基于液相色谱-质谱分析毒品对单胺类转运体作用的方法技术

本发明专利技术属生物分析技术领域，涉及毒品对单胺类转运体作用的分析方法，具体涉及一种基于液相色谱‑质谱分析毒品对单胺类转运体作用的方法，本方法可用于研究毒品对多巴胺转运体和5‑羟色胺转运体作用机制。该方法灵敏度高、特异性强、安全性高，可用于替代传统的放射性同位素检测法。

【技术实现步骤摘要】
基于液相色谱-质谱分析毒品对单胺类转运体作用的方法
本专利技术属生物分析
，涉及毒品对单胺类转运体作用的分析方法，具体涉及一种基于液相色谱-质谱分析毒品对单胺类转运体作用的方法，本方法可用于研究毒品对多巴胺转运体和5-羟色胺转运体作用机制。该方法灵敏度高、特异性强、安全性高，可用于替代传统的放射性同位素检测法。
技术介绍
现有技术公开了神经系统中的单胺类转运体是若干毒品的主要作用靶点。单胺类转运体是SLC6溶质转运蛋白的一类，包括多巴胺转运体(dopaminetransporter，DAT)、5-羟色胺转运体(serotonintransporter，SERT)等。研究显示，毒品与单胺类转运体的作用主要分为两类，一类是作为单胺类转运体的底物，能促进单胺类神经递质的释放，如甲基苯丙胺；另一类是作为单胺类转运体的抑制剂，能抑制单胺类神经递质的重摄取，如可卡因；这两类作用均会导致细胞外的单胺类神经递质浓度上升。研究实践中，为了研究毒品与单胺类转运体的作用机制，使用高表达单胺类转运体的HEK293细胞模型是较为常用的方法。在通过转染技术使本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于液相色谱-质谱分析毒品对单胺类转运体作用的方法，其特征在于，其包括步骤，/n(1)构建DAT和SERT过表达HEK293细胞系；/n(2)建立检测HEK293细胞中DA和5-HT的LC-MS/MS检测分析技术；/n(3)制订毒品对DAT和SERT的重摄取抑制作用实验的操作流程；/n(4)制订毒品对DAT和SERT的促释放作用实验的操作流程。/n

【技术特征摘要】
1.基于液相色谱-质谱分析毒品对单胺类转运体作用的方法，其特征在于，其包括步骤，
(1)构建DAT和SERT过表达HEK293细胞系；
(2)建立检测HEK293细胞中DA和5-HT的LC-MS/MS检测分析技术；
(3)制订毒品对DAT和SERT的重摄取抑制作用实验的操作流程；
(4)制订毒品对DAT和SERT的促释放作用实验的操作流程。


2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所属步骤(2)中，包括：
1)样品前处理；
2)建立DA和5-HTLC-MS/MS检测方法，其中，
色谱条件：
流动相：A相：0.01％甲酸水溶液；B相：0.01％甲酸乙腈溶液；
流速：0.25mL/min；
柱温：45℃；
进样量：10μL；
进样盘温度：5℃；
梯度洗脱条件为：



质谱条件为：
电喷雾离子源(Electrosprayionsource，ESI)；喷雾电压(Sprayvoltage)：
正离子扫描(ESI+)3.0kV，鞘气(Sheathgas)：55Arb；辅助气(Auxgas)：5Arb。离子传输管温度(Iontransfertubetemperature)：350℃；雾化温度(Vaporizertemperature)：250℃。采用选择反应检测(SelectiveReactionMonitoring，SRM)扫描分析；
使用定性、定量两种离子对待分析对化合物进行定性确证，使用定量离子对进行定量分析，各分析物的质谱优化参数为：
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【专利技术属性】
技术研发人员：饶渝兰，林泽彬，刘晨阳，王昊，樊恩杉，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31