境污染问题等缺点而逐渐被酶法替代。目前生产7-ADCA的主要工艺为半合成酶法，以青霉素G钾盐为底物，经过过氧化氢催化扩环生成7-苯乙酰氨基去乙酰氧基头孢烷酸(G-7-ADCA)，然后通过青霉素酰化酶水解去掉侧链获得7-ADCA。然而，该过程本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.制备7-ADCA的方法，包括：以6-APA为底物，利用scDAOCS7或scDAOCS7突变蛋白质进行催化反应，得到7-ADCA；/n所述scDAOCS7的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2；所述scDAOCS7突变蛋白质为对scDAOCS7的第61、225、160、162、179、73、102和/或158位进行突变得到的蛋白质。/n

【技术特征摘要】
1.制备7-ADCA的方法，包括：以6-APA为底物，利用scDAOCS7或scDAOCS7突变蛋白质进行催化反应，得到7-ADCA；
所述scDAOCS7的氨基酸序列为序列表中SEQIDNo.2；所述scDAOCS7突变蛋白质为对scDAOCS7的第61、225、160、162、179、73、102和/或158位进行突变得到的蛋白质。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述scDAOCS7突变蛋白质为对scDAOCS7进行如下八种的全部、任七种、任六种、任五种、任四种、任三种、任两种或任一种改造得到的蛋白质：
X1、将scDAOCS7第61位的丙氨酸残基突变为天冬氨酸残基或谷氨酸残基；
X2、将scDAOCS7第225位的苯丙氨酸残基突变为亮氨酸残基或异亮氨酸残基；
X3、将scDAOCS7第160位的精氨酸残基突变为丙氨酸残基、缬氨酸残基、苏氨酸残基、异亮氨酸残基、半胱氨酸残基或甘氨酸残基；
X4、将scDAOCS7第162位的精氨酸残基突变为丙氨酸残基、缬氨酸残基、苏氨酸残基、异亮氨酸残基、半胱氨酸残基或甘氨酸残基；
X5、将scDAOCS7第179位的精氨酸残基突变为亮氨酸残基、异亮氨酸残基、丙氨酸残基、甘氨酸残基、脯氨酸残基、缬氨酸残基或苏氨酸残基；
X6、将scDAOCS7第73位的苏氨酸残基突变为丙氨酸残基、缬氨酸残基、异亮氨酸残基、亮氨酸残基、甲硫氨酸残基、半胱氨酸残基或丝氨酸残基；
X7、将scDAOCS7第102位的丝氨酸残基突变为丙氨酸残基、缬氨酸残基、异亮氨酸残基、亮氨酸残基、甲硫氨酸残基、苏氨酸残基或半胱氨酸残基；
X8、将scDAOCS7第158位的亮氨酸残基突变为丙氨酸残基、缬氨酸残基、异亮氨酸残基、甲硫氨酸残基、苏氨酸残基、半胱氨酸残基或丝氨酸残基。


3.制备7-ADCA的方法，包括：以6-APA为底物，利用表达scDAOCS7或权利要求1或2中所述scDAOCS7突变蛋白质的重组细胞或所述重组细胞的裂解物进行催化反应，得到7-ADCA。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述重组细胞通过向生物细胞中导入能表达scDAOCS7或权利要求1或2中所述scDAOCS7突...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙周通，杨大猛，曲戈，蒋迎迎，李超，刘保艳，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12